基于Illumina测序平台的多重单细胞简化代表性甲基化文库的构建方法技术

本发明专利技术提供了一种基于Illumina测序平台的用于构建多重单细胞简化代表性甲基化文库的方法，包括：(1)单细胞裂解或微量DNA提取和纯化；(2)限制性内切酶Msp I消化；(3)末端修复和3’端加A；(4)带标签的甲基化接头连接；(5)亚硫酸氢盐转化非甲基化胞嘧啶；(6)甲基化文库PCR富集；(7)对相似大小的甲基化文库进行混合和Illumina平台测序。本发明专利技术不仅解决了单细胞甲基化测序起始量不足的问题，同时通过对每个单细胞样本引入双重标签序列还可以进行大批量操作处理，易于实现自动化流程。此方法不仅降低了每个样本的甲基化文库构建成本，同时还缩短了文库的构建时间。

【技术实现步骤摘要】
基于Illumina测序平台的多重单细胞简化代表性甲基化文库的构建方法
本专利技术涉及分子生物学领域，具体涉及一种基于Illumina测序平台的多重单细胞简化代表性甲基化文库的构建方法。
技术介绍
DNA甲基化(DNAmethylation)是DNA化学修饰的一种形式，能够在不改变DNA序列的前提下，改变遗传表现。DNA甲基化是指在DNA甲基化转移酶的作用下，在基因组CpG二核苷酸的胞嘧啶5'碳位共价键结合一个甲基基团。大量研究表明，DNA甲基化能引起染色质结构、DNA构象、DNA稳定性及DNA与蛋白质相互作用方式的改变，从而控制基因表达。在哺乳动物中CpG以两种形式存在：一种是分散于DNA序列中；另一种呈现高度聚集状态，人们称之为CpG岛(CpGisland)。在正常组织里，70％～90％散在的CpG是被甲基修饰的，而与之相反，大小为100-1000bp左右且富含CpG二核苷酸的CpG岛，则往往非甲基化的。CpG双核苷酸在人类基因组中的分布很不均一，而在基因组的某些区段，CpG保持或高于正常概率。CpG岛主要位于基因的启动子(本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种基于Illumina测序平台的多重单细胞简化代表性甲基化文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：/n(1)细胞裂解，释放基因组DNA；/n(2)限制性内切酶消化基因组DNA；/n(3)DNA末端修复以及3’端加A；/n(4)甲基化接头连接；/n(5)亚硫酸氢盐转化甲基化文库；/n(6)甲基化文库的PCR富集；/n(7)对片段大小相似的甲基化文库进行混合和Illumina平台测序。/n

【技术特征摘要】
1.一种基于Illumina测序平台的多重单细胞简化代表性甲基化文库的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)细胞裂解，释放基因组DNA；
(2)限制性内切酶消化基因组DNA；
(3)DNA末端修复以及3’端加A；
(4)甲基化接头连接；
(5)亚硫酸氢盐转化甲基化文库；
(6)甲基化文库的PCR富集；
(7)对片段大小相似的甲基化文库进行混合和Illumina平台测序。


2.根据权利要求1所述的基于Illumina测序平台的多重单细胞简化代表性甲基化文库的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的细胞为单细胞、多细胞或亚纳克级别的纯化DNA样本。


3.根据权利要求1所述的基于Illumina测序平台的多重单细胞简化代表性甲基化文库的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的细胞裂解采用细胞裂解液，所述的细胞裂解液包括：Tris-HCl、EDTA、NaCl和SDS，其中，细胞裂解液中Tris-HCl的浓度为10mM，细胞裂解液中EDTA的浓度为10mM，细胞裂解液中NaCl的浓度为10mM，细胞裂解液中SDS的质量浓度为0.001g/L。


4.根据权利要求1所述的基于Illumina测序平台的多重单细胞简化代表性甲基化文库的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的限制性内切酶为MspI或HaeIII。


5.根据权利要求1所述的基于Illu...

【专利技术属性】
技术研发人员：谷红仓，许佩松，王云飞，车仙荣，
申请(专利权)人：杭州圣庭医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33