【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗甲状腺素运载蛋白抗体相关申请的交叉引用本申请根据35USC119(e)要求于2017年10月6日提交的美国临时申请号62/569,436和2017年12月14日提交的美国临时申请号62/598,965的权益，所述临时申请各自出于所有目的以引用方式整体并入。序列表引用以文件516711SEQLST.txt编写的序列表是59.6千字节，在2018年9月20日创建，并且在此以引用方式并入。
技术介绍
许多疾病被认为是由疾病特异性蛋白质的异常折叠和聚集引起的。这些蛋白质可以积累成被称为淀粉样蛋白的病理诊断性积累物，其通过某些组织染色来可视化。淀粉样蛋白被认为引发炎症应答，并对所涉及的组织具有多重负面后果。此外，较小的异常折叠蛋白质聚集体可能存在，并且发挥细胞毒作用。甲状腺素运载蛋白(TTR)是已知错误折叠并聚集(例如，经历淀粉样蛋白生成)的许多蛋白质之一。甲状腺素运载蛋白介导的淀粉样变性(ATTR)涵盖两种疾病形式：由突变或变体TTR错误折叠引起的家族性疾病，以及由野生型TTR的错误折叠和聚集引起的散发性非遗传性疾病。TTR淀粉样蛋白生成的过程可能引起神经系统和/或心脏以及其他组织的病理。
技术实现思路
在一方面，本专利技术提供了分离的单克隆抗体，其特异性结合到错误折叠的TTR而不结合到蛋白质的天然形式。此类抗体的实例结合到SEQIDNO:26的成熟区的氨基酸残基101-109内的表位。一些此类抗体与抗体18C5竞争结合到错误折叠的人TTR。一些此类抗体与18C5结合到人甲状腺素运载蛋...
【技术保护点】
1.一种分离的单克隆抗体，其与单克隆抗体18C5竞争结合到人甲状腺素运载蛋白(TTR)。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171006 US 62/569,436;20171214 US 62/598,9651.一种分离的单克隆抗体，其与单克隆抗体18C5竞争结合到人甲状腺素运载蛋白(TTR)。
2.如权利要求1所述的抗体，其与单克隆抗体18C5结合到人TTR上相同的表位。
3.如权利要求1所述的抗体，其包含单克隆抗体18C5的三个轻链CDR和三个重链CDR，其中18C5为小鼠抗体，其特征在于具有包含SEQIDNO:81的氨基酸序列的成熟重链可变区和具有包含SEQIDNO:87的氨基酸序列的成熟轻链可变区。
4.如权利要求3所述的抗体，其中所述三个重链CDR如由Kabat/Chothia复合物所定义的(SEQIDNO:5、7和9)并且所述三个轻链CDR如由Kabat/Chothia复合物所定义的(SEQIDNO:11、13和15)。
5.如权利要求1所述的抗体，其为18C5或其嵌合、贴面化或人源化形式。
6.一种分离的单克隆抗体，其结合到SEQIDNO:26的成熟区中的位置101-109内的表位。
7.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其为单克隆抗体。
8.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其为嵌合抗体、人源化抗体、贴面化抗体或人抗体。
9.如权利要求8所述的抗体，其中所述成熟重链可变区具有与人序列≥85％的同一性。
10.如权利要求8所述的抗体，其中所述成熟轻链可变区具有与人序列≥85％的同一性。
11.如权利要求8所述的抗体，其中所述成熟重链可变区和所述成熟轻链可变区中的每一者具有与人种系序列≥85％的同一性。
12.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其中所述抗体为人源化抗体。
13.如前述权利要求中任一项所述的抗体，其具有人IgG1同种型。
14.如权利要求1-13中任一项所述的抗体，其具有人IgG2或IgG4同种型。
15.如权利要求1所述的抗体，其为特异性结合到甲状腺素运载蛋白的人源化或嵌合18C5抗体，其中18C5为小鼠抗体，其特征在于SEQIDNO:81的成熟重链可变区和SEQIDNO:87的成熟轻链可变区。
16.如权利要求15所述的人源化抗体，其包含有包含18C5的所述三个重链CDR的人源化成熟重链可变区和包含18C5的所述三个轻链CDR的人源化成熟轻链可变区。
17.如权利要求16所述的人源化抗体，其中所述CDR的定义选自由以下组成的组：Kabat、Chothia、Kabat/Chothia复合物、AbM和Contact定义。
18.如权利要求17所述的人源化抗体，其中所述人源化成熟重链可变区包含18C5的所述三个Kabat/Chothia复合物重链CDR(SEQIDNO:5、7和9)，并且所述人源化成熟轻链可变区包含18C5的所述三个Kabat/Chothia复合物轻链CDR(SEQIDNO:11、13和15)。
19.如权利要求17所述的人源化抗体，其中所述人源化成熟重链可变区包含18C5的所述三个Kabat重链CDR(SEQIDNO:93、SEQIDNO:7和SEQIDNO:9)，并且所述人源化成熟轻链可变区包含18C5的所述三个Kabat轻链CDR(SEQIDNO:11、SEQIDNO:13和SEQIDNO:15)。
20.如权利要求17所述的人源化抗体，其中所述人源化成熟重链可变区包含18C5的所述三个Chothia重链CDR(SEQIDNO:94、SEQIDNO:96和SEQIDNO:9)，并且所述人源化成熟轻链可变区包含18C5的所述三个Chothia轻链CDR(SEQIDNO:11、SEQIDNO:13和SEQIDNO:15)。
21.如权利要求17所述的人源化抗体，其中所述人源化成熟重链可变区包含18C5的所述三个AbM重链CDR(SEQIDNO:5、SEQIDNO:97和SEQIDNO:9))，并且所述人源化成熟轻链可变区包含18C5的所述三个AbM轻链CDR(SEQIDNO:11、SEQIDNO:13和SEQIDNO:15。
22.如权利要求17所述的人源化抗体，其中所述人源化成熟重链可变区包含18C5的所述三个Contact重链CDR(SEQIDNO100-102)，并且所述人源化成熟轻链可变区包含18C5的所述三个Contact轻链CDR(SEQIDNO:95、SEQIDNO:98和SEQIDNO:99)。
23.如权利要求15至22中任一项所述的人源化抗体，其包含具有与SEQIDNO:85-86中的任一个的至少90％同一性的氨基酸序列的人源化成熟重链可变区和具有与SEQIDNO:91-92中的任一个的至少90％同一性的氨基酸序列的人源化成熟轻链可变区。
24.如权利要求23所述的人源化抗体，其中以下位置中的至少一个被指定的氨基酸占据：H37被V或A占据、H45被L或Q占据、H47被L或W占据、H48被L或I占据、H49被A或G占据并且H94被S或R占据。
25.如权利要求24所述的人源化抗体，其中所述VH区中的位置H37、H45、H47、H48、H49和H94分别被A、Q、W、I、G和R占据。
26.如权利要求23所述的人源化抗体，其中以下位置中的至少一个被指定的氨基酸占据：L2被I或V占据并且L45被Q或R占据。
27.如权利要求26所述的人源化抗体，其中所述VL区中的位置L2和L45分别被V和R占据。
28.如权利要求23所述的人源化抗体，其包含具有与SEQIDNO:85-86中的任一个的至少95％同一性的氨基酸序列的成熟重链可变区和具有与SEQIDNO:91-92中的任一个的至少95％同一性的氨基酸序列的成熟轻链可变区。
29.如权利要求28所述的人源化抗体，其包含具有与SEQIDNO:85-86中的任一个的至少98％同一性的氨基酸序列的成熟重链可变区和具有与SEQIDNO:91-92中的任一个的至少98％同一性的氨基酸序列的成熟轻链可变区。
30.如权利要求29所述的人源化抗体，其中所述成熟重链可变区具有SEQIDNO:85-86中的任一个的氨基酸序列，并且所述成熟轻链可变区具有SEQIDNO:91-92中的任一个的氨基酸序列。
31.如权利要求30所述的人源化抗体，其中所述成熟重链可变区具有SEQIDNO:85的氨基酸序列，并且所述成熟轻链可变区具有SEQIDNO:91的氨基酸序列。
32.如权利要求30所述的人源化抗体，其中所述成熟重链可变区具有SEQIDNO:85的氨基酸序列，并且所述成熟轻链可变区具有SEQIDNO:92的氨基酸序列。
33.如权利要求30所述的人源化抗体，其中所述成熟重链可变区具有SEQIDNO:86的氨基酸序列，并且所述成熟轻链可变区具有SEQIDNO:91的氨基酸序列。
34.如权利要求30所述的人源化抗体，其中所述成熟重链可变区具有SEQIDNO:86的氨基酸序列，并且所述成熟轻链可变区具有SEQIDNO:92的氨基酸序列。
35.如权利要求1至34中任一项所述的抗体，其为完整抗体。
36.如权利要求1至34中任一项所述的抗体，其为结合片段。
37.如权利要求36所述的抗体，其中所述结合片段为单链抗体、Fab或Fab’2片段。
38.如权利要求15至35中任一项所述的人源化抗体，其中所述成熟轻链可变区与轻链恒定区融合，并且所述成熟重链可变区与重链恒定区融合。
39.如权利要求38所述的人源化抗体，其中所述重链恒定区为天然人重链恒定区的突变形式，所述突变形式与Fcγ受体的结合相对于所述天然人重链恒定区减少。
40.如权利要求38或39所述的人源化抗体，其中所述重链恒定区具有IgG1同种型。
41.如权利要求38所述的人源化抗体，其中所述成熟重链可变区与具有SEQIDNO:22的序列的重链恒定区融合，并且/或者所述成熟轻链可变区与具有SEQIDNO:24的序列的轻链恒定区融合。
42.一种药物组合物，其包含如前述权利要求中任一项所述的第一抗体、结合由18C5结合的表位不同的TTR的表位的第二抗体以及药学上可接受的载剂。
43.如权利要求42所述的药物组合物，其中所述第二抗体为9D5、14G8、5A1、6C1、AD7F6、RT24、NI-301.35G11、MFD101、MDF102、MFD103、MFD105、MFD107、MFD108、MFD109、MFD111、MFD114或其嵌合版本或人源化版本。
44.如权利要求42所述的药物组合物，其中所述第二抗体为结合在TTR的残基89-97、118-122、115-124、53-63、54-61、36-49、49-61、109-121、30-66、70-127、80-127、90-127、100-127、110-127或115-127内的抗体。
45.一种双特异性抗体，其包含两个抗原结合区、特异性结合在TTR的101-109内的第一抗原结合结构域以及特异性结合TTR的另一区的第二抗原结合结构域。
46.如权利要求45所述的双特异性抗体，其中所述第二抗原结合结构域为来自以下的抗原结合结构域：9D5、14G8、5A1、6C1、AD7F6、RT24、NI-301.35G11、MFD101、MDF102、MFD103、MFD105、MFD107、MFD108、MFD109、MFD111、MFD114或其嵌合版本或人源化版本。
47.如权利要求45所述的双特异性抗体，其中所述第二抗原结合结构域结合在TTR的残基89-97、118-122、115-124、53-63、54-61、36-49、49-61、109-121、30-66、70-127、80-127、90-127、100-127、110-127或115-127内。
48.一种药物组合物，其包含如权利要求1至41和45至47中任一项所述的抗体和药学上可接受的载剂。
49.一种核酸，其编码如权利要求1至41和/或45至47中任一项所述的抗体的重链和/或轻链。
50.一种重组表达载体，其包含如权利要求49所述的核酸。
51.一种宿主细胞，其用如权利要求50所述的重组表达载体转化。
52.一种使抗体人源化的方法，所述方法包括：
(a)选择人受体抗体；
(b)鉴定待保留的小鼠抗体的氨基酸残基；
(c)合成编码包含小鼠抗体重链CDR的人源化重链的核酸，和编码包含小鼠抗体轻链CDR的人源化轻链的核酸；以及
(d)在宿主细胞中表达所述核酸以产生人源化抗体；
其中所述小鼠抗体包含具有SEQIDNO:81的氨基酸序列的成熟重链可变区和具有SEQIDNO:87的氨基酸序列的成熟轻链可变区。
53.一种生产人源化、嵌合或贴面化抗体的方法，所述方法包括：
(a)培养用编码所述抗体的重链和轻链的核酸转化的细胞，使得所述细胞分泌所述抗体；以及
(b)从细胞培养基中纯化所述抗体；
其中所述抗体为18C5的人源化、嵌合或贴面化形式。
54.一种生产细胞系的方法，所述细胞系产生人源化、嵌合或贴面化抗体，所述方法包括：
(a)将编码抗体的重链和轻链和可选择标记的载体引入细胞中；
(b)在选择所述载体的拷贝数增加的细胞的条件下使所述细胞增殖；
(c)从所选细胞中分离单细胞；以及
(d)将由基于抗体产量选择的单细胞克隆的细胞入库；
其中所述抗体为18C5的人源化、嵌合或贴面化形式。
55.如权利要求54所述的方法，其还包括在选择性条件下使所述细胞增殖，以及筛选天然表达并分泌至少100mg/L/106个细胞/24h的细胞系。
56.一种抑制或减少受试者中的甲状腺素运载蛋白聚集的方法，所述受试者患有甲状腺素运载蛋白介导的淀粉样变性或处于发展甲状腺素运载蛋白介导的淀粉样变性的风险中，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求1至41和45至47中任一项所述的抗体的有效方案，从而抑制或减少所述受试者中的甲状腺素运载蛋白聚集。
57.一种抑制或减少受试者中的甲状腺素运载蛋白原纤维形成的方法，所述受试者患有甲状腺素运载蛋白介导的淀粉样变性或处于发展甲状腺素运载蛋白介导的淀粉样变性的风险中，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求1至41和45至47中任一项所述的抗体的有效方案，从而抑制或减少所述受试者中的甲状腺素运载蛋白原纤维形成。
58.一种减少受试者中的甲状腺素运载蛋白沉积物和聚集体的方法，所述受试者患有甲状腺素运载蛋白介导的淀粉样变性或处于发展甲状腺素运载蛋白介导的淀粉样变性的风险中，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求1至41和45至47中任一项所述的抗体的有效方案，从而减少所述受试者中的甲状腺素运载蛋白沉积物。
59.一种清除受试者中的甲状腺素运载蛋白淀粉样蛋白的方法，所述受试者患有甲状腺素运载蛋白介导的淀粉样变性或处于发展甲状腺素运载蛋白介导的淀粉样变性的风险中，所述方法包括向所述受试者施用如权利要求1至41和45至47中任一项所述的抗体的有效方案，从而相对于未接受所述抗体的患有甲状腺素运载蛋白介导的淀粉样变性或处于发展甲状腺素运载蛋白介导的淀粉样变性的风险中的受试者，将甲状腺素运载蛋白淀粉样蛋白从所述受试者中清除。
60.一种治疗或实现预防受试者中的甲状腺素运载蛋白介导的淀粉样变性的方法，其包括向所述受试者施用如权利要求1至41和45至47中任一项所述的抗体的有效方案。
61.一种延迟受试者中的甲状腺素运载蛋白介导的淀粉样变性的发作的方法，其包括向所述受试者施用如权利要求1至41和45至47中任一项所述的抗体的有效方案。
62.如权利要求56至61中任一项所述的方法，其中所述甲状腺素运载蛋白介导的淀粉样变性与选自以下中的任一种的病状相关：心肌病或肥大、家族性淀粉样多发性神经病、中枢神经系统选择性淀粉样变性(CNSA)、老年全身性淀粉样变性、老年心脏淀粉样变性、椎...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·R·萨尔曼，S·亚历山大，R·巴布尔，J·N·海加凯，塔洛陈·S·尼扎，
申请(专利权)人：普罗塞纳生物科学有限公司，
类型：发明
国别省市：爱尔兰;IE
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