一种检测三氯杀螨醇的试纸条及方法技术

本发明专利技术公开了一种检测三氯杀螨醇的试纸条及方法。该试纸条包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板，所述反应膜上具有包被有三氯杀螨醇半抗原‑载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，所述结合物释放垫上喷涂有三氯杀螨醇单克隆抗体‑胶体金标记物。本发明专利技术还提供一种应用上述试纸条检测水果样品中三氯杀螨醇的方法。本发明专利技术提供的试纸条具有操作简单、灵敏度高、检测速度快、成本低、适于大批量样本筛查等优点，能够满足我国食品监管部门开展现场监控和检测工作。

【技术实现步骤摘要】
一种检测三氯杀螨醇的试纸条及方法
本专利技术涉及一种检测三氯杀螨醇的试纸条及方法，具体涉及一种用于检测三氯杀螨醇的胶体金试纸条，其特别适用于水果中三氯杀螨醇残留的检测。
技术介绍
三氯杀螨醇(dicofol)是一种有机氯杀螨剂，可防治棉花、果树、蔬菜等农作物上的螨类，对成螨、若螨、卵有很强的触杀和胃毒作用，药效期和速效期长。研究表明，该药物对人畜有一定毒性，主要中毒症状为头痛、头晕、多汗、胸闷、瞳孔散大、视物不清，以及恶心、呕吐、腹泻，局部接触可引起接触性皮炎。我国已将三氯杀螨醇禁用，国家标准GB2763-2019《食品安全国家标准食品中农药最大残留限量》中也规定了水果中三氯杀螨醇的残留限量为1mg/kg。目前已报道的检测三氯杀螨醇的方法主要是气相色谱法、气相色谱-质谱法和液相色谱串联质谱法等仪器方法。这些方法均须在实验室条件下操作，样品前处理繁琐费时，还需配备昂贵的仪器设备，检测成本较高、耗时长、操作复杂，在实际应用过程中有很大的限制性，难以满足大量样品和现场样品快速检测的需要。因此，开发一种简单快速、适用于水果中三氯杀螨醇残留的胶体金试纸条，可满足大量样品现场筛选和监控，能够更好地满足我国食品监管部门等开展检测工作。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能够检测水果中三氯杀螨醇残留的胶体金试纸条，并且提供一种高效、准确、简便、适于现场监控和大量样本筛查的检测方法。本专利技术所提供的检测三氯杀螨醇的试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板；所述反应膜上具有包被有三氯杀螨醇半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线；所述结合物释放垫上喷涂有三氯杀螨醇单克隆抗体-胶体金标记物。所述三氯杀螨醇单克隆抗体是以三氯杀螨醇半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得。所述三氯杀螨醇半抗原-载体蛋白偶联物由三氯杀螨醇半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白，所述三氯杀螨醇半抗原是由邻氯苯乙酸、氯苯和三氯乙醛在硫酸的催化下反应得到，其分子结构式为：所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫依次粘贴在底板上，所述结合物释放垫1/3～1/2被覆盖于样品吸收垫下。所述底板可为PVC底板或其他硬质不吸水的材料；所述样品吸收垫可为吸滤纸或滤油纸；所述结合物释放垫可为玻璃棉或聚酯材料；所述吸水垫为吸水纸；所述反应膜可为硝酸纤维素膜或醋酸纤维素膜。本专利技术的另一个目的是提供一种制备上述试纸条的方法，其包括步骤：1)制备喷涂有三氯杀螨醇单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；2)制备具有包被有三氯杀螨醇半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。具体地说，步骤包括：1)由邻氯苯乙酸、氯苯和三氯乙醛在硫酸的催化下反应，制备三氯杀螨醇半抗原；2)将三氯杀螨醇半抗原与载体蛋白偶联，制备三氯杀螨醇半抗原-载体蛋白偶联物；3)用三氯杀螨醇半抗原-载体蛋白偶联物免疫小鼠，将小鼠脾细胞和小鼠骨髓瘤细胞通过融合、筛选，得到分泌三氯杀螨醇单克隆抗体的杂交瘤细胞株；4)提取小鼠IgG免疫健康山羊，得到羊抗鼠抗抗体；5)分别将三氯杀螨醇半抗原-载体蛋白偶联物和羊抗鼠抗抗体包被于反应膜的检测线(T)和质控线(C)上；6)用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；7)将制备的三氯杀螨醇单克隆抗体加入到制备的胶体金中，得到三氯杀螨醇单克隆抗体-胶体金标记物；8)将三氯杀螨醇单克隆抗体-胶体金标记物喷涂在结合物释放垫上，37℃烘1h后取出，置于干燥环境中保存备用；9)将样品吸收垫用含0.5％牛血清白蛋白、pH为7.2、0.1mol/L的磷酸盐缓冲液浸泡2h，37℃下烘干2h；10)在底板上按顺序粘贴上样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫，结合物释放垫从起始端有1/3区域被样品吸收垫覆盖。最后切成3mm宽的小条，加塑料盒，真空包装，4～30℃条件下保存12个月。本专利技术的另一个目的是提供一种应用上述试纸条检测水果中三氯杀螨醇残留的方法，它包括步骤：(1)样品前处理；(2)用试纸条进行检测；(3)分析检测结果。本专利技术的三氯杀螨醇快速检测试纸条采用高度特异性的抗体抗原反应及免疫层析分析技术，将三氯杀螨醇单克隆抗体-胶体金标记物固定于结合物释放垫上，样品中的三氯杀螨醇在流动过程中与结合物释放垫上的三氯杀螨醇单克隆抗体-胶体金标记物结合，形成药物-抗体-胶体金标记物。样本中的药物与反应膜检测线上的三氯杀螨醇半抗原-载体蛋白偶联物竞争结合三氯杀螨醇单克隆抗体-胶体金标记物，根据检测线红色条带深浅来判断待测样品液中是否含有三氯杀螨醇残留。检测时，样品经处理后滴入试纸条卡孔内，当三氯杀螨醇在样品中的浓度低于检测限或为零时，单克隆抗体-胶体金标记物在层析过程中会与固定在反应膜上的三氯杀螨醇半抗原-载体蛋白偶联物结合，在检测线(T)和质控线(C)上各出现一条红色条带，且T线显色比C线显色深或与C线显色一致；如果三氯杀螨醇在样品中的浓度等于或高于检测限，单克隆抗体-胶体金标记物会与三氯杀螨醇全部结合，从而在T线处因为竞争反应不会与三氯杀螨醇半抗原-载体蛋白偶联物结合而不出现红色条带或比C线显色浅。如图3所示。阴性：当质控线(C)显示出红色条带，检测线(T)同时也显示出红色条带，且(T)线颜色接近或深于(C)线时，判为阴性。阳性：当质控线(C)显示出红色条带，而检测线(T)不显色或(T)线颜色浅于(C)线时，判为阳性。无效：当质控线(C)不显示出红色条带，则无论检测线(T)显示出红色条带与否，该试纸条均判为无效。本专利技术的试纸条具有灵敏度高、特异性强、成本低、操作简单、检测时间短、适合各种单位使用、储存简单、保质期长的优点。用本专利技术试纸条检测三氯杀螨醇残留的方法简便、快速、直观、准确、适用范围广、成本低、易推广使用。附图说明图1为三氯杀螨醇半抗原合成图。图2为试纸条剖面结构示意图。图3为试纸条检测结果判定图。具体实施方式下面结合具体的实施例来进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术，而不用来限制本专利技术的范围。实施例1检测三氯杀螨醇的试纸条的制备该试纸条的制备方法主要包括以下步骤：1)制备喷涂有三氯杀螨醇单克隆抗体-胶体金标记物的结合物释放垫；2)制备具有包被有三氯杀螨醇半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线的反应膜；3)将1)和2)制备好的结合物释放垫、反应膜与样品吸收垫、吸水垫和底板组装成试纸条。下面分步详细叙述：1、三氯杀螨醇半抗原的合成(合成路线见附图1)取邻氯苯乙酸1.7g加四氯化碳100mL溶解，加入氯苯本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测三氯杀螨醇的试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板，所述反应膜上具有包被有三氯杀螨醇半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，所述结合物释放垫上喷涂有三氯杀螨醇单克隆抗体-胶体金标记物；所述三氯杀螨醇单克隆抗体是以三氯杀螨醇半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得；所述三氯杀螨醇半抗原-载体蛋白偶联物由三氯杀螨醇半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白，其特征在于所述三氯杀螨醇半抗原是由邻氯苯乙酸、氯苯和三氯乙醛在硫酸的催化下反应得到，其分子结构式为：/n

【技术特征摘要】
1.一种检测三氯杀螨醇的试纸条，包括样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、吸水垫和底板，所述反应膜上具有包被有三氯杀螨醇半抗原-载体蛋白偶联物的检测线和包被有羊抗鼠抗抗体的质控线，所述结合物释放垫上喷涂有三氯杀螨醇单克隆抗体-胶体金标记物；所述三氯杀螨醇单克隆抗体是以三氯杀螨醇半抗原-载体蛋白偶联物作为免疫原制备获得；所述三氯杀螨醇半抗原-载体蛋白偶联物由三氯杀螨醇半抗原与载体蛋白偶联得到，所述载体蛋白为牛血清白蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白、甲状腺蛋白或人血清白蛋白，其特征在于所述三氯杀螨醇半抗原是由邻氯苯乙酸、氯苯和三氯乙醛在硫酸的催化下反应得到，其分子结构式为：





2.如权利要求1所述的试纸条，其特征在于所述样品吸收垫、结合物释放垫、反应膜、...

【专利技术属性】
技术研发人员：万宇平，王兆芹，崔海峰，宋灏，赵正苗，凡静静，任西杰，郝晓娜，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11