一种单链DNA的合成及错误纠正方法技术

本发明专利技术提供一种单链DNA的合成及错误纠正方法，涉及基因合成领域，具体涉及单链DNA的合成及合成中的错误纠正方法。本发明专利技术要能够剔除DNA合成中的错误片段，提高单链DNA合成片段的正确率。本发明专利技术提供一种单链DNA合成的方法，通过在目标序列的两端设计酶切位点和形成发夹结构，通过限制性内切酶和错配特异性内切酶进行错误纠正，得到正确的DNA片段。

Synthesis and error correction of single strand DNA

【技术实现步骤摘要】
一种单链DNA的合成及错误纠正方法
本专利技术涉及基因合成领域，具体涉及一种单链DNA的合成及错误纠正方法。
技术介绍
DNA合成过程中会随机的发生碱基突变、缺失和插入的现象，会影响下游的应用。因此对合成的DNA进行纠错处理，降低其内在的突变率，对提高下游的基因合成和文库构建的质量可以起到关键作用。至目前为止，有很多DNA纠错的方法被开发出来(ErrorCorrectioninGeneSynthesisTechnology,TrendsBiotechnol.2012Mar；30(3):147–154.)，但是这些方法都是对双链DNA进行纠错，并没有对单链DNA进行纠错的方法。随着CRISPR技术的发展，对gRNA文库构建需求越来越大，芯片引物由于其通量高单个引物的价格低廉，成为gRNA文库构建的首选，但芯片引物由于其技术的局限性，在合成过程中其突变率较高，因此开发一种降低引物突变率的基因合成方法是未来研发人员努力的方向。
技术实现思路
为了解决现有技术中单链DNA合成过程中突变率高的问题，本专利技术提供一种新的DNA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种单链DNA合成的方法，所述方法包含步骤：(1)在目标DNA的3’端连接酶切位点序列，并生成反向互补序列；(2)通过一段辅助序列连接(1)中的两条序列并合成；(3)退火使(2)中序列形成包含发夹结构的双链DNA；(4)加入限制性内切酶切割发夹结构；(5)加入错配特异性内切酶进行错误纠正；其中，所述辅助序列自身能够形成发夹结构；所述错配特异性内切酶是指能够识别并裂解含有因碱基突变、插入或缺失导致的双链DNA中碱基错配的酶。/n

【技术特征摘要】
1.一种单链DNA合成的方法，所述方法包含步骤：(1)在目标DNA的3’端连接酶切位点序列，并生成反向互补序列；(2)通过一段辅助序列连接(1)中的两条序列并合成；(3)退火使(2)中序列形成包含发夹结构的双链DNA；(4)加入限制性内切酶切割发夹结构；(5)加入错配特异性内切酶进行错误纠正；其中，所述辅助序列自身能够形成发夹结构；所述错配特异性内切酶是指能够识别并裂解含有因碱基突变、插入或缺失导致的双链DNA中碱基错配的酶。


2.权利要求1所述的方法，所述错误纠正是将由于碱基突变、插入或缺失而导致不完全互补的双链DNA进行切割。


3.权利要求1-2任一项所述的方法，所述限制性内切酶能够识别双链DNA中的酶切位点并将双链DNA进行酶切产生粘性末端或平末端。


4.权利要求1-3任一项所述的方法，所述目标DNA包含5-200个碱基；优选5-100；更优选5-60；再优选5-30；最优选10-30。


5.权利要求1-4任一项所述的方法，所述辅助序列包含任意数量的碱基；优选4-100；更优选...

【专利技术属性】
技术研发人员：李一凡，邱蔚，吴政宪，
申请(专利权)人：江苏金斯瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32