一种检测重组人白介素-12蛋白电荷变异体的方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种检测重组人白介素‑12蛋白电荷变异体的方法及应用。该方法通过pH‑IEC离子交换色谱法对待测蛋白进行分析获得色谱图，基于所述色谱图，确定待测重组人白介素‑12蛋白电荷变异体的含量；pH‑IEC离子交换色谱法所采用的流动相包括枸橼酸和磷酸钠盐的混合溶液；通过不同混合比例构成流动相A和流动相B。本发明专利技术pH‑IEC离子交换色谱法能够适用于糖基化较高且结构复杂的重组人白介素‑12蛋白的电荷变异体分析，解决了因试剂或前处理导致样品变性和用传统的高盐洗脱‑离子交换色谱法无法实现电荷异构体的分离等问题，可用于该类药物的质量控制领域，确保药物生产的批间一致性，监控临床用药的安全性与有效性。

A method for detecting charge variants of recombinant human interleukin-12 protein and its application

【技术实现步骤摘要】
一种检测重组人白介素-12蛋白电荷变异体的方法及应用
本专利技术属于重组蛋白检测
，涉及一种检测重组人白介素-12蛋白电荷变异体的方法及应用。
技术介绍
目前，蛋白类药物大多是采用哺乳动物细胞表达系统进行生产，在产品的生产、储存、运输等过程中，往往会发生产品的聚集、降解及各种翻译后修饰，从而导致产品的变体产生。等电点改变和空间电荷分布差异所导致的异质性为电荷异质性，主要包括C-末端赖氨酸截除、N-谷氨酰胺环化、N-糖基化、氧化、聚体、天冬氨酸脱氨基和异构化、二硫键错配等。基于对蛋白分子中已知位点的可变性计算，可能存在多达2.58亿种可能的变体，因此产生了一系列潜在的产品质量属性。ICH出台的指导原则中Q6B部分根据变体对产品安全性、有效性的影响程度，将其分为产品相关物质及产品相关杂质，需要关于变体影响和安全性的关键质量属性(CQA)评估。分离这些变异对于评估生物物理和生物化学特性，如体外(效力、结合)和体内(毒性、药代动力学、免疫原性)活性至关重要。IEF依据重组蛋白不同电荷变异体的pI特征将其分离，只能定性判定，而且需要本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测重组人白介素-12蛋白电荷变异体的方法，其包括如下步骤：/n通过pH-IEC离子交换色谱法对待测蛋白进行分析获得色谱图，基于所述色谱图，确定所述待测重组人白介素-12蛋白电荷变异体的含量；/n所述pH-IEC离子交换色谱法所采用的流动相包括枸橼酸和磷酸钠盐的混合溶液；通过不同混合比例构成流动相A和流动相B；/n其中，所述流动相A的pH值为5.5～10.0，优选为8.0；所述流动相B的pH值为2.2～4.5，优选为4.0。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测重组人白介素-12蛋白电荷变异体的方法，其包括如下步骤：
通过pH-IEC离子交换色谱法对待测蛋白进行分析获得色谱图，基于所述色谱图，确定所述待测重组人白介素-12蛋白电荷变异体的含量；
所述pH-IEC离子交换色谱法所采用的流动相包括枸橼酸和磷酸钠盐的混合溶液；通过不同混合比例构成流动相A和流动相B；
其中，所述流动相A的pH值为5.5～10.0，优选为8.0；所述流动相B的pH值为2.2～4.5，优选为4.0。


2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述枸橼酸的浓度为5～50mmol/L，优选为20mmol/L。


3.根据权利要求1所述的方法，其中，所述磷酸钠盐的浓度为5～50mmol/L，优选为20mmol/L。


4.根据权利要求1所述的方法，其中，所述pH-IEC离子交换色谱法采用的色谱柱包括阴离子交换色谱柱；优选地，所述色谱柱包括强阴离子交换色谱柱SAX。


5.根据权利要求1所述的方法，其中，所述pH-IEC离子交换色谱法的洗脱时间为25～70min，优选为48min。


6.根据权利要求1所述的方法，其中，所述pH-IEC离子交换色谱法的上样量为10-50μl，流速0.5-1.5ml/min，柱温20-60℃，检测波长280nm。


7.根据权利要求1所述的方法，其中，该方法所采用的洗脱程序如下：


...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏文，王瑞玲，刘忠凯，王彦娜，
申请(专利权)人：康立泰药业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37