一种快速检测新型冠状病毒的荧光免疫层析试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及一种快速检测新型冠状病毒的荧光免疫层析试剂盒，该试剂盒包含检测卡，该检测卡包括样品垫、荧光垫、检测垫、吸样垫及底板，所述荧光垫上涂覆有荧光微球标记抗体的涂层，所述的抗体包括重组SARS‑CoV‑2抗原；本发明专利技术优化了荧光微球标记抗体过程中所用的缓冲液体系，使检测效率得到明显提升，可以更好的满足临床上大量待测样本的检测需求。

A novel coronavirus detection kit for rapid detection of coronavirus

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测新型冠状病毒的荧光免疫层析试剂盒
本专利技术涉及生物技术检测领域，具体涉及一种检测更快捷、更方便的荧光免疫层析试剂盒。
技术介绍
2019新型冠状病毒(SARS-CoV-2)潜伏期在10天左右，最短1天，最长24天，而且潜伏期具有传染性，也就是说，在个体已经感染病毒但未发病的这段时间，也有传染他人的可能性。人感染了SARS-CoV-2后可表现为头痛、鼻塞、打喷嚏、咳嗽等症状，与流感和普通感冒类似，普通诊断方法难以辨别。常见体征有呼吸道症状、发热、干咳、乏力、气促和呼吸困难等。在较严重病例中，感染可导致重症肺炎、呼吸衰竭、严重急性呼吸综合征、脓毒性休克、多器官功能衰竭，甚至死亡。2019新型冠状病毒感染的肺炎潜伏期长且具传染性，发病后症状与感冒类似难分辨，而重症又可致命，风险人群基数大等这些因素，都是快速控制疫情的难题，而解决这个难题的首要任务就是尽早诊断出感染患者，以便隔离治疗，避免扩散。目前临床检测该病毒主要采用核酸PCR法，该方法的检测时间长、对检测设备及检测人员要求高，基层医疗机构基本无法检测，所以该法难以应对大量、分散性的待检人群，诊断滞后必然会导致疫情的恶化，因此，急需更为简便、快速且针对性强的检测产品。荧光免疫层析法检测试剂属于POCT(point-of-caretesting，即时检测或床旁检测)类检测产品，因具有检测方便、快捷、综合成本低等特点，在临床上得到广泛应用，其检测时间通常为15-20分钟。虽然15-20分钟的检查时长在日常临床应用中具有优势，但当面临短时大量待测样本时，则捉襟见肘，无法应付。所以，为了更快打赢这场抗疫战争，以及应对以后可能出现的类似情况，我们应该对该检测方法继续优化，进一步缩短检测时间。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，提供一种更方便快捷的测定2019新型冠状病毒的检测产品，具体是一种检测更快速的荧光免疫层析检测试剂盒产品，实现10-15分钟、甚至5-10分钟完成检测的目的。为解决以上技术问题，本专利技术提供一种快速检测新型冠状病毒的荧光免疫层析试剂盒，具体技术方案如下：本专利技术所述荧光免疫层析试剂盒包含检测卡，该检测卡包括样品垫、荧光垫、具有检测线和质控线的检测垫、吸样垫及底板。其中，所述荧光垫上涂覆有荧光微球标记抗体的涂层，所述的抗体包括重组SARS-CoV-2抗原；所述的荧光微球标记抗体其标记过程中所用的活化缓冲液为pH值6.3±0.4、摩尔浓度0.015-0.022的MES溶液；所述的检测线包被有抗人IgM单克隆抗体或抗人IgG单克隆抗体。所述的检测卡还包括疏水性外壳，该外壳上设有加样孔及检视窗。所述的样品垫、荧光垫、检测垫、吸样垫和底板组成的试纸条固定在该外壳内。所述的加样孔位于所述样品垫上方，所述检视窗位于所述检测垫上方。2019新型冠状病毒自引起广泛关注以来不过1个月时间，国内外对该病毒及其引起的疾病研究还非常有限，但就目前研究结果可以确定的是，通过检测该病毒的IgM/IgG抗体可以进行2019新型冠状病毒感染肺炎的诊断。本专利技术所述的检测线可以是1条，包被抗人IgM单克隆抗体或抗人IgG单克隆抗体，用于检测SARS-CoV-2的IgM抗体或IgG抗体；所述的检测线也可以是2条，分别包被抗人IgM单克隆抗体和抗人IgG单克隆抗体，用于同时检测SARS-CoV-2的IgM抗体和IgG抗体。荧光免疫层析检测产品的原理及其结构为公知技术，实现对不同检测对象的检测主要是通过调整工艺部分，该工艺包括标记工艺和包被工艺。其中的标记工艺直接影响检测时间的长短。为提高检测SARS-CoV-2IgM、IgG抗体的速度，本专利技术的专利技术人对标记工艺中工艺步骤、参数及缓冲液等的选择进行了大量的实验研究，结果发现缓冲液的选择最为关键，尤其是活化环节的缓冲液。当以pH值6.3±0.4、摩尔浓度0.015-0.022的MES(2-(N-吗啉)乙磺酸)溶液作为活化缓冲液时，微球更容易释放，层析速度有明显提升，可以突破通常所需的15分钟限。为进一步缩短检测时间，所述活化缓冲液优选为pH值6.5±0.2摩尔浓度0.018-0.022的MES溶液。在一优选实施例中，该活化缓冲液为pH值6.5、摩尔浓度0.02的MES溶液，终产品的检查时间达到12-13分钟。MES溶液的配制，只需按目标浓度称取定量MES加水溶解并用氢氧化钠溶液调节pH后定容即可。缓冲液的体系(溶质选择)、摩尔浓度及pH值都是微球分散的影响因素，所以筛选出一种适合的缓冲液很难通过一一实践的方法得到，而是需要结合公知技术及实验结果进行深入分析，并在此基础上不断尝试才有可能实现。专利技术人在上述选定活化缓冲液基础上对偶联缓冲液进行了筛选，并确定以pH值7.0±0.1、摩尔浓度0.01的磷酸盐缓冲液(PB缓冲液)为偶联缓冲液，此时的检查时间可降至约10分钟。所述的磷酸盐缓冲液为磷酸二氢钠溶液和磷酸氢二钠溶液按一定比例混合而成，具体配制方法为公知技术。相对于常用浓度及pH值的PBS缓冲液(主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl)及其他PB缓冲液，pH值7.0±0.1、摩尔浓度0.01的PB缓冲液，不但有助于微球释放而且释放更为稳定，即，重复性更好。为进一步提高微球释放速度，专利技术人对荧光垫的预处理方法也做了大量研究。荧光垫处理液的配方复杂，优化难度很大，在不断的实验过程中专利技术人惊喜的发现，采用以下述方法配置的处理液处理过的荧光垫制成的试剂卡，检测时间可以降至10分钟内：称取BSA(牛血清白蛋白)0.9-1.1g，蔗糖2.8-3.2g，海藻糖1.8-2.2g，量取吐温-20180-220μL，加入摩尔浓度为0.05、pH值至7.4±0.2的Tris-HCl缓冲液溶解并定容至100mL。Tris为三羟甲基氨基甲烷的缩写。在另一优选实施例中，处理液的配置方法为：BSA1g，蔗糖3g，海藻糖2g，量取吐温-20200μL，加入摩尔浓度为0.05、pH值至7.4的Tris-HCl缓冲液溶解并定容至100mL。该实施例对应试剂盒的检测时间可达6分钟左右，只有常规荧光免疫层析检测试剂盒所需检测时间的30～40％，大大提高了检测SARS-CoV-2的效率。所述的处理液中还含有防腐剂，该防腐剂Proclin-300或叠氮化钠，优选为Proclin-300，其在处理液体中的积浓度为0.04-0.06％，优选为0.05％本专利技术所述荧光垫上的荧光微球标记抗体，还包括鸡IgY抗体。优选地，质控线通过包被包括但不限于羊抗鼠IgG、羊抗鸡IgY或羊抗兔IgG等抗体形成；所述检测垫为硝酸纤维素膜，进一步优选为孔径5～12um的多孔样结构膜；上样垫、荧光垫的材质为玻璃纤维素膜或无纺布，吸样垫的材质为吸水滤纸，底板的材质为塑料。所述的荧光微球选自修饰过的聚苯乙烯微球，内部填充镧系元素的螯合物，选自括铕(Eu)、铽(Tb)、钐(Sm)、钕(Nd)或镝(Dy)中的一种。荧光微球检测技术和免疫层析检测技术是已知的，本专利技术所述的快速检测新型冠状病毒的荧本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速检测新型冠状病毒的荧光免疫层析试剂盒，该试剂盒包含检测卡，所述检测卡包括样品垫、荧光垫、具有检测线和质控线的检测垫、吸样垫及底板，其特征在于：所述荧光垫上涂覆有荧光微球标记抗体的涂层，所述的抗体包括重组SARS-CoV-2抗原；所述的荧光微球标记抗体其标记过程中所用的活化缓冲液为pH值6.3±0.4、摩尔浓度0.015-0.022的MES溶液；所述的检测线包被有抗人IgM单克隆抗体或抗人IgG单克隆抗体。/n

【技术特征摘要】
1.一种快速检测新型冠状病毒的荧光免疫层析试剂盒，该试剂盒包含检测卡，所述检测卡包括样品垫、荧光垫、具有检测线和质控线的检测垫、吸样垫及底板，其特征在于：所述荧光垫上涂覆有荧光微球标记抗体的涂层，所述的抗体包括重组SARS-CoV-2抗原；所述的荧光微球标记抗体其标记过程中所用的活化缓冲液为pH值6.3±0.4、摩尔浓度0.015-0.022的MES溶液；所述的检测线包被有抗人IgM单克隆抗体或抗人IgG单克隆抗体。


2.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述的活化缓冲液为pH值6.5±0.2、摩尔浓度0.018-0.022的MES溶液。


3.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述的荧光微球标记抗体标记过程中所用的偶联缓冲液为pH值7.0±0.1、摩尔浓度0.01的磷酸盐缓冲液。


4.根据权利要求1所述的荧光免疫层析试剂盒，其特征在于：所述的荧光垫需要进行预处理，该过程中所用的处理液的配制方法为：称取B...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡文波，晏小云，
申请(专利权)人：江苏扬新生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32