【技术实现步骤摘要】
布鲁氏菌A19bvfA基因缺失株及其构建和应用
本专利技术涉及一种基因缺失株的应用及其构建方法，具体地说，涉及布鲁氏菌A19bvfA基因缺失株及其构建和应用。
技术介绍
布鲁氏菌病是一种世界性的人畜共患病，每年估计有50万新病例。感染后可出现急性或隐匿性起病，伴有持续性、间歇性或不规则发热性疾病、疲劳、厌食、体重减轻、头痛、关节痛或全身疼痛。病情可能发展为慢性疾病，并伴有严重并发症。目前有170多个国家报道有布鲁氏菌病。在我国有除了澳门和台湾剩下地区都有人、畜有布病存在。布鲁氏菌很少见细菌的特殊结构。其毒性主要是其生存和繁殖的能力在专业和非专业的吞噬细胞。为此，布鲁氏菌破坏吞噬体的成熟，在受感染的真核细胞内破坏囊泡运输，并创造一个独特的细胞内生态位，使其增殖。由布鲁氏菌操纵子编码的IV型分泌系统(T4SS)被认为是一种重要的毒力因子。缺乏T4SS的突变体无法在巨噬细胞和上皮细胞以及小鼠毒力模型中存活和繁殖。T4SS可能的作用是将诱导复制生态位建立的效应分子注入宿主细胞使含布鲁氏菌的吞噬小体逃脱经典的内体转运途径，避免与晚期内...
【技术保护点】
1.布鲁氏菌A19 bvfA基因缺失株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：/nS1，利用引物Mpp-5F和Mpp-5R从布鲁氏菌基因组上扩增上游同源重组手臂，利用引物Mpp-3F和Mpp-3R扩增下游同源重组手臂，利用引物Mpp-KnF和Mpp-KnR从pKD4质粒上扩增卡那霉素抗性基因，利用引物Mpp-5F和Mpp-3R将Mpp基因上、下游同源重组手臂与卡那霉素抗性基因通过融合PCR技术连接，得到完整打靶片段ΔMpp::Kn；所述引物Mpp-5F、Mpp-5R、Mpp-3F、Mpp-3R、Mpp-KnF和Mpp-KnR的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-6所示；/nS...
【技术特征摘要】
1.布鲁氏菌A19bvfA基因缺失株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1，利用引物Mpp-5F和Mpp-5R从布鲁氏菌基因组上扩增上游同源重组手臂，利用引物Mpp-3F和Mpp-3R扩增下游同源重组手臂，利用引物Mpp-KnF和Mpp-KnR从pKD4质粒上扩增卡那霉素抗性基因，利用引物Mpp-5F和Mpp-3R将Mpp基因上、下游同源重组手臂与卡那霉素抗性基因通过融合PCR技术连接，得到完整打靶片段ΔMpp::Kn；所述引物Mpp-5F、Mpp-5R、Mpp-3F、Mpp-3R、Mpp-KnF和Mpp-KnR的核苷酸序列如SEQIDNO.1-6所示；
S2，将打靶片段ΔMpp::Kn克隆入自杀质粒pCVD44...
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