检测肺癌相关T790M单核酸变异的上转换荧光测试试剂盒、使用方法和应用技术

本发明专利技术公开了检测肺癌相关T790M单核酸变异的上转换荧光测试试剂盒、使用方法和应用，主要包括：氨基磁珠、UCNPs、HEMA、cDNA、PBIB、sulfo‑SMCC、CuSO<subgt;4</subgt;、BPSD、CuBr<subgt;2</subgt;、Me<subgt;6</subgt;TREN、AA、REase。本发明专利技术采用ATRP作为信号放大的策略，以UCNPs作为信号单元。首先，将UCNPs与HEMA连接。随后通过SMCC将cDNA连接到氨基磁珠上，然后PBIB与暴露在cDNA表面的叠氮基相连，将引发剂PBIB引入系统中。在加入连接好的HEMA/UCNPs后，通过ATRP聚合反应实现信号放大。捕获探针cDNA与目标物T790M碱基互补配对结合之后，使用能够对突变位点进行特异性切割的REase，实现检测信号的开合。本发明专利技术提高了检测的灵敏度，同时具有良好的特异性、稳定性和重现性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种基于rease和ucnps结合原子转移自由基聚合(atrp)信号放大策略构建的检测肺癌相关t790m单核酸变异的上转换荧光测试试剂盒、使用方法和应用，属于生物分析。

技术介绍

1、t790m是一种egfr基因突变，其会导致肺癌细胞对egfr酪氨酸激酶抑制剂(tki)的耐药性增强，因此t790m检测在肺癌治疗中具有重要的临床意义。目前，t790m检测的常用技术有二代测序法、聚合酶链式反应，但这些方法常存在费用昂贵、灵敏度有限、数据处理复杂等不足。近年来，已开发了一些基于碳量子点、纳米粒子、荧光蛋白的荧光检测分析方法，用于实现灵敏的单碱基突变(snp)检测方法。但因这些材料的自发荧光会干扰检测信号，散射会影响信号强度和稳定性等，导致其应用受到限制。

2、基于此，本专利技术的目的是提供一种高灵敏、高稳定性的用于snp突变的通用上转换荧光检测方法。目前，尚未见将rease和ucnps结合atrp信号放大策略应用于单碱基突变检测的报道。本专利技术以t790m为例，报道了一种将atrp信号放大策略协同rease和ucnps应用于snp突变本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.基于REase和UCNPs结合ATRP信号放大策略构建的检测肺癌相关T790M单核酸变异的上转换荧光测试试剂盒，其特征在于，包括以下原料：氨基磁珠、UCNPs、HEMA、cDNA、PBIB、sulfo-SMCC、CuSO4、BPSD、CuBr2、Me6TREN、AA、REase。

2.根据权利要求1所述的检测肺癌相关T790M单核酸变异的上转换荧光测试试剂盒，其特征在于，还包括TE缓冲液、NHS、EDC。

3.根据权利要求1所述的检测肺癌相关T790M单核酸变异的上转换荧光测试试剂盒，其特征在于，UCNPs为上转换纳米材料NaYF4:Yb,Er。

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【技术特征摘要】

1.基于rease和ucnps结合atrp信号放大策略构建的检测肺癌相关t790m单核酸变异的上转换荧光测试试剂盒，其特征在于，包括以下原料：氨基磁珠、ucnps、hema、cdna、pbib、sulfo-smcc、cuso4、bpsd、cubr2、me6tren、aa、rease。

2.根据权利要求1所述的检测肺癌相关t790m单核酸变异的上转换荧光测试试剂盒，其特征在于，还包括te缓冲液、nhs、edc。

3.根据权利要求1所述的检测肺癌相关t790m单核酸变异的上转换荧光测试试剂盒，其特征在于，ucnps为上转换纳米材料nayf4:yb,er。

4.根据权利要求1所述的检测肺癌相关t790m单核酸变异的上转换荧光测试试剂盒，其特征在于，cdna的核苷酸序列如seq id no.1所示。

5.根据权利要求2所述的检测肺癌相关t790m单核酸变异的上转换荧光测试试剂盒，其特征在于，部分原料使用时需配制成溶液，其中，ucnps溶液浓度为5～7mg/ml，hema溶液浓度为40mm，cdna溶液的浓度为0.1μm，pbib溶液浓度为10mm，sulfo-smcc溶液的浓度为...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘艳菊，郭亮，侯梦园，李凤至，杨怀霞，
申请(专利权)人：河南中医药大学，
类型：发明
国别省市：