本发明专利技术公开了GLP‑2类似物在制备防治PD药物中的应用及防治PD的药物，利用GLP‑2类似物能够保护由MPP+引起的多巴胺能神经元细胞损伤的作用机制，来制备防治PD的药物。涉及PD防治药物技术领域，其有益效果为：GLP‑2类似物能够保护由MPP+引起的多巴胺能神经元细胞损伤，因而具有开发成抗PD药物的潜力。
Application of GLP-2 analogues in the preparation of drugs for the prevention and treatment of PD and drugs for the prevention and treatment of PD
【技术实现步骤摘要】
GLP-2类似物在制备防治PD药物中的应用及防治PD的药物
本专利技术实施例涉及PD防治药物
，尤其涉及一种GLP-2类似物在制备防治PD药物中的应用及防治PD的药物。
技术介绍
帕金森病(Parkinson`sDisease,PD)是仅次于阿尔茨海默病的第二大中枢神经系统退行性疾病，由英国医生JamesParkinson于1817年首先描述，并由Charcot于1892年建议将这种疾病称为PD。PD病以黑质致密部多巴胺能神经元严重变性、缺失和胞浆内包涵体-路易小体(Lewybody,LB)生成为主要的病理特征。临床上主要表现为静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势步态障碍，同时可伴有抑郁、便秘和睡眠障碍等非运动症状。人神经母细胞瘤细胞(SH-SYSY，CRL-2266)具有许多多巴胺能神经元的特征，因此被广泛地作为神经元细胞模型用于PD研究。神经毒素1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-pehnyl-pyridine,MPP+)是1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(l-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)的活性神经毒性代谢产物，能够产生在临床和病理上与PD相似的综合征，是最常用的PD模拟毒素。MPTP及MPP+诱导的PD实验模型极大的促进了PD的研究进展。目前对于PD的治疗，临床上采用立体定向手术治疗和药物治疗两种方法，手术主要阻断丘脑底核苍白球通路或纹状体苍白球通路，药物主要集中在抗胆碱药物和影响多巴胺能的药物，但均不能阻止或逆转PD的病理进展，且其疗效有限，副作用较大。胰高血糖素样肽-2(GLP-2)是胰高血糖素原经转录翻译后处理加工的具有33个氨基酸的多肽。胰高血糖素在被切割时，同时释放了胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和GLP-2。近年来，GLP-1类似物被用于糖尿病的治疗，如利拉鲁肽。GLP-2类似物apraglutide已被批准用于治疗短肠综合征等。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有技术中的不足，即为了克服PD病理进程，本专利技术实施例公开了一种GLP-2类似物在制备防治PD药物中的应用及防治PD的药物。本专利技术实施例第一方面公开了GLP-2类似物在制备防治PD药物中的应用。进一步的，所述GLP-2类似物为在GLP-2多肽的基础上派生出的衍生物。优选的，所述GLP-2类似物的氨基酸序列为HGDGSFSDEMSTILDNLATRDFINWLIQTKITD。本专利技术实施例第二方面公开了一种防治PD的药物，其为以GLP-2类似物为活性物质制成的制剂。优选的，所述GLP-2类似物的氨基酸序列为HGDGSFSDEMSTILDNLATRDFINWLIQTKITD。优选的，所述制剂的剂型为片剂、胶囊、注射剂、气雾剂或口服液。本专利技术实施例的有益效果在于：PD是一种中老年人常见的神经系统变性疾病，临床上主要表现为静止性震颤、运动迟缓、肌强直和姿势步态障碍，同时可伴有抑郁、便秘和睡眠障碍等非运动症状，其主要病理特征为黑质纹状体系统多巴胺能神经元进行性死亡、缺失。本专利技术发现，GLP-2类似物能够保护由MPP+引起的多巴胺能神经元细胞损伤，因而具有开发成抗PD药物的潜力。具体实施方式下面将结合本专利技术实施例，对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术实施例第一方面公开了GLP-2类似物在制备防治PD药物中的应用。需要说明的是，GLP-2类似物为在GLP-2多肽的基础上派生出的衍生物。GLP-2类似物的氨基酸序列为HGDGSFSDEMSTILDNLATRDFINWLIQTKITD。本专利技术实施例第二方面公开了一种防治PD的药物，其为以GLP-2类似物为活性物质制成药学上可以接受的制剂剂型。GLP-2类似物的氨基酸序列为HGDGSFSDEMSTILDNLATRDFINWLIQTKITD。上述的制剂剂型为片剂、胶囊、注射剂、气雾剂或口服液。GLP-2在PD药物中的应用及防治PD的药物方面尚无研究和报道。我们发现GLP-2可以保护SH-SY5Y神经细胞抵抗由MPP+引起细胞活性降低、线粒体损伤、自噬损伤和凋亡，从而具有开发为防治PD药物的潜力。胰高血糖素样肽-2(Glucagon-likepeptide-2,GLP-2)是一种由33个氨基酸组成的多肽，在肠道内L细胞分泌合成，也在脑干和下丘脑的离散神经元簇中产生。GLP-2在血液循环中的半衰期较短(在人体内仅为7min左右)，这是由于二肽基肽酶4(DPP-4)水解GLP-2末端第二位氨基酸丙氨酸残基，专利技术人通过改变这一氨基酸位点来延长其在体内的生物半衰期。GLP-2类似物在制备防治PD药物中的应用的发现及验证过程如下：一、实验材料MPP+购自Sigma公司；DMEM/F-12培养基和胎牛血清购自Gibco公司；MTT细胞增殖检测试剂，其检测原理是通过活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原外源性MTT为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜并沉积在细胞中，二甲基亚砜(DMSO)可将其溶解，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定光吸收值来间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，甲臜形成量与细胞数成正比。GLP-2类似物由上海强耀生物科技有限公司合成，氨基酸序列为：HGDGSFSDEMSTILDNLATRDFINWLIQTKITD；利拉鲁肽由上海强耀生物科技有限公司合成。MPP+溶液的制备：将100mgMPP+粉末溶解于无菌PBS中，0.22μm无菌滤器过滤，分装后保存于-20℃冰箱，储存液(使用Sigma公司的PMA)的浓度为100nM。GLP-2类似物和利拉鲁肽溶液的制备：将GLP-2或利拉鲁肽粉末溶解于无菌双蒸水中，分装后保存于-20℃冰箱，储存液(使用Sigma公司的PMA)的浓度为1mM。二、实验方法1、细胞培养取出保存于液氮冷冻的人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y，迅速置于37℃水浴中轻轻振荡至细胞融化后，以1000rpm离心5min，弃去上清液，加入少量培养基并轻轻吹吸均匀，培养基含有10％胎牛血清、1％双抗的DMEM/F-12培养基，将细胞移入细胞瓶，在37℃、5％CO2、饱和湿度条件下培养。2、细胞模型的制备将对数生长期的SH-SY5Y细胞制成浓度为3.0×105个/mL的细胞悬液，接种于96孔细胞板中，每孔100μL，培养24h后，更换为分别含0.5mM、1mM、2mM和4mMMPP+的培养基，继续培养24h，每孔5个复孔。采用MTT细胞增殖检测试剂检测细胞活性，选择能够显著诱导细胞损伤的最小MPP+浓度(2mM)制作PD细胞模型。3、细胞活性实验将对数生长期的SH-SY5Y细胞制成浓本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.GLP-2类似物在制备防治PD药物中的应用。/n
【技术特征摘要】
1.GLP-2类似物在制备防治PD药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的GLP-2类似物在制备防治PD药物中的应用，其特征在于，所述GLP-2类似物为在GLP-2多肽的基础上派生出的衍生物。
3.根据权利要求1或2所述的GLP-2类似物在制备防治PD药物中的应用，其特征在于，所述GLP-2类似物的氨基酸序列为HGDGSFSDEMSTILDNLATRDFINWLIQTKI...
【专利技术属性】
技术研发人员：苏运芳，张紫娟，郝莉，马金莲，孙丽敏，张振强，克里斯汀·霍尔舍，曾华辉，宋军营，谢治深，
申请(专利权)人：河南中医药大学，
类型：发明
国别省市：河南;41
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