【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】重组欧氏杆菌天冬酰胺酶的生产方法相关申请的交叉引用本申请要求2017年10月27日提交的美国临时申请号62/578,305的权益，其通过引用并入本文。序列表本申请包含序列表，其已经以ASCII格式电子提交，并且通过引用整体并入本文。所述ASCII副本创建于2018年10月16日，文件名为38194-749_601_SL.txt，大小为71,228字节。
技术介绍
来自细菌菊欧氏杆菌的L-天冬酰胺酶II型(也称为菊天冬酰胺酶(crisantaspase))被指出与其他化疗剂联合用于治疗急性淋巴细胞白血病(ALL)的患者，其已发展出针对源自大肠杆菌的天然或聚乙二醇化的天冬酰胺酶的超敏反应或沉默失活。它也可用于治疗其他肿瘤性疾病。菊天冬酰胺酶是通过发酵菊欧氏杆菌以产生细胞糊状物而制备，细胞糊状物经过处理以产生酶制剂，该酶制剂通过一系列色谱法和其他方法进一步纯化以产生药物。当在欧氏杆菌中表达时，菊天冬酰胺酶前蛋白利用其在N-末端存在的天然分泌信号序列分泌到细胞的周质空间。一旦定位在周质空间内，信号序列被切割掉以产生能够自发地融合成...
【技术保护点】
1.一种用于生产重组II型天冬酰胺酶的方法，所述方法包括在培养基中培养假单胞菌目宿主细胞并从包含编码所述重组II型天冬酰胺酶的核酸的表达构建体在所述假单胞菌目宿主细胞的细胞质中表达所述重组II型天冬酰胺酶，其中所述重组天冬酰胺酶在所述细胞质中以约20％TCP至约40％TCP可溶II型天冬酰胺酶的产率产生。/n
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20171027 US 62/578,3051.一种用于生产重组II型天冬酰胺酶的方法，所述方法包括在培养基中培养假单胞菌目宿主细胞并从包含编码所述重组II型天冬酰胺酶的核酸的表达构建体在所述假单胞菌目宿主细胞的细胞质中表达所述重组II型天冬酰胺酶，其中所述重组天冬酰胺酶在所述细胞质中以约20％TCP至约40％TCP可溶II型天冬酰胺酶的产率产生。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述重组II型天冬酰胺酶在所述细胞质中以约10g/L至约25g/L的产率产生。
3.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括使用活性试验测量所产生的一定量的所述可溶重组II型天冬酰胺酶的活性。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述重组II型天冬酰胺酶是菊欧氏杆菌L-天冬酰胺酶II型(菊天冬酰胺酶)。
5.根据权利要求1所述的方法，其中编码所述重组II型天冬酰胺酶的所述核酸包含与SEQIDNO:1至少85％同源的序列。
6.根据权利要求1所述的方法，其中所述重组II型天冬酰胺酶具有与SEQIDNO:2至少85％同源的氨基酸序列。
7.根据权利要求1所述的方法，其中所述假单胞菌目宿主细胞是荧光假单胞菌细胞。
8.根据权利要求1所述的方法，其中所述宿主细胞缺乏一种或多种天然天冬酰胺酶的表达。
9.根据权利要求8所述的方法，其中所述一种或多种缺乏表达的天然天冬酰胺酶选自：I型天冬酰胺酶；II型天冬酰胺酶；及其组合。
10.根据权利要求1所述的方法，其中所述宿主细胞：缺乏一种或多种蛋白酶的表达；过表达一种或多种折叠调节体；或两者。
11.一种用于生产重组II型天冬酰胺酶的方法，所述方法包括：
在培养基中培养假单胞菌目宿主细胞并从包含编码所述重组II型天冬酰胺酶的核酸的表达构建体在所述宿主细胞的周质中表达所述重组II型天冬酰胺酶，其中所述重组II型天冬酰胺酶在所述周质中以约20％至约40％TCP可溶天冬酰胺酶的产率产生。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述重组II型天冬酰胺酶在所述周质中以约5g/L至约30g/L的产率产生。...
【专利技术属性】
技术研发人员：R·J·科尔曼，T·布鲁克，
申请(专利权)人：菲尼克斯公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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