一种甲型和乙型流感病毒核酸复合检测试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种甲型和乙型流感病毒核酸复合检测试剂盒，其中包含了用于检测包括甲型H1N1(2009)、甲型H3N2(2014)、乙型Victoria lineage(2008)和乙型Yamagata lineage的引物组和探针的序列信息。本发明专利技术的甲型和乙型流感病毒核酸复合检测试剂盒可用于四种流感病毒核酸的复合检测，可以一次性完成四种高致病性流感病毒的筛查，检测方便，快捷，为高致病性流感的有效防控提供更为有效的手段和方法。

A compound detection kit for influenza A and B virus nucleic acid

【技术实现步骤摘要】
一种甲型和乙型流感病毒核酸复合检测试剂盒
本专利技术涉及流感病毒荧光定性PCR检测领域，涉及一种甲型H1N1(2009)、甲型H3N2(2014)、乙型Victorialineage(2008)、乙型Yamagatalineage流感病毒核酸复合检测试剂盒。
技术介绍
流感病毒是一种造成人类及动物患流行性感冒的RNA病毒，属于正黏液病毒科，其病毒基因组由8条负链RNA节段组成，编码10个蛋白。根据核蛋白(NP)和基质蛋白(M)不同，分为甲型、乙型、丙型。甲型流感病毒是常见的流感病毒，最容易发生变异；乙型流感病毒的抗原变异较小，通常只引起流感的局部爆发。丙型流感病毒并不会引起严重的疾病，常散发出现。甲型流感病毒有许多亚型，其亚型被人们称为“禽流感(AIV)”，禽流感是由禽流感病毒引起的一种急性传染病，病毒基因变异后能够感染人类，甲型流感病毒感染后的症状主要表现为高热、咳嗽、流涕、肌痛等，多数伴有严重的肺炎，严重者心、肾等多种脏器衰竭导致死亡。禽流感很容易发生变异。诱发AIV发生变异的主要机理是抗原性变异，即抗原漂移(AntigenicDrift)和抗原转变(AntigenicShift)。抗原漂移主要是由HA或NA基因发生点突变引起的，其中HA基因的变异率最高，每个核苷酸在每个复制周期中的变异率可高达2x104。自2002年SARS爆发以来，2009年爆发了甲型H1N1,2013爆发了H7N9。2016年3月22日广东发布的最新一轮的流感暴发预警中流感病毒株就有甲型流感H1N1。乙型流感病毒感染的典型症状是起病急骤，畏寒、发热，体温在数小时至24小时内升达高峰，39-40℃甚至更高。伴头痛，全身酸痛，乏力，食欲减退。乙型流感病毒无亚型之分，其基因的变异只有抗原性漂移，而没有由于基因重组所造成的抗原性转变。根据抗原性和基因特征的不同，乙型流感病毒分为Yamagata和Victoria两大谱系，其基因进化速度比人甲型流感病毒要慢2～3倍。乙型流感发病率高，但死亡率低，感染率最高的为青少年，高危人群为年迈体弱或带有慢性疾病患者。流感病毒的实验检测技术也随之成为人们研究的热点。荧光PCR法检测法是目前流感病毒检测试剂盒应用的主流方法，荧光PCR法运用特异性的荧光水解探针对相关扩增物进行实时检测，除了有可以进行高通量和定量检测的优点之外，还因为扩增产物乃封闭检测，不需要处理而极大地减少了交叉拷染的机会。由于该技术灵敏性高，准确度好，检测成本低又不需要最贵的检测设备，特别适合基层检测单位使用。美国疾控中心2015年以来累计流行病学调查资料显示，发病前四位的流感病毒分别是甲型H1N1(2009)、甲型H3N2(2014)、乙型BYamagatalineage和乙型BVictorialineage(2008)。目前市场上已有相应的单一病毒检测试剂盒，但没有4种病毒的联合检测试剂盒。因此，开发上述4种病毒的联合检测试剂盒能够提供一种方便检测、及时诊断及采取相应有效防控措施的手段和方法。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是解决至少上述缺陷，并提供至少后面将说明的优点。本专利技术的另一个目的是提供一种能够同时联合检测甲型H1N1(2009)、甲型H3N2(2014)、乙型BYamagatalineage和乙型BVictorialineage(2008)的甲型和乙型流感病毒核酸复合检测试剂盒。为了实现本专利技术的这些目的和其它优点，本专利技术提供一种甲型和乙型流感病毒核酸复合检测试剂盒，所述的流感病毒包括甲型H1N1(2009)、甲型H3N2(2014)、乙型Victorialineage(2008)和乙型Yamagatalineage，其特征在于，其中的引物组和探针的序列信息如下：H3N2上游引物的序列H3N2-F-1:GTCCCCAGCAGAATAAGCAT，H3N2下游引物的序列H3N2-R-1:ATTATTGAGCTTTTCCCACTTCGT，H3N2探针序列H3N2-PROBE-1:FAM-CCCCGAGGAGCAATTAGATTCCC-BHQ1；H3N2上游引物的序列H3N2-F-2:AGGACAAGCAGCAGATCTCA，H3N2下游引物的序列H3N2-R-2:CGTTTGTTTTCCCGATCAACC，H3N2探针序列H3N2-PROBE-2:HEX-AAGCACTCAAGCAGCAATCAACCA-BHQ1；H3N2上游引物的序列H3N2-F-3:TACCAGAGAAACAAACTAGAGGCA，H3N2下游引物的序列H3N2-R-3:GCTGCTTGTCCTGTTCCC，H3N2探针序列H3N2-PROBE-3:VIC-CCGTACCAACCGTCTACCATTCCC-BHQ1；H3N2上游引物的序列H3N2-F-4:ACAAACCGTAATCCCGAGT，H3N2下游引物的序列H3N2-R-4:CGAGGAGCAATTAGATTCCCT，H3N2探针序列H3N2-PROBE-4:JOE-ATGTCCCCAGCAGAATAAGCATC-BHQ1；H1N1上游引物的序列F-H1N1:GAAACCCAGGAAACGCTGAGA，H1N1下游引物的序列R-H1N1:ATTTATGTGCAACTGATCCCCTC，H1N1探针序列H1N1-PROBE:FAM-ACCTCATTTTCCTGGCACGGTCA-BHQ1；Victoria上游引物的序列F-VIC-1:TCATCTGCCAACGGAGTGA，Victoria下游引物的序列R-VIC-1:TTGCACCATGTAATCAACAAC，Victoria探针序列PROBE-VIC-1:HEX-CAGAAGACGGAGGACTACCACA-BHQ1；Victoria上游引物的序列F-VIC-2:CTCTGACAACGAGACCCA，Victoria下游引物的序列R-VIC-2:CCACCAATCTGTGAAACGTA，Victoria探针序列PROBE-VIC-2:VIC-ATCTGCCAACGGAGTGACC-BHQ1；Victoria上游引物的序列F-VIC-3:GGAGAAGACCAAATTACCGTT，Victoria下游引物的序列R-VIC-3:AATGTGTGGTCACTCCGTTG，Victoria探针序列PROBE-VIC-3:JOE-TCAAAGCCCCAGAAGTTCACCT-BHQ1；Yamagata上游引物的序列F-YAM:CCAAACACAAGTGCAACCAGA，Yamagata下游引物的序列R-YAM:AGATGCAGCAGTAATATTCAGT，Yamagata探针序列PROBE-YAM-1:FAM-ATTCTCCTGCATCAAAGGTACCAG-BHQ1。上述技术方案中，采用了流感病毒甲型H1N1(2009)、甲型H3N2(2014)、乙型Victorialineage(2008)和乙型Yamagatalineage四种病毒核酸复合检测，可以一次性本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甲型和乙型流感病毒核酸复合检测试剂盒，所述的流感病毒包括甲型H1N1、甲型H3N2、乙型Victoria lineage和乙型Yamagata lineage，其特征在于，其中的引物组和探针的序列信息如下：/nH3N2上游引物的序列H3N2-F-1:GTCCCCAGCAGAATAAGCAT；/nH3N2下游引物的序列H3N2-R-1:ATTATTGAGCTTTTCCCACTTCGT；H3N2探针序列H3N2-PROBE-1:/nFAM-CCCCGAGGAGCAATTAGATTCCC-BHQ1；/nH3N2上游引物的序列H3N2-F-2:AGGACAAGCAGCAGATCTCA；/nH3N2下游引物的序列H3N2-R-2:CGTTTGTTTTCCCGATCAACC；/nH3N2探针序列H3N2-PROBE-2:/nHEX-AAGCACTCAAGCAGCAATCAACCA-BHQ1；/nH3N2上游引物的序列H3N2-F-3:TACCAGAGAAACAAACTAGAGGCA；H3N2下游引物的序列H3N2-R-3:GCTGCTTGTCCTGTTCCC；/nH3N2探针序列H3N2-PROBE-3:/nVIC-CCGTACCAACCGTCTACCATTCCC-BHQ1；/nH3N2上游引物的序列H3N2-F-4:ACAAACCGTAATCCCGAGT；/nH3N2下游引物的序列H3N2-R-4:CGAGGAGCAATTAGATTCCCT；/nH3N2探针序列H3N2-PROBE-4:/nJOE-ATGTCCCCAGCAGAATAAGCATC-BHQ1；/nH1N1上游引物的序列F-H1N1:GAAACCCAGGAAACGCTGAGA；/nH1N1下游引物的序列R-H1N1:ATTTATGTGCAACTGATCCCCTC；/nH1N1探针序列H1N1-PROBE:/nFAM-ACCTCATTTTCCTGGCACGGTCA-BHQ1；/nVictoria上游引物的序列F-VIC-1:TCATCTGCCAACGGAGTGA；/nVictoria下游引物的序列R-VIC-1:TTGCACCATGTAATCAACAAC；/nVictoria探针序列PROBE-VIC-1:/nHEX-CAGAAGACGGAGGACTACCACA-BHQ1；/nVictoria上游引物的序列F-VIC-2:CTCTGACAACGAGACCCA；/nVictoria下游引物的序列R-VIC-2:CCACCAATCTGTGAAACGTA；/nVictoria探针序列PROBE-VIC-2:/nVIC-ATCTGCCAACGGAGTGACC-BHQ1；/nVictoria上游引物的序列F-VIC-3:GGAGAAGACCAAATTACCGTT；/nVictoria下游引物的序列R-VIC-3:AATGTGTGGTCACTCCGTTG；/nVictoria探针序列PROBE-VIC-3:/nJOE-TCAAAGCCCCAGAAGTTCACCT-BHQ1；/nYamagata上游引物的序列F-YAM:CCAAACACAAGTGCAACCAGA；/nYamagata下游引物的序列R-YAM:AGATGCAGCAGTAATATTCAGT；/nYamagata探针序列PROBE-YAM-1:/nFAM-ATTCTCCTGCATCAAAGGTACCAG-BHQ1。/n...

【技术特征摘要】
20200121 CN 20201007127981.一种甲型和乙型流感病毒核酸复合检测试剂盒，所述的流感病毒包括甲型H1N1、甲型H3N2、乙型Victorialineage和乙型Yamagatalineage，其特征在于，其中的引物组和探针的序列信息如下：
H3N2上游引物的序列H3N2-F-1:GTCCCCAGCAGAATAAGCAT；
H3N2下游引物的序列H3N2-R-1:ATTATTGAGCTTTTCCCACTTCGT；H3N2探针序列H3N2-PROBE-1:
FAM-CCCCGAGGAGCAATTAGATTCCC-BHQ1；
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H3N2探针序列H3N2-PROBE-2:
HEX-AAGCACTCAAGCAGCAATCAACCA-BHQ1；
H3N2上游引物的序列H3N2-F-3:TACCAGAGAAACAAACTAGAGGCA；H3N2下游引物的序列H3N2-R-3:GCTGCTTGTCCTGTTCCC；
H3N2探针序列H3N2-PROBE-3:
VIC-CCGTACCAACCGTCTACCATTCCC-BHQ1；
H3N2上游引物的序列H3N2-F-4:ACAAACCGTAATCCCGAGT；
H3N2下游引物的序列H3N2-R-4:CGAGGAGCAATTAGATTCCCT；
H3N2探针序列H3N2-PROBE-4:
JOE-ATGTCCCCAGCAGAATAAGCATC-BHQ1；
H1N1上游引物的序列F-H1N1:GAAACCCAGGAAACGCTGAGA；
H1N1下游引物的序列R-H1N1:ATTTATGTGCAACTGATCCCCTC；
H1N1探针序列H1N1-PROBE:
FAM-ACCTCATTTTCCTGGCACGGTCA-BHQ1；
Victoria上游引物的序列F-VIC-1:TCATCTGCCAACGGAGTGA；
Victoria下游引物的序列R-VIC-1:TTGCACCATGTAATCAACAAC；
Victoria探针序列PROBE-VIC-1:
HEX-CAGAAGACGGAGGACTACCACA-BH...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘凤鸣，汪大为，师凤华，谭木秀，
申请(专利权)人：广西壮族自治区药用植物园，
类型：发明
国别省市：广西;45