利拉鲁肽在制备促进外周神经髓鞘形成制剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了人胰高糖素样肽‑1类似物利拉鲁肽在制备促进外周神经髓鞘形成制剂中的应用。通过对早期生长因子20（krox20）和髓鞘基础蛋白（MBP）的测定，及坐骨神经超微结构的观察，证实了利拉鲁肽可促进外周神经髓鞘的形成。

The application of lilalutide in the preparation of preparation for promoting myelination of peripheral nerve

【技术实现步骤摘要】
利拉鲁肽在制备促进外周神经髓鞘形成制剂中的应用
本专利技术属于医学
，具体涉及人胰高糖素样肽-1类似物利拉鲁肽在制备促进外周神经髓鞘形成制剂中的应用。
技术介绍
利拉鲁肽(liraglutide，Arg34Lys26-(N-ε-(γ-Glu(N-α-十六酰基))))是一种人胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物，用于成人II型糖尿病患者控制血糖，尤其适用于单用二甲双胍或磺脲类药物治疗效果不佳的患者。该药物能够促进胰腺β细胞葡萄糖浓度依赖性的分泌胰岛素，维持体内血糖稳定，能量平衡。它的刺激会引起体内环磷酸腺苷(cAMP)的增加，很多研究表明，利拉鲁肽的激活可平衡体内细胞血糖稳定，为生理活动提供能量。外周神经细胞轴突外面包裹着由雪旺细胞组成的膜结构，称之为髓鞘。它的生理作用表现为绝缘，防止神经电冲动从神经元轴突传递至另一神经元轴突。在日常生活中，外周神经损伤是一种常见病征，车祸、地震等各种天灾人祸都有可能造成外周神经损伤，而损伤后髓鞘的形成是神经功能得以恢复的重要保证。大量研究指出，髓鞘形成需要环磷酸腺苷(cAMP)的刺激，而利拉鲁肽的刺激会引起体内环磷酸腺苷(cAMP)的增加，因此，专利技术人推测利拉鲁肽可能有助于外周神经髓鞘的形成。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供人胰高糖素样肽-1类似物利拉鲁肽在制备促进外周神经髓鞘形成制剂中的应用。为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用以下技术方案：利拉鲁肽在制备促进外周神经髓鞘形成制剂中的应用。利拉鲁肽在制备治疗外周神经髓鞘类疾病药物中的应用。本专利技术验证了人胰高糖素样肽-1类似物利拉鲁肽可促进外周神经髓鞘的形成，从而可用于制备促进外周神经髓鞘形成制剂和治疗外周神经髓鞘类疾病药物。附图说明图1为实施例1中坐骨神经组织MBP、Krox20基因表达分析。其中，Vehicle为对照组，Liraglutide为利拉鲁肽组。图2为实施例1中坐骨神经组织MBP、Krox20蛋白表达分析。其中，Vehicle为对照组，Liraglutide为利拉鲁肽组。图3为实施例1中坐骨神经的电镜图。其中，Vehicle为对照组，Liraglutide为利拉鲁肽组。图4为大鼠坐骨神经髓鞘厚度分析。****p<0.0001为Student'sttest分析。其中，Vehicle为对照组，Liraglutide为利拉鲁肽组。具体实施方式下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到，未详细描述的技术均按照本领域人员熟知的标准方法进行。本申请中提及的试剂等均有商品供应或以别的途径能为公众所得，它们仅作为举例，对本专利技术不是唯一的。可分别用其它适合的工具或生物材料来替代。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例1为研究人胰高糖素样肽-1类似物利拉鲁肽是否可以促进外周神经髓鞘的形成，本专利技术用其处理刚出生的大鼠(剂量为15μg/kg体重/天，皮下注射)，在处理后的8天收集坐骨神经组织用于后续分析。1、动物处理实验材料为刚出生的SD大鼠，向每只大鼠皮下注射利拉鲁肽，剂量为15μg/kg体重/天。对照组大鼠注射等剂量的磷酸缓冲液(PBS)。在处理后8天收集大鼠坐骨神经组织用于后续分析。每组实验动物8只，实验重复三次。2、坐骨神经组织RNA提取及基因表达检测使用Trizol试剂(Invitrogen公司)提取坐骨神经组织的RNA，再逆转录合成cDNA第一链(Roche公司)。采用SYBRGreenSupermix(Bio-Rad公司)试剂检测各基因表达情况，通过仪器iQ5MulticolorReal-TimePCRDetectionSystem(Bio-Rad公司产品)实现。数据分析采用方法来衡量mRNA水平。以18s看家基因来校准mRNA的水平。所使用的引物序列如下：18SrRNA正向引物:AGCTCCAATAGCGTATATTAAAG(SEQIDNO.1)；18SrRNA负向引物:CGGTCCTATTCCATTATTCCTA(SEQIDNO.2)；Krox20正向引物:TGGGTTTAAGTATGGCTGTATA(SEQIDNO.3)；Krox20负向引物:AGTTAGTGGTTCTGTGTTAGA(SEQIDNO.4)；MBP正向引物:GAGAGTGTGGGTTTAAGATAAC(SEQIDNO.5)；MBP负向引物:TCAATATCCAAGAACAGTAGGT(SEQIDNO.6)。3、坐骨神经蛋白提取及检测采用台式匀浆机(Polytron，PT2100)对坐骨神经组织进行磨碎匀浆处理。动物组织裂解液配方：25mMTris-HCl，pH7.4；100mMNaF；50mMNa4P2O7；10mMNa3VO4；10mMEGTA；10mMEDTA；1％NP-40；10μg/mLLeupeptin；10μg/mLAprotinin；2mMPMSF；20nMOkadaicacid。样品于4℃旋转裂解1小时后离心(12500rpm)30min，离心后去除上层脂质，上清转移至另一离心管并再次离心。这一过程重复2次以彻底去除蛋白样品中的脂质成分。样品蛋白含量用试剂盒测定(pierce公司产品)，根据所得到的结果将所有样品蛋白浓度调至相同水平，加入上样缓冲液混匀后于100℃煮沸5min，冷却至室温后冷冻保存，用于后续Westernblot分析。将上述步骤得到的样品用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离，并将胶上蛋白转至PVDF膜上。转膜后的PVDF膜用含5％牛血清白蛋白(BSA)的TBST(Tris-bufferedsalinesolution/Tween)缓冲液室温封闭1小时。封闭后的PVDF膜与一抗4℃共敷过夜，之后用TBST清洗PVDF膜三次，再与二抗室温孵育1小时，随后用TBST清洗三次。最后用化学发光反应体系(chemiluminescenceassaysystem,Roche)反应，曝光至X光片(Kodak)。蛋白表达水平定量采用Quantity-One(Bio-Rad)分析。所有抗体均购自于CellSignalingTechnology公司。早期生长因子20(krox20)和髓鞘基础蛋白(MBP)表达升高，是髓鞘形成过程中非常关键的基因。如图1所示，利拉鲁肽可有效激活这些基因的表达。同时，如图2所示，利拉鲁肽处理还可显著促进早期生长因子20(krox20)和髓鞘基础蛋白(MBP)表达的升高。4、坐骨神经组织结构透射电镜观察实验组和对照组随机抽取3只动物取坐骨神经作为电镜标本。在动物深度麻醉下，取坐骨神经组织并修切成电镜标本大小(1.2mm×1mm×1mm)，浸入到4％戊二醛溶液进行固定，并用1％的锇酸进行二次固定，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.利拉鲁肽在制备促进外周神经髓鞘形成制剂中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.利拉鲁肽在制备促进外周神经髓鞘形成制剂中的应用。

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晓宇，姚丽丽，袁瑾，孙诚，
申请(专利权)人：南通大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32