一种重组人TSG-6基因、重组人TSG-6蛋白标准品及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种重组人TSG‑6基因、重组人TSG‑6蛋白标准品及其制备方法和应用，本发明专利技术通过对已有的重组人TSG‑6基因进行优化后，克隆至pET‑32a表达载体中并转化至大肠杆菌中，培养后经诱导表达，经表达后的菌体经洗涤、变性、复性即可得到重组人TSG‑6蛋白粗品，再经分离纯化后得到重组人TSG‑6蛋白纯品，然后与冻干保护剂混合后，经冷冻干燥，制备得到所述重组人TSG‑6蛋白标准品；与现有技术相比，本发明专利技术通过密码子优化实现重组人TSG‑6蛋白的高效表达，并实现了重组人TSG‑6蛋白标准品的批量制备，以此为标准可使不同批次测定的重组人TSG‑6蛋白效价检测结果更为可靠可信。

A recombinant human TSG-6 gene, recombinant human TSG-6 protein standard and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
一种重组人TSG-6基因、重组人TSG-6蛋白标准品及其制备方法和应用
本专利技术属于生物
，具体涉及一种重组人TSG-6基因、重组人TSG-6蛋白标准品及其制备方法和应用。
技术介绍
肿瘤坏死因子α刺激基因6(tumornecrosisfactor-αstimulatedgene6，TSG-6)是一种炎症相关的分泌性蛋白，是由间充质干细胞或基质细胞(MSCs)对炎症信号的反应产生的，在多种炎症性疾病或类炎症性病理过程中呈高表达。现已知，TSG-6介导了许多免疫调节和组织修复过程，具有抗炎和组织保护作用，是一个正调节的功能蛋白。TSG-6是由TNFAIP6(tumornecrosisfactor-induciblegene6protein，TNFAIP6)基因编码，是Lee等在筛选肿瘤坏死因子α干预的人二倍体FS-4成纤维cDNA文库时发现的一个新基因。TSG-6基因主要是由相邻的两个组件即Link组件和CUB组件组成，其中Link组件负责与信号分子识别，与透明质酸(hyaluronicacid，HA)、硫酸软骨素本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种重组人TSG-6基因，其特征在于，所述重组人TSG-6基因的序列如SEQUENCELISTING 400〈2〉所示。/n

【技术特征摘要】
1.一种重组人TSG-6基因，其特征在于，所述重组人TSG-6基因的序列如SEQUENCELISTING400〈2〉所示。


2.一种如权利要求1所述的重组人TSG-6基因编码的重组人TSG-6蛋白，其特征在于，所述重组人TSG-6蛋白的氨基酸序列如SEQUENCELISTING400〈3〉所示。


3.一种重组人TSG-6蛋白标准品的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：
(1)对如SEQUENCELISTING400〈1〉所示的重组人TSG-6基因进行密码子优化，获得如权利要求1所述的重组人TSG-6基因；
(2)将步骤(1)所得的重组人TSG-6基因亚克隆至pET-32a表达载体中并转化至BL21(DE3)大肠埃希菌中，涂布含氨苄青霉素的LB平板培养过夜，得到重组人TSG-6重组菌；
(3)将重组人TSG-6重组菌进行放大培养，并经IPTG诱导表达，然后收集菌体；
(4)将步骤(3)收集的菌体破碎，离心后收集沉淀，沉淀经洗涤、变性、复性即可得到重组人TSG-6蛋白粗制品；
(5)重组人TSG-6蛋白粗品经分离纯化后即可得到重组人TSG-6蛋白纯品；
(6)重组人TSG-6蛋白纯品与冻干保护剂混合后，经冷冻干燥，即可得到所述重组人TSG-6蛋白标准品。


4.根据权利要求3所述的重组人TSG-6蛋白标准品的制备方法，其特征在于，步骤(2)中，还包括对LB平板上培养得到的单菌落进行PCR及Bam...

【专利技术属性】
技术研发人员：王明丽，何志远，吴博，蒋敏之，夏兵兵，周炜，
申请(专利权)人：芜湖天明生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34