发根农杆菌介导南瓜根系转化方法及基因编辑方法技术

本发明专利技术涉及一种发根农杆菌介导南瓜根系转化方法及基因编辑方法，通过特定工艺步骤首次实现利用发根农杆菌介导南瓜根系转化，并实现对转化根系的基因编辑，便于促进对南瓜进行分子生物学和基因功能研究。

Agrobacterium rhizogenes mediated transformation of pumpkin roots and gene editing

【技术实现步骤摘要】
发根农杆菌介导南瓜根系转化方法及基因编辑方法
本专利技术涉及植物
，尤其涉及一种发根农杆菌介导南瓜根系转化方法及基因编辑方法。
技术介绍
葫芦科是世界上最重要的食用植物科之一，包括黄瓜、南瓜、丝瓜、西瓜等常见的蔬菜和瓜果。其中，南瓜的果实、幼嫩茎叶、花都可食用，营养价值高，具有一定保健功能。同时南瓜具有耐贫瘠、抗逆性好等优势，还可用作西瓜、甜瓜、黄瓜等其它葫芦科作物的砧木，解决连作障碍等问题。然而，目前并没有针对南瓜根系转化的报道，不利于推进南瓜分子生物学和基因功能的研究。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种发根农杆菌介导南瓜根系转化方法及基因编辑方法，首次实现南瓜根系转化，并有利于促进对南瓜进行分子生物学和基因功能研究。本专利技术解决上述技术问题的技术方案如下：本专利技术提供一种发根农杆菌介导南瓜根系转化方法，包括如下步骤：获取含子叶基部和胚轴连接区段的外植体；采用含发根农杆菌Ar-qual的侵染液浸润外植体，并将浸润后的外植体置于共培养培养基中，于23±2℃、黑暗条件下共培本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种发根农杆菌介导南瓜根系转化方法，其特征在于，包括如下步骤：/n获取含子叶基部和胚轴连接区段的外植体；/n采用含发根农杆菌Ar-qual的侵染液浸润外植体，并将浸润后的外植体置于共培养培养基中，于23±2℃、黑暗条件下共培养，浸染，得侵染后的外植体；/n将侵染后的外植体转移至生根培养基中，于光强100±10μmol/m

【技术特征摘要】
1.一种发根农杆菌介导南瓜根系转化方法，其特征在于，包括如下步骤：
获取含子叶基部和胚轴连接区段的外植体；
采用含发根农杆菌Ar-qual的侵染液浸润外植体，并将浸润后的外植体置于共培养培养基中，于23±2℃、黑暗条件下共培养，浸染，得侵染后的外植体；
将侵染后的外植体转移至生根培养基中，于光强100±10μmol/m2/s2、光周期14±0.5h/10±0.5h、温度25±3℃条件下培养8-10天，挑出生根外植体并去除其上的第一批新生根系，再置于新鲜生根培养基中和相同外在环境条件下继续培养至第二批新生根系生长，得具有转化根系的南瓜组培苗。


2.根据权利要求1所述的发根农杆菌介导南瓜根系转化方法，其特征在于，所述共培养培养基为含100μM乙酰丁香酮、3％蔗糖和0.7％琼脂的MS培养基；和/或
所述生根培养基为含1％蔗糖、200mg/LTMT和0.3％植物凝胶的MS培养基。


3.根据权利要求1所述的发根农杆菌介导南瓜根系转化方法，其特征在于，还包括对南瓜组培苗进行炼苗的步骤：
将具有转化根系的南瓜组培苗定植于装有灭菌河沙并用透明塑料罩密封的穴盘中，于光强100±10μmol/m2/s2、光周期14±0.5h/10±0.5h、温度25±3℃条件继续培养3-5天，通风，继续培养，得具有转化根系的健壮南瓜苗。


4.根据权利要求1所述的发根农杆菌介导南瓜根系转化方法，其特征在于，获取含子叶基部和胚轴连接区段的外植体的步骤为：
选取饱满南瓜种子灭菌，再置于添加有含蔗糖的1/2MS培养基的组培瓶中，于28±5℃条件下催芽至胚轴伸长，再在光照条件下培养至子叶转为绿色，取出，切割。


5.根据权利要求4所述的发根农杆菌介导南瓜根系转化方法，其特征在于，选取饱满南瓜种子灭菌的步骤为：将南瓜种子置于55±5℃热水中浸泡2-4h，去种壳，次氯酸钠溶液消毒种子，无菌水冲洗，获得与种皮分离的种仁。


6.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：别之龙，杨丽，曹海顺，周利剑，孙静宇，
申请(专利权)人：华中农业大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42