一种帝萝花‘璀璨明珠’的茎段高效繁殖方法技术

本发明专利技术涉及一种帝萝花‘璀璨明珠’的茎段高效繁殖方法，属于植物组织培育领域。本发明专利技术示例的帝萝花‘璀璨明珠’茎段高效繁殖方法，以‘璀璨明珠’花序上长出的嫩枝为外植体，保障了组织培养方法生产的种苗，能够较好保持其母株所具有的优良性状，同时取得了较高的外植体消毒成功率和侧芽萌发率，配以专用的培养基，实现帝萝花‘璀璨明珠’茎段高效繁殖，为产业发展提供种源，摆脱种苗依靠进口的困境。

An efficient propagation method of stem segment of Dioscorea 'bright pearl'

【技术实现步骤摘要】
一种帝萝花‘璀璨明珠’的茎段高效繁殖方法
本专利技术属于植物组织培育领域，涉及帝萝花‘璀璨明珠’的茎段离体高效繁殖方法。
技术介绍
帝萝花‘璀璨明珠’是山龙眼科(Proteaceae)帝萝花属(Telopea)多年生名贵木本观赏植物,其花形独特，花色紫红，花期长，即可用作切花，亦可应用于园林美化。目前，‘璀璨明珠’种苗和切花产品主要依靠进口，价格居高不下，主要原因是繁殖效率低，种苗还没有实现自主生产。由于‘璀璨明珠’的种子种壳坚硬、具有休眠特性，且种子繁殖后代性状易发生分离；扦插生根率低，所需时间长，使得常规的种子和扦插繁殖方法难以满足产业对种源的需求。组织培养是植物高效生产种苗的一条途径，目前虽然已经有‘璀璨明珠’组织培养相关的研究，但由于常规茎段作为外植体，消毒困难，茎段发芽率低，造成其再生体系建立困难、效率低，故大多以种子为外植体进行组织培养，这样又不可避免会出现后代性状分离的情况。针对一个优良单株，种子繁殖难以保证该单株优良性状的稳定遗传，故有必要专利技术一种以营养器官为外植体的高效繁殖方法，以实现其组培种苗商业化应用。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是帝萝花‘璀璨明珠’组培种苗生产中以种子为外植体，使得生产的种苗难以保证母本优良性状的稳定性的问题，目的是提供一种帝萝花‘璀璨明珠’的离体茎段高效繁殖方法及。为解决以上技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一种帝萝花‘璀璨明珠’的茎段高效繁殖方法，具体包括以下步骤：S1、外植体的选取和消毒，每年春季3～5月间，切取‘璀璨明珠’正在开放的花序上长出的嫩枝，去除叶片、保留叶柄，清洗表面污垢后，剪成长度约为3cm的茎段，每个茎段具2～3个叶柄，流水冲洗并在超净工作台消毒，之后无菌水清洗，随后晾干表面水分；S2、侧芽诱导培养，茎段消毒完成并充分晾干表面水分后，接种至侧芽诱导培养基MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L上；S3、增殖培养，待侧芽长至2～4cm长，将其切下接种在增殖培养基上，进行增殖培养；S4、生根培养，增殖培养40～50天后，将株高3厘米左右的增殖苗分棵切开，接种到生根培养基。进一步的，步骤S1中清洗表面污垢具体为用洗衣粉水清洗表面污垢。进一步的，步骤S1中流水冲洗需要20min。进一步的，步骤S1中消毒用0.1％的氯化汞溶液浸泡12min，再用无菌水清洗5遍。进一步的，步骤S3中所述增殖培养基为MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.05mg/L。进一步的，步骤S4中所述生根培养基为MS+IBA0.75mg/L+NAA1mg/L。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术示例的帝萝花‘璀璨明珠’茎段高效繁殖方法，以‘璀璨明珠’花序上长出的嫩枝为外植体，保障了组织培养方法生产的种苗，能够较好保持其母株所具有的优良性状，同时取得了较高的外植体消毒成功率和侧芽萌发率，配以专用的培养基，实现帝萝花‘璀璨明珠’茎段高效繁殖，为产业发展提供种源，摆脱种苗依靠进口的困境。具体实施方式以下结合具体实施例对本专利技术的技术方案进行详细阐述：实施例1一种帝萝花‘璀璨明珠’茎段高效繁殖方法，包括如下步骤：S1、外植体的选取和消毒每年春季3～5月间，切取‘璀璨明珠’正在开放的花序上长出的嫩枝，去除叶片、保留叶柄，用洗衣粉水清洗表面污垢后，剪成长度约为3cm的茎段，每个茎段具2～3个叶柄，流水冲洗20min，在超净工作台消毒。消毒用0.1％的升汞溶液浸泡12min，之后无菌水冲洗5遍。已消毒茎段在超净工作台上晾干表面水分后，进行侧芽诱导培养。S2、侧芽诱导培养茎段消毒完成并充分晾干表面水分后，接种至侧芽诱导培养基MS+6-BA(6苄基腺嘌呤)1mg/L+NAA(萘乙酸)0.1mg/L上，外植体污染率为21.5％，侧芽萌发率为73％，见表1。S3、增殖培养待侧芽长至2～4cm长，将其切下接种在增殖培养基上，进行增殖培养；其中，增殖培养基包含MS+6-BA(6苄基腺嘌呤)0.4mg/L+NAA(萘乙酸)0.05mg/L，其增殖率达663％，平均株高4.32cm，且增殖苗叶色及枝叶生长正常。S4、生根培养增殖培养40～50天后，将株高3厘米左右的增殖苗分棵切开，接种到生根培养基。其中，生根培养基为MS+IBA(引哚丁酸)0.75mg/L+NAA(萘乙酸)1mg/L，生根率70％。实施例2外植体消毒验证试验通过采用S1中的外植体消毒方法及S2的侧芽诱导培养方法，试验不同外植体消毒时间，通过实施例1的外植体消毒方法，及对照组1-3，对照组设置时与实施例1的消毒液浓度及培养基完全相同，只是消毒时间分别设置为10min、14min、16min，验证本专利技术所采用的外植体消毒方法效果最好。不同外植体消毒方法的效果如表1所示：表1实施例3基本培养基验证试验通过采用S3中的增殖培养方法，通过选用不同的基本培养基，通过实施例1的基本培养基，及对照组1-2验证本专利技术所采用的基本培养基为最优培养基，其中实施例1的培养基为MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.05mg/L，对照组1培养基为1/2MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.05mg/L，对照组2的培养基为WPM+6-BA0.4mg/L+NAA0.05mg/L。不同基本培养基中‘璀璨明珠’的长势效果如表2所示：表2其中，SPAD值是一个反映植株叶绿素含量的指标，SPAD值与单位叶面积叶绿素含量显著正相关，叶绿素的相对含量可以反映植株叶片的生理状况，SPAD值越大表明植株生理状况越好。实施例4增殖培养基验证试验通过采用S3中的增殖培养方法，通过选用不同浓度植物激素的培养基，通过实施例1的增殖养基，及对照组1-3验证本专利技术所采用的增殖培养基为最优培养基，其中实施1所用培养基为MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.05mg/L，对照组1所用培养基为MS+6-BA0.8mg/L+NAA0.05mg/L，对照组2所用培养基为MS+6-BA1.2mg/L+NAA0.05mg/L，对照组3所用培养基为MS+6-BA1.6mg/L+NAA0.05mg/L。不同培养基中‘璀璨明珠’的增殖率和株高如表3所示：表3实施例5生根培养基验证试验通过采用S4中的生根培养方法，选用不同浓度植物激素的培养基，通过实施例1的生根养基，及对照组1-4验证本专利技术所采用的生根培养基为最优培养基，其中，实施例1的生根培养基为MS+IBA0.75mg/L+NAA1mg/L，对照组1的生根培养基为MS+IBA0.4mg/L+NAA0.5mg/L，对照组2的生根培养基为MS+IBA0.8mg/L，对照组3的生根培养基为MS+IBA0.2mg/L+NAA本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种帝萝花‘璀璨明珠’的茎段高效繁殖方法，其特征在于，具体包括以下步骤：/nS1、外植体的选取和消毒，每年春季3～5月间，切取‘璀璨明珠’正在开放的花序上长出的嫩枝，去除叶片、保留叶柄，清洗表面污垢后，剪成长度约为3cm的茎段，每个茎段具2～3个叶柄，流水冲洗并在超净工作台消毒，之后无菌水再次冲洗，随后晾干表面水分；/nS2、侧芽诱导培养，茎段消毒完成并充分晾干表面水分后，接种至侧芽诱导培养基MS+6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L上；/nS3、增殖培养，待侧芽长至2～4cm长，将其切下接种在增殖培养基上，进行增殖培养；/nS4、生根培养，增殖培养40～50天后，将株高3厘米左右的增殖苗分棵切开，接种到生根培养基。/n

【技术特征摘要】
1.一种帝萝花‘璀璨明珠’的茎段高效繁殖方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
S1、外植体的选取和消毒，每年春季3～5月间，切取‘璀璨明珠’正在开放的花序上长出的嫩枝，去除叶片、保留叶柄，清洗表面污垢后，剪成长度约为3cm的茎段，每个茎段具2～3个叶柄，流水冲洗并在超净工作台消毒，之后无菌水再次冲洗，随后晾干表面水分；
S2、侧芽诱导培养，茎段消毒完成并充分晾干表面水分后，接种至侧芽诱导培养基MS+6-BA1mg/L+NAA0.1mg/L上；
S3、增殖培养，待侧芽长至2～4cm长，将其切下接种在增殖培养基上，进行增殖培养；
S4、生根培养，增殖培养40～50天后，将株高3厘米左右的增殖苗分棵切开，接种到生根培养...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭绿春，李世峰，瞿素萍，宋杰，解玮佳，蔡艳飞，张露，
申请(专利权)人：云南省农业科学院花卉研究所，
类型：发明
国别省市：云南;53