一种脑多肽的制备工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种脑多肽的制备工艺：(1)羊脑脱脂预处理；(2)菌株活化；(3)植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)3号厌氧发酵；(4)枯草芽孢杆菌B.subtilis sp.nk1好氧发酵；(5)高温灭活。

Preparation of brain peptide

【技术实现步骤摘要】
一种脑多肽的制备工艺
本专利技术涉及一种脑多肽的制备工艺，本专利技术属于生物
，尤其是涉及一种脑多肽的制备工艺，尤其是一种应用了益生菌发酵技术的脑多肽制备工艺。
技术介绍
脑蛋白水解产物是指是将脱脂后的动物脑髓经蛋白酶水解后产生的含有丰富的游离氨基酸和分子量低于10000的多肽等构成的复杂体系。动物蛋白水解产物目前主要作为脑血管病的特效药而应用于脑血管病的治疗当中，目前应用最多的是健康的猪脑经脱脂处理后，用蛋白酶进行水解而得到的猪脑蛋白水解液。而对于其他动物脑蛋白的研究并不深入，已经有研究者对鸡脑、牛脑、羊脑等蛋白进行酶解研究，但关于酶解产物功能性的报道还很少。脑蛋白水解液具有多种功能活性，现有技术有人通过研究发现,脑蛋白水解产物可改善大鼠脑缺血缺氧而造成的记忆和运动能力；脑蛋白水解产物能够很好的抑制受到脑损伤的大鼠血清中的超氧化物歧化酶和过氧化氢酶两种酶活性的降低。因此把脑蛋白酶解产物中的具有生物活性的功能肽段作为功能成分而添加到功能性食品中具有非常好的应用前景。世界卫生组织(WHO)和联合国粮食及农业组织(FAO)于2002年联合制定，将益生菌定义为“一类当以足够剂量给予宿主时，通过促进肠道微生态平衡对宿主产生有利影响的活的微生物制剂”，益生菌在人类有机体中具有许多有利的功能。羊脑蛋白含量丰富，酸性氨基酸含量高，是用于开发抗氧化活性肽的优良资源现有技术有人利用蛋白酶对羊脑蛋白进行水解，产生了抗氧化的多肽，但是其保健效果不足。本专利技术旨在提供一种脑多肽的制备工艺，尤其是一种应用了益生菌发酵技术的脑多肽制备工艺。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种脑多肽的制备工艺，尤其是一种应用了益生菌发酵技术的脑多肽制备工艺。发酵法是利用微生物的生命活动来制备活性肽，主要是应用微生物产生的蛋白酶对原料中蛋白酶解并修饰而得到的活性肽。该类肽没有其他方法所制备的肽的苦味，有的还有发酵的天然芳香味，发酵牛奶中的酪蛋白肽就是这样制备而来的，但是该法制备的活性肽需要的时间周期长。利用微生物产生的胞外酶不仅可对羊脑中的大分子蛋白质进行有序降解，产生各种短肽，而且微生物发酵过程产生的各种酶还会使羊脑中存在的少量脂肪和腥味物质分解，产生的各种有机酸如乳酸、乙酸和小分子脂肪酸等，使产品具有天然乳香味或特有的发酵香味。同时，微生物产生的各种维生素、氨基酸及某些生理活性因子，还会大大提高多肽产物的营养价值和保健功能。中国专利201907127773公开了一株抗血栓的枯草芽孢杆菌是B.subtilissp.nk1，该菌株保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC18057。该菌株的已知功能是产生高活性纤溶酶和凝乳酶。中国专利201010281481X公开了一株植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)3号，其在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC№.3698。该专利披露了所述植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)3可以产生对多种病原菌和腐败菌具有抑制作用的细菌素，该细菌素对蛋白酶敏感。申请人专利技术团队发现，对羊脑进行分段发酵，即先用植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)3号厌氧发酵，再用枯草芽孢杆菌B.subtilissp.nk1进行好氧发酵，可以得到水解率较高，具有显著保健活性的脑多肽。具体而言，水解蛋白主要是枯草芽孢杆菌B.subtilissp.nk1的作用，单独使用即可得到较好的水解率。然而联合使用植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)3号，可以进一步略微提高水解率，然而可以大幅提高保健功能，包括对脑部的保健效果以及更易于经肠吸收，然而使用其他植物乳杆菌并无该效果。本专利技术用到的主要检测方法是：总蛋白含量的测定：微量凯氏定氮法GB/T5009.5-2003可溶性多肽含量的测定福林-酚法：配制福林酚甲、乙液和一系列不同浓度梯度的牛血清白蛋白(BSA)标准溶液，以水作参比，640nm下测吸光度，绘制标准曲线。将羊脑蛋白的发酵液稀释适当的倍数，移取1mL按制作标准曲线的步骤操作，640nm下测吸光度，由回归方程得到对应的BSA含量，从而求得可溶性多肽的含量。水解度的测定：水解度(degreeofhydrolysis,DH)％＝(N2-N1)/(N0-N1)N0为羊脑蛋白中的总蛋白，N1为发酵前羊脑蛋白中的TCA可溶性多肽，N2为发酵液中的TCA可溶性多肽。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：一种脑多肽的制备工艺，其步骤如下：(1)羊脑脱脂预处理：采集新鲜羊脑，经清洗除杂等预处理后，预冻后冷冻干燥48h冻干，冻干后的羊脑粉碎，过100目筛，石油醚索氏提取脱脂12h，然后在通风橱中放置12h，使残留的石油醚挥发，于-60℃条件下保存；(2)菌株活化：植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)3号：取Lactobacillusplantarum3号接种到MRS固体培养基中划线，37℃厌氧培养24h，挑取单菌落接种至MRS液体培养基厌氧培养成0.5*107cfu/ml植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)3号种子液；枯草芽孢杆菌B.subtilissp.nk1活化：使用营养肉汤培养基(1L蒸馏水+20g葡萄糖+15g蛋白胨+5g氯化钠+0.5g牛肉膏)进行活化，活化条件为37℃摇床培养24h，活化后菌量为0.5×107CFU/mL；(3)植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)3号厌氧发酵：将脱脂预处理后的羊脑加上1倍的水混匀，高压灭菌后，按照3％接种量接种活化后的植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)3号，37℃，200r/min摇床厌氧培养；(4)枯草芽孢杆菌B.subtilissp.nk1好氧发酵：将步骤(3)厌氧发酵后的发酵液，调节pH为7.0，加入2g/L的海藻糖，按照4％接种量接种活化后的枯草芽孢杆菌B.subtilissp.nk1，30℃，200r/min摇床好氧培养；(5)高温灭活，在4000r/min下离心20min，收集上清液，三层滤纸抽滤后，置于旋转蒸发仪进行真空浓缩，直至原体积的1/4。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：对羊脑进行分段发酵，即先用植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)3号厌氧发酵，再用枯草芽孢杆菌B.subtilissp.nk1进行好氧发酵，可以得到水解率较高，具有显著保健活性的脑多肽。具体而言，水解蛋白主要是草芽孢杆菌B.subtilissp.nk1的作用，单独使用即可得到较好的水解率。然而联合使用植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)3号，可以进一步略微提高水解率，然而可以大幅提高保健功能，包括对脑部的保健效果以及更易于经肠吸收。具体实施方式下面将结本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脑多肽的制备方法，其特征在于，步骤如下：/n(1)羊脑脱脂预处理；/n(2)菌株活化；/n(3)植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)3号厌氧发酵；/n(4)枯草芽孢杆菌B.subtilis sp.nk1好氧发酵；/n(5)高温灭活浓缩；/n所述B.subtilis sp.nk1保藏编号为CGMCC 18057；/n所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)3号保藏编号为CGMCC№.3698。/n

【技术特征摘要】
1.一种脑多肽的制备方法，其特征在于，步骤如下：
(1)羊脑脱脂预处理；
(2)菌株活化；
(3)植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)3号厌氧发酵；
(4)枯草芽孢杆菌B.subtilissp.nk1好氧发酵；
(5)高温灭活浓缩；
所述B.subtilissp.nk1保藏编号为CGMCC18057；
所述植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)3号保藏编号为CGMCC№.3698。


2.权利要求1所述的脑多肽的制备方法，其特征在于：
所述步骤(1)羊脑脱脂预处理：
采集新鲜羊脑，经清洗除杂等预处理后，预冻后冷冻干燥48h冻干，冻干后的羊脑粉碎，过100目筛，石油醚索氏提取脱脂12h，然后在通风橱中放置12h，使残留的石油醚挥发，于-60℃条件下保存。


3.权利要求1或2所述的脑多肽的制备方法，其特征在于：
所述步骤(2)菌株活化：
植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)3号：取Lactobacillusplantarum3号接种到MRS固体培养基中划线，37℃厌氧培养24h，挑取单菌落接种至MRS液体培养基厌氧培养成0.5*107cfu/ml植物乳杆菌(Lactobacillusp...

【专利技术属性】
技术研发人员：聂建群，
申请(专利权)人：江西康宝医药生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江西;36