皂苷提取制造技术

含有至少QS‑21主峰和2018组分的皂树（

Saponin extraction

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】皂苷提取
本申请大体上涉及皂苷提取物，特别是皂树（QuillajasaponariaMolina）的粗制水性提取物、它们的制备方法和相关方面。专利技术背景在疫苗中包括佐剂以改进体液和细胞免疫反应，特别是在弱免疫原性亚单位疫苗的情况下。类似于被病原体自然感染，佐剂依赖于激活先天免疫系统以促进持久的获得性免疫。TheAdjuvantSystem01(AS01)是含有两种免疫刺激剂3-O-脱酰基-4’-单磷酰脂质A（3-O-desacyl-4’-monophosphoryllipidA）（3D-MPL）和QS-21的基于脂质体的佐剂（Garcon和VanMechelen,2011；Didierlaurent等人,2017）。3D-MPL是来自沙门氏菌（Salmonellaminnesota）的脂多糖的无毒衍生物（其是TLR4激动剂），QS-21是来自南美树木皂树（QuillajasaponariaMolina）树皮的天然皂苷提取物（Kensil等人,1991；Ragupathi等人,2011）。AS01包括在最近开发的疟疾疫苗（RTS,S-Mosquirix®）和带状疱疹疫苗（HZ/su-Shingrix®）和正在开发中的对抗例如人免疫缺陷病毒和结核杆菌之类的病原体的多种候选疫苗中。AS01注射在动物模型中导致先天免疫的迅速和瞬时激活。嗜中性粒细胞和单核细胞在免疫时被迅速募集到引流淋巴结（dLN）。此外，AS01诱发T细胞活化所需的MHCIIhigh树状细胞（DC）的募集和激活（DidierlaurentA.M.等人,2014）。也可获得关于AS01的组分的作用机制的一些数据。3D-MPL通过TLR4发出信号，以刺激NF-ĸB转录活性和细胞因子产生，并直接激活人体和小鼠中的抗原呈递细胞（APCs）（DeBecker等人,2000；Ismaili等人,2002；Martin等人,2003；Mata-Haro等人,2007）。QS-21促进小鼠的高抗原特异性抗体反应和CD8+T细胞反应（Kensil和Kammer,1998；Newman等人,1992；Soltysik等人,1995）和人类的抗原特异性抗体反应（Livingston等人,1994）。由于其物理性质，认为QS-21可能在体内充当危险信号（Lambrecht等人,2009；Li等人,2008）。尽管QS-21已显示激活ASC-NLRP3炎性小体和随后的IL-1β/IL-18释放（Marty-Roix,R.等人,2016），尚未清楚地界定皂苷的佐剂效应中涉及的精确分子途径。关于被批准为人类药物的产品的任何组分，QS-21的生产要求使用批准的制备方法和小心控制最终组成以确保其符合所需规范。现有方法的修改需要昂贵和耗时的重新验证，仍偏离规范也会导致浪费。仍然需要用于制备QS-21的稳健方法和限定组成的QS-21材料。专利技术概述在第一方面中，本专利技术提供一种皂树的粗制水性提取物，其含有至少QS-21主峰和2018组分，其中如通过在214nm的UV吸光度测得的2018组分/QS-21主峰的比率≤0.075。在第二方面中，本专利技术提供一种皂树的粗制水性提取物，其含有QS-21AV1QS-21AV21856组分：和2002组分：（统称为QS-21主峰组分），和2018组分：其中如通过在214nm的UV吸光度测得的2018组分/QS-21主峰组分的比率≤0.075。在第三方面中，本专利技术提供一种制备皂树的粗制水性提取物的方法，其包括下列步骤：a)选择具有适当的2018组分含量的皂树材料，b)在其中控制2018组分生成的条件下由所述材料制备水性提取物。附图简述图1:粗制水性皂树树皮提取物的HPLC色谱图图2:粗制水性皂树树皮提取物的HPLC-UV色谱图图3:粗制水性皂树树皮提取物的UPLC-UV色谱图图4实验条件和观察到的对2018组分/QS-21主峰比率的影响的制表图5观察到的由pH和温度条件产生的对2018组分/QS-21主峰比率的影响的曲面图图6在pH3.8下随时间经过温度对2018组分/QS-21主峰比率的影响。详述如上文提到，被批准为人类药物的产品的任何组分要求使用批准的制备方法和小心控制最终组成以确保其符合所需规范。偏离规范会导致浪费。但是，安全性和效力研究依赖于测试限定的组成，因此组分规范的调整带来风险。现有方法的修改需要昂贵和耗时的重新验证。本专利技术人已经发现，皂树的粗制水性提取物在组成上有差异，特别是就在本文中被称为2018组分的组分而言，并且采用目前批准的制备方法难以分离过量的2018组分。因此，本专利技术提供实现限定组成的皂树的粗制水性提取物的方法，其适用于在进一步加工后制备一致的纯化提取物。组成的变化可能归因于源材料中的天然偏差和/或归因于在提取皂苷以获得粗制水性提取物时施加的条件。本专利技术人开发出限定组成的皂树的粗制水性提取物，特别是在与主要关注组分的含量相比的2018组分含量方面。所述粗制水性提取物有利地提供用于获得纯化皂苷提取物的合适起始材料，所述纯化皂苷提取物特别适合用作在与抗原一起配制并给药于对象时提供高效免疫反应和可接受的反应原性水平的免疫刺激剂。QuilA是从南美树木皂树中分离的皂苷制品并最初由Dalsgaard等人在1974年描述为具有佐剂活性（“Saponinadjuvants”,Archiv.fürdiegesamteVirusforschung,Vol.44,SpringerVerlag,Berlin,p243-254）。已通过HPLC分离QuilA的纯化级分，其保持佐剂活性而没有与QuilA相关的毒性（参见例如EP0362279）。各种级分已被发现具有佐剂活性，如QS-7、QS-17、QS-18和QS-21，但它们的毒性明显不同。本文所用的术语‘皂苷提取物’是指皂树的提取物。本文所用的术语‘三萜苷（triterpenoidglycosides）’是指具有通过经糖苷键连接的糖衍生的三萜核的一种或多种实体。术语‘2018组分’是指在图3中确定为‘2018’的三萜苷。合适地，2018组分在本文所述的UPLC-UV方法中可用大约5.8min的保留时间和具有2017.9的单同位素分子量的峰的主要组分来确定。主要2018组分已通过MS/MS确定为具有以下推定结构。术语‘1988组分’是指在图3中确定为QS-21主峰的一部分并具有1987.9的单同位素分子量的三萜苷。1988组分可由QS-21AV1和QS-21AV2组成。术语‘1856组分’是指在图3中确定为QS-21主峰的一部分并具有1855.9的单同位素分子量的三萜苷。1856组分可由下式组成：。术语‘2002组分’是指在图3中确定为QS-21主峰的一部分并具有本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.皂树的粗制水性提取物，其含有至少QS-21主峰和2018组分，其中如通过在214 nm的UV吸光度测得的2018组分/QS-21主峰的比率≤0.075。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171221 EP 17209796.6;20171201 US 62/5935551.皂树的粗制水性提取物，其含有至少QS-21主峰和2018组分，其中如通过在214nm的UV吸光度测得的2018组分/QS-21主峰的比率≤0.075。


2.权利要求1的粗制水性提取物，其中如通过在214nm的UV吸光度测得的2018组分/QS-21主峰的比率≤0.064。


3.权利要求1或2的粗制水性提取物，其中如通过在214nm的UV吸光度测得的2018组分/QS-21主峰的比率为至少0.005。


4.权利要求3的粗制水性提取物，其中如通过在214nm的UV吸光度测得的2018组分/QS-21主峰的比率为至少0.01。


5.权利要求1至4任一项的粗制水性提取物，其中如通过在214nm的HPLC-UV吸光度测定的前峰/QS-21主峰比率为0.45或更低。


6.权利要求5的粗制水性提取物，其中如通过在214nm的HPLC-UV吸光度测定的前峰/QS-21主峰比率为0.4或更低。


7.权利要求1至6任一项的粗制水性提取物，其中如通过在214nm的HPLC-UV吸光度测定的前峰/QS-21主峰比率为0.05或更高。


8.权利要求7的粗制水性提取物，其中如通过在214nm的HPLC-UV吸光度测定的前峰/QS-21主峰比率为0.1或更高。


9.权利要求1至8任一项的粗制水性提取物，其中皂树的粗制水性提取物的水溶液中的QS-21主峰含量为至少1g/L。


10.权利要求9的粗制水性提取物，其中皂树的粗制水性提取物的水溶液中的QS-21主峰含量为至少2g/L。


11.权利要求10的粗制水性提取物，其中皂树的粗制水性提取物的水溶液中的QS-21主峰含量为至少2.5g/L。


12.权利要求11的粗制水性提取物，其中皂树的粗制水性提取物的水溶液中的QS-21主峰含量为至少2.8g/L。


13.皂树的粗制水性提取物，其含有：
QS-21AV1



QS-21AV2



1856组分：



和
2002组分：



（统称为QS-21主峰组分），
和2018组分：



其中如通过在214nm的UV吸光度测得的2018组分/QS-21主峰组分的比率≤0.075。


14.权利要求13的粗制水性提取物，其中如通过在214nm的UV吸光度测得的2018组分/QS-21主峰组分的比率≤0.064。


15.权利要求13或14的粗制水性提取物，其中如通过在214nm的UV吸光度测得的2018组分/QS-21主峰组分的比率为至少0.005。


16.权利要求15的粗制水性提取物，其中如通过在214nm的UV吸光度测得的2018组分/QS-21主峰组分的比率为至少0.01。


17.权利要求13至16任一项的粗制水性提取物，其中如通过在214nm的HPLC-UV吸光度测定的前峰/QS-21主峰比率为0.45或更低。


18.权利要求17的粗制水性提取物，其中如通过在214nm的HPLC-UV吸光度测定的前峰/QS-21主峰比率为0.4或更低。


19.权利要求13至18任一项的粗制水性提取物，其中如通过在214nm的HPLC-UV吸光度测定的前峰/QS-21主峰比率为0.05或更高。


20.权利要求19的粗制水性提取物，其中如通过在214nm的HPLC-UV吸光度测定的前峰/QS-21主峰比率为0.1或更高。


21.权利要求13至20任一项的粗制水性提取物，其中皂树的粗制水性提取物的水溶液中的QS-21主峰含量为至少1g/L。


22.权利要求21的粗制水性提取物，其中皂树的粗制水性提取物的水溶液中的QS-21主峰含量为至少2g/L。


23.权利要求22的粗制水性提取物，其中皂树的粗制水性提取物的水溶液中的QS-21主峰含量为至少2.5g/L。


24.权利要求23的粗制水性提取物，其中皂树的粗制水性提取物的水溶液中的QS-21主峰含量为至少2.8g/L。


25.权利要求1至24任一项的粗制水性提取物，其获自皂树树皮。


26.权利要求1至25任一项的粗制水性提取物，其中所述粗制水性提取物是巴氏灭菌的。


27.权利要求1至26任一项的粗制水性提取物，其中所述粗制水性提取物是基本无菌的，特别是无菌的。


28.权利要求1至27任...

【专利技术属性】
技术研发人员：AT拜格，JJ迪亚斯加西亚，CA法伦布格，KR迈尔斯，JK桑德维克，JY范登布格，
申请(专利权)人：葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司，
类型：发明
国别省市：比利时;BE