特异性结合脂阿拉伯甘露聚糖的单克隆抗体及其在分枝杆菌检测中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种特异性结合脂阿拉伯甘露聚糖的单克隆抗体及其在分枝杆菌检测中的应用，涉及抗体技术领域。本发明专利技术公开的抗体，其轻链和重链的互补决定区具有如下(1)‑(3)任一项所示的序列。本发明专利技术公开的抗体具有高敏感性、高特异性和高亲和力的特点，可以用于检测LAM和分枝杆菌，有助于提高检测结果的准确性。

Monoclonal antibody of specific binding lipoarabinoglycan and its application in detection of Mycobacterium

【技术实现步骤摘要】
特异性结合脂阿拉伯甘露聚糖的单克隆抗体及其在分枝杆菌检测中的应用
本专利技术涉及抗体
，具体而言，涉及一种特异性结合脂阿拉伯甘露聚糖的单克隆抗体及其在分枝杆菌检测中的应用。
技术介绍
分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)是其细胞壁上的一种重要糖脂组分，分子量为17.5kDa。在结核分枝杆菌(Mtb)感染期间，可溶性的脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)可以通过细菌代谢或细菌降解释放出来，并在体液(如痰、血和尿)中被检测到，但局限于活动性结核病患者中。依据该特征，LAM已被用作诊断活动性结核病的靶点。酶联免疫吸附实验和LAM侧流尿检测已被开发用于测定LAM。低成本、快速的LAM侧流尿检测试剂盒(LF-LAM；DetermineTB-LAM；Alere,USA)已经被WHO批准用于CD4阳性T淋巴细胞计数低于200cells/μl的艾滋病患者中结核病筛查，该试剂盒应用兔抗LAM多克隆抗体检测该抗原。尽管该方法在结核分枝杆菌LAM抗原检测方面具有很高特异性，具有低成本和快速便捷的突出特点。但该方法也存在不足之处，其检测敏感性局限于1ng/ml，此法并未被推介用于非艾滋病的结核病筛查，而这部分人群占据了结核病人群的绝大多数(85％)，限制了其在全球范围内的应用。目前存在三种假说解释无HIV感染的结核病患者中LAM检测的低敏感性：假说一认为HIV感染期间，当存在HIV相关肾病时，肾小球膜受损，LAM通过肾脏滤过至尿液；假说二认为当活动性结核病累及肾脏时，LAM释放到患者尿液；假说三认为活动性结核病患者尿液或血液中LAM丰度较低，超出了当前检测方法的界值，或其与尿液或血液中的其他蛋白结合掩盖其检测。近期研究发现，当LAM存在时，预先浓缩尿液会使其更容易被测到，结果支持假说三。以上这些为尿液LAM检测辅助诊断活动性结核病提供依据，具有更高检测敏感性和亲和力抗体的应用将进一步优化该检测方法。因此，设计利用高亲和力的抗体用于尿液中LAM的捕获和检测可能提高LAM检测的敏感性。鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种特异性结合脂阿拉伯甘露聚糖的单克隆抗体及其在分枝杆菌检测中的应用。本专利技术提供的抗体具有高敏感性、高特异性和高亲和力的特点，可以用于检测LAM和分枝杆菌感染(尤其是结核分枝杆菌)，有助于提高检测结果的准确性。本专利技术是这样实现的：第一方面，本专利技术实施例提供一种特异性结合脂阿拉伯甘露聚糖的抗体或其功能性片段，其轻链和重链的互补决定区具有如下(1)-(3)任一项所示的序列：(1)：轻链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.1-3所示；重链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.13-15所示；(2)：轻链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.1以及SEQIDNO.4-5所示；重链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.13-15所示；(3)：轻链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.6-8所示；重链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.16-18所示。本专利技术提供的抗体或其功能性片段，具有如上(1)-(3)任一项所示的CDR序列，本专利技术的研究显示，具有上述CDR序列的抗体或其功能性片段能够特异性结核分枝杆菌脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)，且具有较高的亲和力和敏感性；本专利技术提供的抗体或其功能性片段可以用于分枝杆菌的检测尤其是结核分枝杆菌的特异性检测，可以提高检测结果的准确性；本专利技术为LAM和分枝杆菌的检测提供更多的抗体选择方案，同时也为结核病的准确诊断提供了抗体基础制剂。术语″抗体″是指包含至少一个并优选两个重链(H)可变区(此处缩写VH)、至少一个并优选两个轻链(L)可变区(此处缩写VL)以及至少一个并优选两个重链恒定区的蛋白质。VH和VL区可进一步细分为高变区，称为″互补决定区″(complementaritydeterminingregions，CDR)，与称为″框架区″(frameworkregions，FR)的更保守区域相间。每一VH和VL由三个CDR和四个FR组成，从氨基端到羧基端按下列顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3以及FR4。在本专利技术的一些实施方案中，所述抗体或其功能性片段具有上述第(1)项所示的互补决定区序列，所述抗体或其功能性片段的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.9所示，所述抗体或其功能性片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.19所示。在本专利技术的一些实施方案中，所述抗体或其功能性片段具有上述第(2)项所示的互补决定区序列，所述抗体或其功能性片段的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.10所示，所述抗体或其功能性片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.20所示。在本专利技术的一些实施方案中，所述抗体或其功能性片段具有上述第(3)项所示的互补决定区序列，所述抗体或其功能性片段的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.11所示，所述抗体或其功能性片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.21所示。在本专利技术的一些实施方案中，所述抗体或其功能性片段的轻链恒定区为κ型或λ型轻链恒定区；述抗体或其功能性片段的重链恒定区选自：IgD、IgE、IgM、IgA和IgG中任意一种抗体的重链恒定区。优选的，所述轻链恒定区为κ型，氨基酸序列如SEQIDNO.12所示。优选的，所述重链恒定区选自IgG，氨基酸序列如SEQIDNO.22所示。在本专利技术的一些实施方案中，所述功能性片段选自Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或scFv。在本专利技术的一些实施方案中，所述抗体是兔单克隆抗体。在本专利技术公开了上述LAM的单克隆抗体或其功能性片段的氨基酸序列上，本领域技术人员容易利用本领域常规的技术例如基因工程技术获得上述LAM的单克隆抗体或其功能性片段，无论其以什么方式获得上述LAM的单克隆抗体或其功能性片段，其均属于本专利技术的保护范围。第二方面，本专利技术实施例提供编码如前述实施方式任一项所述的抗体或其功能性片段的核苷酸分子。基于本专利技术公开的氨基酸序列上，本领域技术人员容易获取编码这些抗体的核苷酸序列，无论其核苷酸分子序列如何变化，其只要是编码上述抗LAM的单克隆抗体或其功能性片段，即属于本专利技术的保护范围。在本专利技术的一些实施方案中，本专利技术实施例提供含有上述核苷酸分子的载体。在本专利技术的一些实施方案中，本专利技术实施例提供含有上述载体的宿主细胞。第三方面，实施例提供前述实施方式任一项所述的抗体或其功能性片段在制备检测分枝杆菌的试剂或试剂盒中的应用。在本专利技术公开的抗体的基础上，本领域技术人员容易地将上述单克隆抗体或其功能性片段用于制备检测分枝杆菌的试剂或试剂盒，无论试剂或试剂盒是基于何种检测原理例如免疫沉淀、ELISA等，只要其利用了本专利技术的抗体或其功能性片段，即属于本专利技术的保护范围。在本专利技术的一些实施方案中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种特异性结合脂阿拉伯甘露聚糖的抗体或其功能性片段，其特征在于，其轻链和重链的互补决定区具有如下(1)-(3)任一项所示的序列：/n(1)：/n轻链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1-3所示；/n重链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.13-15所示；/n(2)：/n轻链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1以及SEQ ID NO.4-5所示；/n重链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.13-15所示；/n(3)：/n轻链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.6-8所示；/n重链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.16-18所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种特异性结合脂阿拉伯甘露聚糖的抗体或其功能性片段，其特征在于，其轻链和重链的互补决定区具有如下(1)-(3)任一项所示的序列：
(1)：
轻链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.1-3所示；
重链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.13-15所示；
(2)：
轻链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.1以及SEQIDNO.4-5所示；
重链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.13-15所示；
(3)：
轻链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.6-8所示；
重链的CDR1-3的氨基酸序列分别如SEQIDNO.16-18所示。


2.根据权利要求1所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段具有上述第(1)项所示的互补决定区序列，所述抗体或其功能性片段的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.9所示，所述抗体或其功能性片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.19所示。


3.根据权利要求1所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段具有上述第(2)项所示的互补决定区序列，所述抗体或其功能性片段的轻链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.10所示，所述抗体或其功能性片段的重链可变区的氨基酸序列如SEQIDNO.20所示。


4.根据权利要求1所述的抗体或其功能性片段，其特征在于，所述抗体或其功能性片段具有上述第(3)项所示的互补决定区序列，所述抗体或其功能性片段的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：闫卓红，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京胸科医院，北京市结核病胸部肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11