用于检测核酸分子的方法和试剂盒技术

一种检测一种或多种多核苷酸扩增产物的方法，在一个实施方案中，所述方法包含以下步骤：a)提供一个或多个寡核苷酸引物组，每个组包含：i)正向引物，其包含荧光盒特异性部分和3"下游目标特异性部分；和ii)一种或多种目标特异性引物；b)提供一个或多个荧光淬灭对，每对的特征在于：i)第一盒寡核苷酸，其用荧光部分标记并且具有能够与给定寡核苷酸引物组中的正向引物的荧光盒特异性部分的补体杂交的序列；和ii)用淬灭剂部分标记的第二盒寡核苷酸；c)在链置换DNA聚合酶存在下引发等温多核苷酸扩增反应，由此产生相关正向引物的至少一部分的互补序列，使得相关第二盒寡核苷酸不太可能与相关第一盒寡核苷酸杂交，从而产生信号；和d)检测所述信号。

Methods and kits for the detection of nucleic acid molecules

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于检测核酸分子的方法和试剂盒
本专利技术涉及用于检测核酸分子，确切地说，在等温多核苷酸扩增反应中形成的多核苷酸扩增产物的方法和试剂盒。
技术介绍
序列特异性等温核酸扩增技术提供了优于传统聚合酶链反应(PCR)的优势，因为它们无需PCR中使用的热循环设备即可提供快速并且灵敏的分子检测。由于它们适合与低功率并且便携式仪器一起使用，因此它们在现场或现场护理分子诊断中可能会发现特定效用。与用热量使双链DNA(dsDNA)变性的PCR相比，等温扩增方法通常使用酶活性来分离目标多核苷酸的链，并且允许序列特异性寡核苷酸引物的杂交。扩增反应由多轮引物杂交、引物延伸和链分离驱动，并且在单一温度下进行。尽管许多扩增系统目前在使用中，但并非全部都足够简单以在短时间范围中提供特异性检测。那些能够快速扩增的酶通常使用链置换聚合酶，所述酶具有链分离和引物延伸的双重功能。此类方法包括环介导等温扩增(LAMP)(Notomi等人,2000,<<核酸研究28(12):E63,DNA的环介导等温扩增(NucleicAcidsRes.28(12):E63,Lo本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测一种或多种多核苷酸扩增产物的方法，所述方法包含以下步骤：/na)提供一个或多个寡核苷酸引物组，每个组包含一个或多个寡核苷酸引物集合，每个集合的特征在于：/ni)第一寡核苷酸引物(正向引物)，其包含荧光盒特异性部分和3'下游目标特异性部分；和/nii)一种或多种目标特异性寡核苷酸引物；/n其中具体集合中的寡核苷酸引物各自适合于与目标多核苷酸的链杂交，以允许在等温多核苷酸扩增反应中形成所述目标多核苷酸的扩增产物；/n并且其中相同组中的每个集合中的所述第一寡核苷酸引物含有荧光盒特异性部分，其能够与所述相同组中的任何集合中的所述第一寡核苷酸引物的荧光盒特异性部分的补体杂交；/nb)提供一个...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170818 GB 1713251.51.一种检测一种或多种多核苷酸扩增产物的方法，所述方法包含以下步骤：
a)提供一个或多个寡核苷酸引物组，每个组包含一个或多个寡核苷酸引物集合，每个集合的特征在于：
i)第一寡核苷酸引物(正向引物)，其包含荧光盒特异性部分和3'下游目标特异性部分；和
ii)一种或多种目标特异性寡核苷酸引物；
其中具体集合中的寡核苷酸引物各自适合于与目标多核苷酸的链杂交，以允许在等温多核苷酸扩增反应中形成所述目标多核苷酸的扩增产物；
并且其中相同组中的每个集合中的所述第一寡核苷酸引物含有荧光盒特异性部分，其能够与所述相同组中的任何集合中的所述第一寡核苷酸引物的荧光盒特异性部分的补体杂交；
b)提供一个或多个盒寡核苷酸集合，每个集合的特征在于：
i)第一盒寡核苷酸，其用荧光部分(供体部分)标记并且具有能够与给定寡核苷酸引物组中的任何集合中的所述第一寡核苷酸引物的荧光盒特异性部分的补体杂交的序列；和
ii)第二盒寡核苷酸，其用受体部分(例如淬灭剂部分)标记；
其中每个集合的盒寡核苷酸彼此杂交以形成荧光淬灭对；
c)在链置换DNA聚合酶存在下引发等温多核苷酸扩增反应，由此产生(如果存在目标多核苷酸)相关第一寡核苷酸引物的至少一部分的互补序列，使得相关第二(受体，例如淬灭剂，标记的)盒寡核苷酸不太可能与相关第一(荧光标记的)盒寡核苷酸杂交，由此产生信号；和
d)检测所产生的所述信号。


2.根据权利要求1所述的方法，其中相对于所述荧光盒特异性部分，所述第一寡核苷酸引物(正向引物)具有5'上游目标特异性或自退火部分。


3.根据权利要求2所述的方法，其中相对于所述荧光盒特异性部分，所述第一寡核苷酸引物(正向引物)具有5'上游目标特异性部分，如其中所述等温多核苷酸扩增反应是环介导的等温扩增(LAMP)、交叉引发扩增(CPA)或智能扩增(SMAP)。


4.根据权利要求2所述的方法，其中相对于所述荧光盒特异性部分，所述第一寡核苷酸引物(正向引物)具有5'上游自退火部分，如其中所述等温多核苷酸扩增反应是智能扩增(SMAP)。


5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中每个集合中的所述第一和第二盒寡核苷酸不包含目标特异性部分。


6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中一个或多个所述荧光淬灭对的Tm(TmA)在扩增反应的Ta的(±)20℃内，如(±)10℃内。


7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中一个或多个所述荧光淬灭对的Tm(TmA)高于所述等温多核苷酸扩增反应的Ta，如比所述等温多核苷酸扩增反应的Ta高最多15℃、最多10℃或1到10℃。


8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中每个集合中的第一或第二寡核苷酸盒中的一个具有等于或低于所述等温多核苷酸扩增反应的Ta的Tm。


9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在所述反应的终点处检测所述信号。

【专利技术属性】
技术研发人员：R·L·霍华德，
申请(专利权)人：LGC基因组学有限公司，
类型：发明
国别省市：英国;GB