一种重组人纤连蛋白Ⅲ1-C及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种重组人纤连蛋白Ⅲ1‑C蛋白及其制备方法和应用。根据密码子表达偏好性先优化了该目的蛋白的目的基因片段，再将所得的基因片段插入pET‑32a中建重组质粒；将该重组质粒转化导入表达载体BL21(DE3)中，经筛选得到了能高效可溶性表达的阳性克隆菌；再将阳性克隆菌经放大发酵培养后诱导表达，再经破碎、离心得到的上清液经His‑tag亲和层析柱洗脱、透析、过滤一次性步骤纯化后，即可得到蛋白浓度高达1.0mg/mL以上，纯度大于90％的rhFNⅢ1‑C优质蛋白溶液。通过促细胞粘附性试验检测观察，显示rhFNⅢ1‑C具有明显促进MDBK细胞和Balb/c/3T3细胞的贴壁、粘附和细胞快速分裂生长的性能，表明该蛋白具有作为药妆医美护肤原料和成品的巨大潜力。

A recombinant human fibronectin \u2162 1-C and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种重组人纤连蛋白Ⅲ1-C及其制备方法和应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种重组人纤连蛋白Ⅲ1-C蛋白及其制备方法和应用。
技术介绍
人皮肤由表皮层、真皮层、皮下组织及皮肤附属器官组成，具有保护、调节体温、新陈代谢和感觉等功能。其中表皮层和真皮层的状态与皮肤状态紧密相关，由细胞和胞外基质组成的细胞环境稳态与皮肤状态相关。纤连蛋白(fibronectin，FN)是一种高分子量(约440kDa)的细胞外基质的二聚体糖蛋白，它与整合素跨膜受体蛋白结合，由两个几乎相同的单体通过一对二硫键连接而成，其基因位于人类2号染色体上,由Ⅰ型、Ⅱ型、Ⅲ型3种同源性序列组成，在结构上该蛋白分为3个区域,即N端的明胶结合区，中间部分的细胞结合区和C端的Ⅱ型肝素结合区。Ⅰ型和Ⅱ型都含有两个二硫键，而Ⅲ型则没有二硫键，RGD序列在细胞的黏附及FN与其他蛋白的相互作用中具有重要作用,该序列位于细胞结合区的第10个Ⅲ型重复中，FN可通过RGD与受体相连，从而发挥调节作用。与整合素相似的是，纤连蛋白结合了细胞外基质成分，如胶原蛋白、纤维蛋白和肝素硫酸盐蛋白聚糖(如多配本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组人纤连蛋白Ⅲ1-C蛋白(recombinant human FNⅢ1-C，rhFNⅢ1-C)其特征在于，所述rhFNⅢ1-C的基因序列如SEQUENCE LISTING 400〈3〉所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组人纤连蛋白Ⅲ1-C蛋白(recombinanthumanFNⅢ1-C，rhFNⅢ1-C)其特征在于，所述rhFNⅢ1-C的基因序列如SEQUENCELISTING400〈3〉所示。


2.如权利要求1所述的重组人纤连蛋白Ⅲ1-C蛋白的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)将所述rhFNⅢ1-C的基因插入到pET-32a中构建重组质粒rhFNⅢ1-C/pET32-a；
(2)将重组质粒转化导入表达载体BL21(DE3)中，在含氨苄青霉素的LB平板上筛选阳性克隆菌；
(3)将阳性克隆菌接种于含氨苄青霉素的培养液中进行发酵，培养至对数生长期，然后进行IPTG诱导表达，离心收集菌体蛋白；
(4)在冰浴中破碎菌体，然后进行离心，收集上清液，上清液经His-tag亲和层析纯化、透析、无菌过滤，即可得到高浓度高纯度的rhFNⅢ1-C目的蛋白。


3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)之后还包括对阳性克隆菌进行PCR鉴定、双酶切鉴定的步骤。


4.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：王明丽，徐艳艳，蒋敏之，吴博，周炜，何志远，夏兵兵，
申请(专利权)人：芜湖天明生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34