一种用光合促进剂提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法技术

本发明专利技术提供了一种用光合促进剂提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法，属于藻类生物技术领域，特别是一种用光合促进剂提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法；本发明专利技术通过将三角褐指藻于自制的培养基中培养，当三角褐指藻达到对数生长期时，添加光合诱导素PIF，可提高三角褐指藻的细胞生长，且可快速诱导岩藻黄素相关基因表达，促进岩藻黄素快速积累，当三角褐指藻培养达到对数生长期时添加光合诱导素，三角褐指藻的细胞量提高17.7％，岩藻黄素的含量提高了44％，成功的解决了现有技术中岩藻黄素稀缺的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种用光合促进剂提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法
本专利技术涉及藻类生物
，特别是涉及一种用光合促进剂提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法。
技术介绍
岩藻黄素(Fucoxanthin)是类胡萝卜素中叶黄素类的一种天然色素，研究表明，岩藻黄素具有多种促进健康的特性，如抗肥胖、抗糖尿病、降血压、抗氧化、抗癌、神经保护作用、治疗眼部炎症等，作为药物、护肤美容产品以及保健品在市场上得以广泛的应用；其中，岩藻黄素的抗氧化特性被认为是发挥有益健康作用的主要机制。岩藻黄素广泛存在于各种藻类、海洋浮游植物、水生贝壳类等动植物中；最早用于提取岩藻黄素的物质主要为大型藻，例如海带、羊栖菜等，因养殖成本高和提取含量低等原因限制了岩藻黄素的开发利用；国内外研究者发现，三角褐指藻中也含有岩藻黄素，且具有生长繁殖快、易人工培养等优势，但岩藻黄素在三角褐指藻中的含量极低，导致岩藻黄素价格极其昂贵，因此，急需提供一种可以提高三角褐指藻中岩藻黄素含量的方法。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用光合促进剂提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法，该制备方法克服了上述现有技术中存在的缺陷，本专利技术通过将三角褐指藻于自制的培养基中培养，当三角褐指藻达到对数生长期时，添加光合诱导素PIF作为光合促进剂，通过在快速生长期时添加光合诱导素，可提高三角褐指藻的细胞生长，且可快速诱导岩藻黄素相关基因表达，促进岩藻黄素快速积累。为实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：本专利技术提供了一种用光合促进剂提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法，具体包括如下步骤：(1)接种培养：将三角褐指藻接种到改良的F/2培养液中接种培养，培养过程中定时摇藻；(2)生长测定：取三角褐指藻藻液，用紫外分光光度计测定其吸光度，并将其转化为细胞数，确定细胞的生长周期；(3)光合诱导素添加：待三角褐指藻生长达到对数生长期时，添加光合诱导素，继续培养40～60h，测定三角褐指藻中岩藻黄素的含量。优选的，所述改良的F/2培养液的组成为：硝酸钠74.8㎎、磷酸二氢钠4.4㎎、硅酸钠8.4～16.7㎎、F/2微量元素溶液1mL、F/2维生素溶液1mL、消毒海水1000mL。优选的，所述F/2微量元素溶液的组成为：硫酸锌23㎎、硫酸铜10㎎、氯化锰178㎎、柠檬酸铁3.9mg、钼酸钠7.3mg、乙二胺四乙酸钠4.35mg、氯化钴12㎎、纯净水1000mL。优选的，所述F/2微量元素溶液的组成为：维生素B120.5㎎、维生素H0.5㎎、维生素B1100㎎、纯净水1000mL。优选的，所述接种培养的温度为20±1℃，光照强度为60～80μmol/(m2·s)，光暗周期交替进行，每个周期为12h。优选的，所述接种培养时，三角褐指藻和改良的F/2培养液的重量比为1:2～3。优选的，步骤(2)中，将藻液吸光度转变成细胞数的方法如下：取4mL藻液于UV-5200型紫外分光光度计上测定三角褐指藻藻液在680nm处的吸光值，根据回归方程y＝124.14x-9.5138(R2＝0.9983)，计算三角褐指藻的细胞密度；其中x为680nm处的吸光值，y为三角褐指藻的细胞密度。优选的，所述光合诱导素的添加浓度为0.01～10μg/L。优选的，所述三角褐指藻中岩藻黄素含量的测定方法如下：(1)取光合诱导剂处理过的藻液50mL，于4℃、5000rpm下离心分离10min得藻泥，真空冷冻干燥24h后得到固态藻；(2)将固态藻与无水乙醇以1:40(g/mL)的比例混合，于60℃下避光浸提1h，去除上清液，再加入等体积的无水乙醇混合，重复浸提1h，得到浸提液；(3)将浸提液在5000rpm下离心10min，取上清液测定其在A445处的吸光度，利用C＝(1000×A445×N×V)/(A1％cm×M×100)计算出岩藻黄素的含量；其中N表示稀释倍数；V表示提取液的体积；M为样品质量；A1％cm为1600。本专利技术的有益技术效果：本专利技术提供了一种用光合促进剂提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法，本专利技术通过将三角褐指藻于自制的培养基中培养，当三角褐指藻达到对数生长期时，添加光合诱导素PIF，通过添加光合诱导素作为光合促进剂，可提高三角褐指藻的细胞生长，且可快速诱导岩藻黄素相关基因表达，促进岩藻黄素快速积累；实验结果表明，当三角褐指藻培养达到对数生长期时添加光合诱导素，三角褐指藻的细胞量提高17.7％，岩藻黄素的含量提高了44.2％，取得了较优的技术效果。附图说明图1为实施例和对比例处理后对三角褐指藻细胞生长的影响；图2为实施例和对比例处理后对三角褐指藻中岩藻黄素含量的影响。具体实施方式本专利技术提供了一种用光合促进剂提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法，具体包括如下步骤：(1)接种培养：将三角褐指藻接种到改良的F/2培养液中接种培养，培养过程中定时摇藻；(2)生长测定：取三角褐指藻藻液，用紫外分光光度计测定其吸光度，并将其转化为细胞数，确定细胞的生长周期；(3)光合诱导素添加：待三角褐指藻生长达到对数生长期时，添加光合诱导素，继续培养40～60h，测定三角褐指藻中岩藻黄素的含量。在本专利技术中，接种培养时，所述改良后的F/2培养液的组成优选为：硝酸钠74.8㎎、磷酸二氢钠4.4㎎、硅酸钠8.4～16.7mg、F/2微量元素溶液1mL、F/2维生素溶液1mL、消毒海水1000mL；其中所述F/2微量元素溶液的组成优选为：硫酸锌23mg、硫酸铜10mg、氯化锰178mg、柠檬酸铁3.9mg、钼酸钠7.3mg、乙二胺四乙酸钠4.35mg、氯化钴12mg、纯净水1000mL；所述F/2微量元素溶液的组成优选为：维生素B120.5mg、维生素H0.5mg、维生素B1100mg、纯净水1000mL；所述培养液为专利技术人自行配置，该培养液更接近于其生长环境，可满足三角褐指藻的生长需求，同时添加各种营养元素，为其提供了丰富的营养；所述培养接种过程中，接种培养的温度优选为20±1℃，光照强度优选为60～80μmol/(m2·s)，更优选为70μmol/(m2·s)，光照培养时，光暗周期交替进行，每个周期时间为12h；培养过程中，不定时的进行摇藻操作，便于更换三角褐指藻的位置，每日摇藻优选5～9次；培养接种时，三角褐指藻和改良F/2培养液的重量比优选为1:2～3，更优选为1:2。在本专利技术中，所述接种培养的过程中，对藻液进行生长监测，每日取三角褐指藻的藻液，用UV-5200型紫外分光光度计(上海元析仪器有限公司)测定其吸光度，并根据回归方程y＝124.14x-9.5138(R2＝0.9983)，计算三角褐指藻的细胞密度，其中x为680nm处的吸光值，y为三角褐指藻的细胞密度。当通过计算得到三角褐指藻的细胞数，判断其生长达到对数生长期时(三角褐指藻接种后的4天左右可达到对数生长期)，添加光合诱导素，其中光合诱导素的添加浓度为0.01～10本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用光合促进剂提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法，具体包括如下步骤：/n(1)接种培养：将三角褐指藻接种到改良的F/2培养液中接种培养，培养过程中定时摇藻；/n(2)生长测定：取三角褐指藻藻液，用紫外分光光度计测定其吸光度，并将其转化为细胞数，确定细胞的生长周期；/n(3)光合诱导素添加：待三角褐指藻生长达到对数生长期时，添加光合诱导素，继续培养40～60h，测定三角褐指藻中岩藻黄素的含量。/n

【技术特征摘要】
20200117 CN 20201005465671.一种用光合促进剂提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法，具体包括如下步骤：
(1)接种培养：将三角褐指藻接种到改良的F/2培养液中接种培养，培养过程中定时摇藻；
(2)生长测定：取三角褐指藻藻液，用紫外分光光度计测定其吸光度，并将其转化为细胞数，确定细胞的生长周期；
(3)光合诱导素添加：待三角褐指藻生长达到对数生长期时，添加光合诱导素，继续培养40～60h，测定三角褐指藻中岩藻黄素的含量。


2.根据权利要求1所述的用光合促进剂提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法，其特征在于，所述改良的F/2培养液的组成为：硝酸钠74.8㎎、磷酸二氢钠4.4㎎、硅酸钠8.4～16.7㎎、F/2微量元素溶液1mL、F/2维生素溶液1mL、消毒海水1000mL。


3.根据权利要求2所述的用光合促进剂提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法，其特征在于，所述F/2微量元素溶液的组成为：硫酸锌23㎎、硫酸铜10㎎、氯化锰178㎎、柠檬酸铁3.9mg、钼酸钠7.3mg、乙二胺四乙酸钠4.35mg、氯化钴12㎎、纯净水1000mL。


4.根据权利要求2所述的用光合促进剂提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法，其特征在于，所述F/2微量元素溶液的组成为：维生素B120.5㎎、维生素H0.5㎎、维生素B1100㎎、纯净水1000mL。


5.根据权利要求1所述的用光合促进剂提高三角褐指藻岩藻黄素含量的方法，其特征在于，所述接种培养的温度为20±1℃，光照强度为60～80μmol/(m2·s)，...

【专利技术属性】
技术研发人员：李申睿，龚一富，方清姝，郑小恽，韦凤娟，王何瑜，徐润洁，
申请(专利权)人：宁波大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33