【技术实现步骤摘要】
一种缩短水稻生育期的育种方法
本专利技术涉及水稻生物技术育种领域,具体涉及一种在目标基因上游定点插入启动子片段使基因表达上调从而创制生育期缩短的水稻材料的育种方法。
技术介绍
基因编辑技术是一种在体内定点修饰目标DNA序列的操作手段,利用序列特异核酸酶(Sequence-specificnucleases,SSNs)在基因组特定位点识别与切割目标DNA序列,产生DNA双链断裂(Double-strandbreaks,DSBs),从而激活细胞内源修复机制——非同源末端连接(Non-homologousendjoining,NHEJ)或同源重组(Homologousrecombination,HR)。非同源末端连接修复是指断裂的染色体在多种酶的作用下直接进行非精确的连接修复,这种修复方式往往是不准确地,会在特定位点引入插入/缺失。同源重组是指利用同源序列作为模板进行缺失序列的修复,利用同源重组可以人为引入预先设计的突变序列或外源DNA片段,实现基因敲除、染色体重组以及基因定点插入或替换等。CRISPR/Cas9系统是目前 ...
【技术保护点】
1.一种缩短水稻生育期的育种方法,其特征为,选择一个早开花/抽穗的基因,在所述基因的启动子序列中定点插入一个增强子序列促使所述早开花/抽穗基因的表达量增加,并缩短水稻的生育期。/n
【技术特征摘要】
1.一种缩短水稻生育期的育种方法,其特征为,选择一个早开花/抽穗的基因,在所述基因的启动子序列中定点插入一个增强子序列促使所述早开花/抽穗基因的表达量增加,并缩短水稻的生育期。
2.根据权利要求1所述的一种缩短水稻生育期的育种方法,所述增强子序列为35S增强子(SEQIDNO:25)。
3.根据权利要求1所述的一种缩短水稻生育期的育种方法,所述增强子通过CRISPR/Cas技术介导,定点插入到所述早开花/抽穗基因的启动子序列中。
4.根据权利要求3所述的一种缩短水稻生育期的育种方法,其特征为,所述育种方法的具体步骤为:
1)选择一个早开花/抽穗基因,设计靶向所述早开花/抽穗基因启动子的sgRNA,并构建体CRISPR/Cas载体;
2)选择定点插入位点,克隆靶点附近的同源重组臂,构建体含有35S增强子的载体;
3)将所述步骤1)和2)的载体转化农杆菌,并以培养好的两种农杆菌菌液混合共同转化水稻愈伤组织;
4)培养步骤3)获...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘军华,吴艳斌,陈磊,何峰,张冉,杨雪,王伟那,
申请(专利权)人:未名生物农业集团有限公司,
类型:发明
国别省市:北京;11
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