一种花生组培苗芽诱导培养基及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种花生组培苗芽诱导培养基及其制备方法和应用，属于农作物生产技术领域。本发明专利技术所述花生组培苗芽诱导培养基包括混合溶液和凝固剂，每1L混合溶液包括4～4.8g的MS Medium培养基，25～35g蔗糖，0.8～1.2mL的15～25mmol/L的6‑苄基腺嘌呤溶液，0.8～1.2mL的8～12mmol/L的噻苯隆溶液和水；所述凝固剂包括Phytagel植物凝胶。本发明专利技术提供的花生组培苗芽诱导培养基具有良好的花生组培苗芽诱导作用，经芽诱导培养的外植体的丛生芽诱导率高。

A culture medium for peanut shoot induction in tissue culture and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种花生组培苗芽诱导培养基及其制备方法和应用
本专利技术属于农作物生产
，具体涉及一种花生组培苗芽诱导培养基及其制备方法和应用。
技术介绍
花生组织培养对花生的品种改良、新品种繁殖、遗传转化、种质保存和抗性突变体的筛选等具有重要意义。由于花生的再生难度较大且有基因型特异性，研究进展较为缓慢，特别是如何建立高效、稳定、能够连续获得再生植株的体系仍需要更进一步研究。组培苗的芽诱导效率是影响花生高效稳定再生体系建立的关键因素。组培苗丛生芽诱导能力受到基因型、外植体类型、基本培养基、植物激素、蔗糖等的影响较大，解决这些问题是高效再生体系建立的根本。目前花生组培缺少一套高效稳定的丛生芽诱导方法，芽诱导率低，诱导芽数少，芽细弱，生长缓慢，成苗质量较差。
技术实现思路
有鉴于
技术介绍
中的问题，本专利技术的目的在于提供一种花生组培苗芽诱导培养基及其制备方法和应用，提高花生组培苗的丛生芽诱导率。本专利技术提供了一种花生组培苗芽诱导培养基，包括混合溶液和凝固剂，每1L混合溶液包括4～4.8g的MSMedium培养基，25～35g蔗糖，0.8～1.2mL的15～25mmol/L的6-苄基腺嘌呤溶液，0.8～1.2mL的8～12mmol/L的噻苯隆溶液和水；所述凝固剂包括Phytagel植物凝胶。优选的，每1L混合溶液包括4.4g的MSMedium培养基，30g蔗糖，1mL的20mmol/L的6-苄基腺嘌呤溶液，1mL的10mmol/L的噻苯隆溶液和水。优选的，每1L混合溶液中添加凝固剂2～6g。优选的，每1L混合溶液中添加4g的Phytagel植物凝胶。本专利技术提供了上述芽诱导培养基的制备方法，包括如下步骤：(1)将MSMedium培养基、蔗糖、6-苄基腺嘌呤溶液和噻苯隆溶液混合，得到基础混合物；(2)将所述基础混合物与水混合，得到混合溶液；(3)将所述混合溶液与凝固剂混合，灭菌，得到芽诱导培养基。优选的，步骤(1)得到基础混合物后，用试剂调节所述基础混合物的pH值为5.6～6.0。优选的，所述试剂为1mol/L的NaOH溶液。优选的，步骤(3)所述灭菌采用高温高压灭菌；所述灭菌的压力为90～110kpa；所述灭菌的温度为118～125℃。优选的，步骤(3)所述灭菌后，向灭菌物料中添加头孢噻肟和/或潮霉素；当添加头孢噻肟和/或潮霉素时，所述头孢噻肟的添加量为：每1L灭菌物料添加400～600μL的400～600mol/L的头孢噻肟；所述潮霉素的添加量为：每1L灭菌物料添加0.5～1.5mL的40～60mg/mL的潮霉素。本专利技术还提供了上述的芽诱导培养基在花生组培苗种植中的应用。有益效果：为解决花生组织培养中外植体丛生芽诱导率低，诱导不稳定的问题，本专利技术通过调整培养基中的凝固剂、蔗糖、生长素等组分，提供了一种优化的花生组培苗芽诱导培养基。其中，6-苄基腺嘌呤发挥细胞分裂素的作用。噻苯隆起到植物生长调节作用，诱导外植体从愈伤组织形成到体细胞胚胎发生的一系列过程，发挥生长素和细胞分裂素的双重作用。本专利技术中，各组分配合使用，相互促进，具有良好的花生组培苗芽诱导作用，可以极大地促进花生组培外植体的丛生芽诱导率。利用本专利技术提供的芽诱导培养基，对上胚轴、子叶节和茎尖来源的经转基因处理的外植体丛生芽诱导率分别能达到70％、60％和80％以上；对上胚轴、子叶节和茎尖来源的不经转基因处理的外植体丛生芽诱导率分别能达到75％、60％和85％以上。具体实施方式本专利技术提供了一种花生组培苗芽诱导培养基，包括混合溶液和凝固剂，所述混合溶液包括MSMedium培养基、蔗糖、6-苄基腺嘌呤溶液、噻苯隆溶液和水；所述凝固剂包括Phytagel植物凝胶。在本专利技术中，每1L混合溶液中的MSMedium培养基含量为4～4.8g，优选为4.4g；每1L混合溶液中的蔗糖含量为25～35g，优选为30g；每1L混合溶液中的6-苄基腺嘌呤溶液含量为0.8～1.2mL，优选为1mL；所述6-苄基腺嘌呤溶液的浓度为15～25mmol/L，优选为20mmol/L；每1L混合溶液中的噻苯隆溶液含量为0.8～1.2mL，优选为1mL；所述噻苯隆溶液的浓度为8～12mmol/L，优选为10mmol/L；本专利技术对上述各组分的来源不作特别限定，本领域常规市售产品均可。在本专利技术中，所述凝固剂包括Phytagel植物凝胶。在本专利技术中，每1L混合溶液中优选添加凝固剂2～6g；更优选的，每1L混合溶液中添加Phytagel植物凝胶4g。本专利技术对上述Phytagel植物凝胶的来源不作特别限定，本领域常规市售产品均可。本专利技术提供的芽诱导培养基中，各组分配合使用，相互促进，具有良好的花生组培苗芽诱导作用，可以极大地促进花生组培外植体的丛生芽诱导率。本专利技术提供了上述芽诱导培养基的制备方法，包括如下步骤：(1)将MSMedium培养基、蔗糖、6-苄基腺嘌呤溶液和噻苯隆溶液混合，得到基础混合物；(2)将所述基础混合物与水混合，得到混合溶液；(3)将所述混合溶液与凝固剂混合，灭菌，得到芽诱导培养基。本专利技术先按上述芽诱导培养基的配比将MSMedium培养基、蔗糖、6-苄基腺嘌呤溶液和噻苯隆溶液混合，得到基础混合物。本专利技术对本步骤所述混合的具体方法不作特别限定，本领域常规工艺均可。得到基础混合物后，本专利技术优选用试剂调节所述基础混合物的pH值。在本专利技术中，所述调节pH值用试剂优选为NaOH溶液，所述NaOH溶液的浓度优选为1mol/L。所述调节pH值后的基础混合物的pH值优选为5.6～6.0，更优选为5.8。本专利技术将所述基础混合物与水混合，得到混合溶液。得到混合溶液后，本专利技术将所述混合溶液与凝固剂混合。本专利技术对本步骤所述混合的具体方法不作特别限定，本领域常规工艺均可。混合溶液与凝固剂混合后，本专利技术优选采用高温高压的方式灭菌。在本专利技术中，所述灭菌的压力优选为90～110kpa，更优选为100kpa；所述灭菌的温度优选为118～125℃，更优选为121℃。所述灭菌的时间为20～40min，优选为30min。灭菌后，得到灭菌物料；所述灭菌物料即为芽诱导培养基。本专利技术优选待灭菌物料冷却后，向灭菌物料中添加头孢噻肟和/或潮霉素，更优选添加头孢噻肟和潮霉素。在本专利技术中，所述冷却的时间优选为30～50min，更优选为40～45min。在本专利技术中，所述头孢噻肟的添加量优选为：每1L灭菌物料添加400～600μL的400～600mol/L的头孢噻肟，更优选为：每1L灭菌物料添加500μL的500mol/L的头孢噻肟；所述潮霉素的添加量优选为：每1L灭菌物料添加0.5～1.5mL的40～60mg/mL的潮霉素，更优选为：每1L灭菌物料添加1mL的50mg/mL的潮霉素。所述潮霉素用于转基因组培苗的筛选，非转基因组培苗中不添加。在本专利技术中，所述潮霉素用于筛选转基因花生阳性苗。本专利技术对所述头孢噻肟和潮霉素的来源不作特别限定，本领域本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种花生组培苗芽诱导培养基，包括混合溶液和凝固剂，其特征在于，每1L混合溶液包括4～4.8g的MSMedium培养基，25～35g蔗糖，0.8～1.2mL的15～25mmol/L的6-苄基腺嘌呤溶液，0.8～1.2mL的8～12mmol/L的噻苯隆溶液和水；所述凝固剂包括Phytagel植物凝胶。/n

【技术特征摘要】
1.一种花生组培苗芽诱导培养基，包括混合溶液和凝固剂，其特征在于，每1L混合溶液包括4～4.8g的MSMedium培养基，25～35g蔗糖，0.8～1.2mL的15～25mmol/L的6-苄基腺嘌呤溶液，0.8～1.2mL的8～12mmol/L的噻苯隆溶液和水；所述凝固剂包括Phytagel植物凝胶。


2.根据权利要求1所述的芽诱导培养基，其特征在于，每1L混合溶液包括4.4g的MSMedium培养基，30g蔗糖，1mL的20mmol/L的6-苄基腺嘌呤溶液，1mL的10mmol/L的噻苯隆溶液和水。


3.根据权利要求1或2所述的芽诱导培养基，其特征在于，每1L混合溶液中添加凝固剂2～6g。


4.根据权利要求3所述的芽诱导培养基，其特征在于，每1L混合溶液中添加4g的Phytagel植物凝胶。


5.权利要求1～4任意一项所述的芽诱导培养基的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将MSMedium培养基、蔗糖、6-苄基腺嘌呤溶液和噻苯隆溶液混合，得到基础混合物；
(2)将所述基础混合物与水混合，得...

【专利技术属性】
技术研发人员：迟晓元，陈明娜，潘丽娟，许静，王通，陈娜，王冕，杨珍，焦坤，谢宏峰，禹山林，
申请(专利权)人：山东省花生研究所，
类型：发明
国别省市：山东;37