一种耐盐纤维素分解菌的快速分离方法技术

一种耐盐纤维素分解菌的快速分离方法，样品中的耐盐菌株的分离与纯化；用荧光法快速检测筛选得到菌株的β‑葡萄糖苷酶活性；将不同β‑葡萄糖苷酶活性的菌株接入羧甲基纤维素钠（CMC‑Na）液体培养基，观察菌株生长情况，并测其粘度。本发明专利技术高效批量、操作简单和方便快捷等优点，大大提高了工作效率，结果准确可靠。

【技术实现步骤摘要】
一种耐盐纤维素分解菌的快速分离方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种耐盐纤维素分解菌的快速分离方法。
技术介绍
我国盐碱土壤面积大，分布广泛，主要分布于东北、华北、西北及沿海地区，是重要的后备耕地资源。盐碱土壤理化性质差，土壤肥力及微生物活性较正常土壤低，不利于植物生长。盐碱土壤重要的营养来源是植物凋落物，其最主要成分是纤维素。因而分离能够降解纤维素的耐盐微生物对于盐碱土壤的营养循环具有重要意义。纤维素是构成植物细胞壁的主要物质，广泛分布于自然界中，是世界上最丰富的天然有机物，也是重要的可再生资源。纤维素是重要的造纸原料，以纤维素为原料的产品也广泛应用于塑料、化工等领域。纤维素中存在许多高能的氢键，使其水解、利用均很困难，且不完全利用会对环境造成一定的污染。目前，降解纤维素主要有两种方法，一是物理化学法，但存在设备复杂且成本高的缺点；二是微生物法，该方法因高效且易于操作的优点而受到重视。纤维素酶是指能水解纤维素的β-1,4葡萄糖苷键，使纤维素变成纤维二糖和葡萄糖的一组酶的总称。它不是单一酶，目前一般认为：纤维素酶包括3类本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种耐盐纤维素分解菌的快速分离方法，其特征在于包括以下步骤：/n（1）样品中的耐盐菌株的分离与纯化：称取1g盐碱土，加入9mL无菌水，30℃恒温振荡30min，取样品悬液，用无菌水稀释成10

【技术特征摘要】
1.一种耐盐纤维素分解菌的快速分离方法，其特征在于包括以下步骤：
（1）样品中的耐盐菌株的分离与纯化：称取1g盐碱土，加入9mL无菌水，30℃恒温振荡30min，取样品悬液，用无菌水稀释成10－1、10－2、10－3的溶液，分别取200μL稀释液在盐浓度为2.5%的LB固体培养基上均匀涂布，置于30℃恒温培养箱培养2~3天，直至长出单菌落，将单菌落划线纯化培养，得到纯菌株，挑取纯菌株接种于液体培养基进行富集培养；
（2）用荧光法快速检测筛选得到菌株的β-葡萄糖苷酶活性：取1mL菌液，5000rpm离心5min使菌体沉淀，弃上清液，加1mL无菌水，涡旋1min，用移液枪取菌悬液100μL加到96孔板中，然后加MES缓冲液，最后加β-葡萄糖苷酶底物溶液，用移液枪混合均匀，25℃-30℃室温培养30min，4000rmp离心4min，进行荧光检测，同时做平行、标曲和底物对照实验，用菌株的β-葡萄糖苷酶活性表征菌株的纤维素能力；
（3）将不同β-葡萄糖苷酶活性的菌株接入羧甲基纤维素钠（CMC-Na）液体培养基，观察菌株生长情况，并测其粘度：选取β-葡萄糖苷酶活性不同的菌株，接入羧甲基纤维素钠（C...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈瑞蕊，俞冰倩，董洋，林先贵，
申请(专利权)人：中国科学院南京土壤研究所，
类型：发明
国别省市：江苏;32