包含免疫原性屈公病毒CHIKV-DELTA5NSP3的医药组成物的制备方法技术

本发明专利技术是关于一种产生免疫原性减毒活屈公病毒(Chikungunya virus)的方法，以及包括所述病毒的医药组成物。

Preparation of pharmaceutical components containing immunogenic Qu Gong virus chikv-delta5nsp3

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含免疫原性屈公病毒CHIKV-DELTA5NSP3的医药组成物的制备方法
本专利技术是关于一种产生免疫原性减毒活屈公病毒的方法，以及包括所述病毒的医药组成物。
技术介绍
屈公病毒(Chikungunyavirus，CHIKV)为披衣病毒科α病毒属的正义单股RNA病毒。屈公病毒病主要为一种爆发性疾病，且与高发病率有关。病毒经由蚊媒传播给人类，且引起发热、皮疹、疲劳及严重的多发性关节痛。CHIKV感染一般会自发消退且通常不会致命，除非是在涉及CNS感染的罕见病例中，在所述罕见病例中，死亡率在10％至30％之间。一岁以下的婴儿及65岁以上的成年人尤其具有CHIKVCNS疾病的风险，其感染率分别比一般人群高25倍及6倍。儿童在CHIKV脑炎后的持续性残疾率估计在30％与45％之间(GerardinP等人Chikungunyavirus-associatedencephalitisAcohortstudyonLaRéunionIsland,2005-2009(2016)Neurology86:1-9)。此外，所有屈公患者中约30％在康复后数月至数年出现关节痛。在一些情况下，可能发生神经、肾、心脏、呼吸或肝脏的并发症。目前没有疫苗或药物可用于预防或治疗屈公病毒病。过去的爆发主要发生在非洲，但东中南非(East-CentralSouthAfrican，ECSA)基因型最近扩大了其地理范围，导致印度、亚洲、甚至温带欧洲都有爆发(Weaver,S.,ArrivalofChikungunyaVirusintheNewWorld:ProspectsforSpreadandImpactonPublicHealth(2014)PLOSNeglectedTropicalDiseases8(6):e2921)。尽管CHIKV自1995年以来一直重复引入美洲，但直到2013年才在加勒比地区(Caribbean)报导了原地传播。到2015年，所述流行病扩散至大陆，且在美洲27个国家造成了超过100万例疑似病例(Pan-AmericanHealthOrganization(2015)NumberofCumulativeCasesofChikungunyaFeverintheAmericas)。进一步的流行病可能部分得益于CHIKV蚊媒向非流行地区的扩散，以及CHIKV适应当地蚊子物种的能力(Vega-RuaA等人,ChikungunyaVirusTransmissionPotentialbyLocalAedesMosquitoesintheAmericasandEurope(2015)PLOSNeglectedTropicalDiseasesDOI:10.1371/journal.pntd.0003780)。屈公病毒的高传染率、其地理扩散及其长期并发症的可能性强调了对开发诸如疫苗的预防措施的需求。针对屈公病毒的疫苗可包括减毒活CHIKV粒子；亦即，已发生改变以降低毒力，但仍保持免疫原性的活的CHIKV粒子。减毒CHIKV的一个实例在非结构蛋白3中含有缺失突变(CHIKV-Δ5nsP3；参见图2)。已证实，CHIKV-Δ5nsP3在小鼠(D等人,NovelattenuatedChikungunyavaccinecandidateselicitprotectiveimmunityinC57Bl/6mice(2014)J.Virol.88:2858-2866)及非人类灵长类动物(RoquesP等人,Attenuatedandvectoredvaccinesprotectnon-humanprimatesagainstChikungunyavirus(2017)J.Clin.Invest.Insight2(6):e83527)中可赋予保护性免疫。在小鼠及非人类灵长类动物中的此等初步活体内研究是用在BHK-21细胞上产生的CHIKV-Δ5nsP3病毒进行的，所述细胞为一种通常不利于人类疫苗的产生的细胞类型。因此，如本文所揭示，有必要使CHIKV-Δ5nsP3病毒的产生适应更适合的细胞培养平台。这种适应不是一个微不足道的过程；例如，此项技术中已知，病毒对特定宿主细胞的适应可导致会改变病毒粒子的表面电荷的突变。此类后天性突变可用以减弱病毒；事实上，已在使用连续继代来开发此类减毒病毒粒子，其用于诸多针对病毒的疫苗中。关于CHIKV，已证实，毒性野生型屈公病毒的重复活体外继代可导致某些点突变，导致病毒部分或完全减毒(GardnerCL等人,DeliberateAttenuationofChikungunyaVirusbyAdaptationtoHeparanSulfate-DependentInfectivity:AModelforRationalArboviralVaccineDesign(2014)PLOSNeglectedTropicalDiseases8(2):e2719)。现在令人惊讶地发现，导致免疫原性丧失的某些点突变可能在减毒CHIKV-Δ5nsP3的细胞受质适应过程中较早发生，使得控制或减少所述点突变成为产生成功候选疫苗的必要考虑因素。因此，本专利技术提供一种方法，其具有用于CHIKV-Δ5nsP3候选疫苗的繁殖的明确定义的参数，允许产生高免疫原性病毒粒子，同时在适合工业应用的细胞培养物中达成高生产效价。
技术实现思路
本专利技术涉及一种医药组成物，其包括足量的免疫原性屈公病毒以在受试者中引发中和免疫反应；亦即，一种提供针对屈公病毒感染及/或由屈公病毒引起的疾病的保护的免疫反应。详言之，本专利技术提供一种包括减毒活CHIKV-Δ5nsP3粒子的医药组成物，其中含免疫原性降低突变、尤其是E2蛋白中的免疫原性降低突变的所述病毒粒子的百分比降至最低。本专利技术进一步提供一种制造包括减毒活CHIKV-Δ5nsP3的医药组成物的方法，其中所述方法使病毒基因组中的免疫原性降低突变、尤其是在病毒E2蛋白的E168及/或其他E2残基及/或其他结构或非结构CHIKV蛋白中的残基处的突变的存在降至最低。本专利技术进一步提供可藉由本专利技术方法获得的包括免疫原性减毒活屈公病毒的医药组成物。目前正在努力开发针对屈公病毒的疫苗。最先进的候选疫苗之一在麻疹病毒平台中提供嵌合构筑体(参见http://www.themisbio.com/#/news)。该疫苗目前处于2期试验阶段，分两个剂量递送(https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02861586？term＝themis&recrs＝a&rank＝2)。单次注射疫苗(one-shotvaccine)将在该领域中体现出独特优势。因此，在一个实施例中，本专利技术的一个目标为提供一种稳定的、已有明确定论的、安全且有效的医药组成物，诸如针对屈公病毒的疫苗，较佳为仅用一次疫苗接种即可提供保护的改良疫苗；亦即，在工业规模上使用常见细胞受质的所谓的「单次注射」疫苗，提供产生此类稳定的、已有明确定论的、安全且有效的疫苗的方法，以及有关所述稳定的、已有明确定论的、安全且有效的疫苗的方法及用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种医药组成物，包括(i)CHIKV-Δ5nsP3粒子，其是表达由SEQ ID NO:2的氨基酸序列所定义的E2结构蛋白；(ii)CHIKV-Δ5nsP3粒子，其是表达与SEQ ID NO:2的氨基酸序列相比具有至少一个突变的E2结构蛋白；及(iii)可选择的医药学上可接受的赋形剂。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170921 EP 17192374.11.一种医药组成物，包括(i)CHIKV-Δ5nsP3粒子，其是表达由SEQIDNO:2的氨基酸序列所定义的E2结构蛋白；(ii)CHIKV-Δ5nsP3粒子，其是表达与SEQIDNO:2的氨基酸序列相比具有至少一个突变的E2结构蛋白；及(iii)可选择的医药学上可接受的赋形剂。


2.一种医药组成物，包括(i)CHIKV-Δ5nsP3粒子；及(ii)可选择的医药学上可接受的赋形剂；其中存在于所述组成物中的CHIKV-Δ5nsP3粒子的至少30％是表达由SEQIDNO:2的氨基酸序列所定义的E2结构蛋白。


3.如权利要求1或2所述的医药组成物，其中存在于所述组成物中的CHIKV-Δ5nsP3粒子的至少50％、至少75％或至少90％是表达由SEQIDNO:2的氨基酸序列所定义的E2结构蛋白。


4.如权利要求1至3中任一项所述的医药组成物，其中存在于所述组成物中的CHIKV-Δ5nsP3粒子的小于50％、小于25％或小于10％是表达相对于SEQIDNO:2的氨基酸序列具有一或多个突变的E2结构蛋白。


5.如权利要求1至4中任一项所述的医药组成物，其中存在于所述组成物中的CHIKV-Δ5nsP3粒子的小于50％、小于25％或小于10％是表达一于SEQIDNO:2的氨基酸序列中有E168K突变的E2结构蛋白。


6.如权利要求1至5中任一项所述的医药组成物，其中存在于所述组成物中的CHIKV-Δ5nsP3粒子的1-50％、5-30％或10-20％是表达一于SEQIDNO:2的氨基酸序列中有一或多个突变且较佳为E168K突变的E2结构蛋白。


7.如权利要求1至6中任一项所述的医药组成物，其藉由在Vero细胞中产生CHIKV-Δ5nsP3粒子而获得或可如此获得。


8.如权利要求1至7中任一项所述的医药组成物，其中所述组成物在经所述医药组成物免疫的小鼠中诱导针对CHIKV-Δ5nsP3的中和抗体，产生包括所述中和抗体的血清，且其中，在活体外中和分析中，在1:80血清稀释下，所述血清将细胞、例如Vero细胞的CHIKV感染中和至少50％、较佳至少60％、较佳至少70％、更佳至少80％、甚至更佳至少90％、最佳至少95％。


9.如权利要求1至8中任一项所述的医药组成物，其中(i)中的所述CHIKV-Δ5nsP3是由SEQIDNO:1的多核苷酸序列定义。


10.如权利要求1至9中任一项所述的医药组成物，其中所述E2结构蛋白中的所述至少一个突变是选自E168K及G55R。


11.如权利要求1至10中任一项所述的医药组成物，其中所述E2结构蛋白中的所述至少一个突变为E168K。


12.如权利要求1至11中任一项所述的医药组成物，其中所述医药组成物包括一有效量之表达由SEQIDNO:2的氨基酸序列所定义的E2结构蛋白的CHIKV-Δ5nsP3粒子，其中所述有效量定义为至少102、至少103、至少104、至少105、至少106、较佳至少103个表达由SEQIDNO:2的氨基酸序列所定义的E2结构蛋白的CHIKV-Δ5nsP3粒子。


13.如权利要求1至12中任一项所述的免疫原性医药组成物，其中所述医药组成物包括一有效量的表达由SEQIDNO:2的氨基酸序列所定义的E2结构蛋白的CHIKV-Δ5nsP3粒子，其中所述有效量定义为足够已接种疫苗的受试者预防屈公病毒(Chikungunyavirus)病毒血症的量。


14.如权利要求1至13中任一项所述的医药组成物，其中所述医药组成物为单次注射医药组成物。


15.一种产生包括CHIKV-Δ5nsP3粒子的医药组成物的方法，所述粒子表达由SEQIDNO:2的氨基酸序列所定义的E2结构蛋白，所述方法包括以下步骤：
使CHIKV-Δ5nsP3在宿主细胞上以使所述病毒的免疫原性降低突变的存在降至最低的方式生长。
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【专利技术属性】
技术研发人员：安卓·福礼兹尔，安德烈雅斯·曼基，厄本·伦德柏格，玛力欧·尼本福尔，尤尔根·汉迪沃瑞斯，罗伯特·史莱格，阿诺德·里昂，
申请(专利权)人：瓦尔尼瓦公司，
类型：发明
国别省市：法国;FR