一种脑膜炎病原体宏基因组二代测序文库的构建方法及其试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种脑膜炎病原体宏基因组二代测序文库的构建方法及其试剂盒。本发明专利技术首先提供了一种脑膜炎病原体宏基因组二代测序文库的构建方法，通过一步反应对片段化后的脑膜炎病原体DNA进行末段修复、磷酸化和加A，接头连接及纯化，PCR富集，纯化，即得所述脑膜炎病原体宏基因组二代测序文库。该方法及其试剂盒能够实现末段修复、磷酸化和加A一步完成，建库步骤少、时间短、成本低，通过加入外源基因组DNA解决了因脑脊液样本核酸量极低难以建库成功的问题，接头连接和文库扩增获得了特异性极高的宏基因组二代测序文库，有效文库比例高；因此，本发明专利技术的方法或试剂盒在脑膜炎病原体宏基因组二代测序文库构建中具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种脑膜炎病原体宏基因组二代测序文库的构建方法及其试剂盒
本专利技术属于测序文库构建
更具体地，涉及一种脑膜炎病原体宏基因组二代测序文库的构建方法及其试剂盒。
技术介绍
随着测序技术的发展，二代测序以准确性高、通量高、价格低的优势成为测序技术的主流。在个性化医疗、遗传疾病和临床诊断等方面，二代测序已经成为一种普遍的技术手段；例如，肿瘤全外显子组测序、全外显子组遗传检测。宏基因组测序(MetagenomicsSequencing)是对环境样品中的微生物群落的基因组进行高通量测序，主要研究微生物种群结构、基因功能活性、微生物之间的相互协作关系以及微生物与环境之间的关系。宏基因组测序研究摆脱了微生物分离纯培养的限制，扩展了微生物资源的利用空间，为环境微生物群落的研究提供了有效工具，近年来，宏基因组测序已成为热点，而市场上鲜少有针对宏基因组二代测序有效的建库试剂盒。现有构建宏基因组二代测序文库的方法主要包括以下五个步骤：(1)对DNA进行片段化，纯化；(2)对片段化产物进行末端修复，纯化；(3)对末端修复产物进行加A，纯化；(4本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脑膜炎病原体宏基因组二代测序文库的构建方法，其特征在于，通过一步反应对片段化后的脑膜炎病原体DNA进行末段修复、磷酸化和加A，接头连接及纯化，PCR富集，纯化，即得所述脑膜炎病原体宏基因组二代测序文库。/n

【技术特征摘要】
1.一种脑膜炎病原体宏基因组二代测序文库的构建方法，其特征在于，通过一步反应对片段化后的脑膜炎病原体DNA进行末段修复、磷酸化和加A，接头连接及纯化，PCR富集，纯化，即得所述脑膜炎病原体宏基因组二代测序文库。


2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
S1.片段化后的脑膜炎病原体DNA与反应液A、酶混合液B进行一步反应；
S2.步骤S1的产物与反应液C、反应液D和酶E进行接头连接反应，纯化；
S3.步骤S2的产物与反应液F、反应液G进行文库扩增，纯化，即得所述脑膜炎病原体宏基因组二代测序文库。


3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S1所述反应液A包括0.2～0.3MTris-HCl、0.02～0.08MMgCl2、0.02～0.07MDTT、1～1.5mMATP、2.2～2.7mMdATP、2.2～2.7mMdGTP、2.2～2.7mMdCTP、2.2～2.7mMdTTP和0.1～0.15g/mLPEG4000。


4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S1所述酶混合液B为TaqDNA聚合酶、T4DNA聚合酶和T4核苷酸激酶的混合。


5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤S1所述一...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈杰，吴轶兰，谢丽丽，张清文，梁思杏，
申请(专利权)人：广州赛哲生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44