利用多模式层析介质Capto adhere去除乙脑疫苗制品中残留宿主DNA的方法技术

本发明专利技术涉及在病毒疫苗制品中去除宿主DNA及宿主蛋白的方法，具体涉及利用多模式层析介质Capto adhere去除乙脑疫苗制品中残留宿主DNA的方法。所述的利用多模式层析介质Capto adhere去除乙脑疫苗制品中残留宿主DNA的方法，包括以下步骤：将乙脑疫苗浓缩灭活液进行多模式介质Capto adhere层析，使DNA与宿主蛋白牢固吸附在多模式层析介质Capto adhere上，而病毒蛋白直接穿透，再将收集的纯化液进行凝胶过滤层析，从而达到去除宿主DNA与宿主蛋白的目的。将Capto adhere多模式层析介质应用于病毒类疫苗的纯化中，采用流穿模式，即加样时目的蛋白流穿，杂质吸附在层析柱上，达到纯化目的。在保证疫苗抗原原始结构的前提下，有效去除宿主DNA与宿主蛋白的含量，突破疫苗制品的质量瓶颈，提高产品质量标准。

Removal of residual host DNA in JE vaccine products by multi-mode chromatography medium capto adrhere

【技术实现步骤摘要】
利用多模式层析介质Captoadhere去除乙脑疫苗制品中残留宿主DNA的方法
本专利技术涉及在病毒疫苗制品中去除宿主DNA及宿主蛋白的方法，具体涉及利用多模式层析介质Captoadhere去除乙脑疫苗制品中残留宿主DNA的方法。
技术介绍
乙脑疫苗是将病毒接种于适合的动物细胞上，经繁殖后病毒释放到培养液中，与此同时一些残余的宿主细胞或其碎片也会进入到培养液中，经澄清，超滤浓缩，凝胶过滤层析后，提取得到的乙脑疫苗原液中会产生游离的宿主DNA与宿主蛋白，以及与抗原蛋白结合的宿主DNA和宿主蛋白，浓缩，凝胶过滤层析工艺会将一定比例的游离DNA与宿主蛋白去除，但仍会有残余DNA和宿主蛋白的存在，特别是与病毒或抗原蛋白结合的DNA与宿主蛋白会残留在原液中，若去除不彻底，这部分DNA与宿主蛋白会随着疫苗一起被注入到人体内，可能会在人体内引起不良反应，或具有导致癌症发生的可能。目前乙脑疫苗普遍采用浓缩、凝胶过滤层析等传统工艺进行提取，所得到的乙脑疫苗，存在以下缺陷：病毒疫苗提取后残留的宿主DNA含量过高；病毒疫苗提取后仍含有过高的宿主蛋白，杂蛋白去除率不高，导致疫苗在临床使用后有较大的副作用。上述缺陷，影响了病毒疫苗产品的质量，制约了疫苗产品的生产。典型的多模式阴离子交换层析(Multi-modalanionexchangechromatography)介质Captoadhere是由GEHealthcare公司开发的。Captoadhere介质(配基N-Benzyl-N-methylethanolamine)是一种多结合强阴离子交换介质，综合了阴离子交换、氢键和疏水等多种复杂的作用方式，Captoadhere专为中间纯化和精制单抗而设计。与传统的离子交换介质不同，新型的介质拥有不同的选择性，除了可去除LPA、内毒素及潜在的病毒，对于抗体的各种聚集体也具有非常独特的高效去除能力。一般用于rProteinA层析后，其层析后样品一般可直接应用于后续步骤，避免了样品浓缩、稀释等预处理过程。现有技术没有利用多模式层析介质Captoadhere去除乙脑疫苗制品中残留宿主DNA的方法的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的就在于克服现有技术存在的上述不足，为实现在处理乙脑疫苗的过程中尽可能不损失抗原，即不影响疫苗制品的药效，又有效地去除残留宿主DNA与宿主蛋白的目的，本专利技术的目的是提供一种利用多模式层析介质Captoadhere去除乙脑疫苗制品中残留宿主DNA的方法，即将乙脑疫苗的浓缩灭活液进行多模式介质Captoadhere层析，使DNA与宿主蛋白牢固吸附在多模式层析介质Captoadhere上，而病毒蛋白直接穿透，再将收集的纯化液进行凝胶过滤层析，从而达到去除宿主DNA与宿主蛋白的目的，从而使成品乙脑疫苗DNA残留量与宿主蛋白残留量进一步降低，提高乙脑疫苗的产品质量。为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案。一种利用多模式层析介质Captoadhere去除乙脑疫苗制品中残留宿主DNA的方法，包括以下步骤：将乙脑疫苗浓缩灭活液进行多模式介质Captoadhere层析，使DNA与宿主蛋白牢固吸附在多模式层析介质Captoadhere上，而病毒蛋白直接穿透，再将收集的纯化液进行凝胶过滤层析，从而达到去除宿主DNA与宿主蛋白的目的。进一步地，一种利用多模式层析介质Captoadhere去除乙脑疫苗制品中残留宿主DNA的方法，具体包括以下步骤：使用缓冲液(pH6.0～8.0、NaCl0.1mol/L～1.0mol/L)平衡多模式层析介质Captoadhere至紫外、电导平衡，然后将乙脑疫苗浓缩灭活液加载到多模式层析介质Captoadhere中，宿主DNA与宿主蛋白牢固吸附在多模式层析介质Captoadhere上，而乙脑病毒蛋白直接穿透出来，紫外检测波长280nm，收集吸收峰，当样品全部加载后，继续用缓冲液(pH6.0～8.0、NaCl0.1mol/L～1.0mol/L)洗脱，直到紫外吸收值降到基线，收集的穿透峰为一步纯化液；再将一步纯化液经过凝胶过滤层析，收集第一个吸收峰，即乙脑病毒蛋白最终纯化液。与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下。将Captoadhere多模式层析介质应用于病毒类疫苗的纯化中，采用流穿模式，即加样时目的蛋白流穿，杂质吸附在层析柱上，达到纯化目的。在保证疫苗抗原原始结构的前提下，有效去除宿主DNA与宿主蛋白的含量，突破疫苗制品的质量瓶颈，提高产品质量标准。附图说明图1是实施例一实验设计中运行编号为1的Captoadhere多模式层析图谱，横坐标代表体积，纵坐标代表紫外吸收。图2是实施例一实验设计中运行编号为2的Captoadhere多模式层析图谱，横坐标代表体积，纵坐标代表紫外吸收。图3是实施例一实验设计中运行编号为3的Captoadhere多模式层析图谱，横坐标代表体积，纵坐标代表紫外吸收。图4是实施例一实验设计中运行编号为4的Captoadhere多模式层析图谱，横坐标代表体积，纵坐标代表紫外吸收。图5是实施例一实验设计中运行编号为5的Captoadhere多模式层析图谱，横坐标代表体积，纵坐标代表紫外吸收。图6是实施例一实验设计中运行编号为6的Captoadhere多模式层析图谱，横坐标代表体积，纵坐标代表紫外吸收。图7是实施例一实验设计中运行编号为7的Captoadhere多模式层析图谱，横坐标代表体积，纵坐标代表紫外吸收。图8是实施例一实验设计中运行编号为8的Captoadhere多模式层析图谱，横坐标代表体积，纵坐标代表紫外吸收。图9是实施例一实验设计中运行编号为9的Captoadhere多模式层析图谱，横坐标代表体积，纵坐标代表紫外吸收。图10是实施例一实验设计中运行编号为10的Captoadhere多模式层析图谱，横坐标代表体积，纵坐标代表紫外吸收。图11是实施例一实验设计中运行编号为11的Captoadhere多模式层析图谱，横坐标代表体积，纵坐标代表紫外吸收。图12是实施例一实验设计中运行编号为12的Captoadhere多模式层析图谱，横坐标代表体积，纵坐标代表紫外吸收。图13是实施例一实验设计中运行编号为13的Captoadhere多模式层析图谱，横坐标代表体积，纵坐标代表紫外吸收。图14是实施例一实验设计中运行编号为14的Captoadhere多模式层析图谱，横坐标代表体积，纵坐标代表紫外吸收。图15是实施例一实验设计中运行编号为15的Captoadhere多模式层析图谱，横坐标代表体积，纵坐标代表紫外吸收。图16是实施例一实验设计中运行编号为16的Captoadhere多模式层析图谱，横坐标代表体积，纵坐标代表紫外吸收。图17是实施例一实验设计中运行编号为17的Captoadhere多模式层析图谱，横坐标代表体积，纵坐标代表紫外吸收。图18是实施例一实验设计中运行编号为18的Captoadh本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用多模式层析介质Capto adhere去除乙脑疫苗制品中残留宿主DNA的方法，其特征在于，将乙脑疫苗浓缩灭活液进行多模式介质Capto adhere层析，使DNA与宿主蛋白牢固吸附在多模式层析介质Capto adhere上，而病毒蛋白直接穿透，再将收集的纯化液进行凝胶过滤层析，从而达到去除宿主DNA与宿主蛋白的目的，具体包括以下步骤：使用缓冲液pH6.0～8.0和NaCl 0.1mol/L～1.0mol/L平衡多模式层析介质Capto adhere至紫外、电导平衡，然后将乙脑疫苗浓缩灭活液加载到多模式层析介质Capto adhere中，宿主DNA与宿主蛋白牢固吸附在多模式层析介质Capto adhere上，而乙脑病毒蛋白直接穿透出来，紫外检测波长280nm，收集吸收峰，当样品全部加载后，继续用缓冲液pH6.0～8.0、NaCl 0.1mol/L～1.0mol/L洗脱，直到紫外吸收值降到基线，收集的穿透峰为一步纯化液；再将一步纯化液经过凝胶过滤层析，收集第一个吸收峰，即乙脑病毒蛋白最终纯化液。/n

【技术特征摘要】
1.一种利用多模式层析介质Captoadhere去除乙脑疫苗制品中残留宿主DNA的方法，其特征在于，将乙脑疫苗浓缩灭活液进行多模式介质Captoadhere层析，使DNA与宿主蛋白牢固吸附在多模式层析介质Captoadhere上，而病毒蛋白直接穿透，再将收集的纯化液进行凝胶过滤层析，从而达到去除宿主DNA与宿主蛋白的目的，具体包括以下步骤：使用缓冲液pH6.0～8.0和NaCl0.1mol/L～1.0mol/L平衡多模式层析介质Captoadhere至紫外、电导平衡，然后将乙脑疫苗浓缩灭活液加载到多模式层析介质Captoadhere中，宿主DNA与宿主蛋白牢固吸附在多模式层析介质Captoadhere上，而乙脑病毒蛋白直接穿透出来，紫外检测波长280nm，收集吸收峰，当样品全部加载后，继续用缓冲液pH6.0～8.0、NaCl0.1mol/L～1.0mol/L洗脱，直到紫外吸收值降到基线，收集的穿透峰为一步纯化液；再将一步纯化液经过凝胶过滤层析，收集第一个吸收峰，即乙脑病毒蛋白最终纯化液。


2.按照权利要求1所述的利用多模式层析介质Captoadhere去除乙脑疫苗制品中残留宿主DNA的方法，其特征在于，具体步骤为：使用AKTAava...

【专利技术属性】
技术研发人员：李庆岸，于海，曹鹏，孙非非，高军，
申请(专利权)人：辽宁成大生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：辽宁;21