猪GADD45a基因的新用途及高表达细胞系的构建和应用制造技术

本发明专利技术公开了猪GADD45a基因的新用途及高表达细胞系的构建和应用。根据猪GADD45a基因全长序列和载体pLEX‑MCS，设计并合成含有酶切位点的GADD45a全长的扩增引物；从小猪脂肪组织中扩增得到GADD45a基因全长序列，回收并酶切，与酶切后的pLEX‑MCS连接，构建pLEX‑MCS‑GADD45a慢病毒质粒，单克隆测序鉴定并验证后，采用脂质体转染法将pLEX‑MCS‑GADD45a慢病毒质粒和pSPAX.2及pMD2.G共转染到293T细胞中，获得重组慢病毒；采用步骤2）获得的重组慢病毒转染猪IPEC‑J2细胞，获得高表达猪GADD45a基因的IPEC‑J2细胞系。猪GADD45a基因的新用途，用于调控营养吸收代谢。本发明专利技术开拓了猪GADD45a基因的新功能及其在肠道上皮细胞中研究的新方法。

New application of Gadd45a gene and construction and application of high expression cell line

【技术实现步骤摘要】
猪GADD45a基因的新用途及高表达细胞系的构建和应用
本专利技术涉及猪GADD45a基因的新用途及高表达细胞系的构建和应用，属于生物和现代农业
的应用技术。
技术介绍
GADD45a（又叫DDIT1）是生长阻滞和DNA损伤诱导基因家族成员之一，是第一个被检出的p53的下游基因，是一个能够识别基因组损伤的重要生物标志物。参与调控细胞周期、细胞凋亡、细胞衰老和肿瘤发生发展等，在调控细胞周期、维持基因组稳定性、细胞凋亡、DNA损伤修复以及信号传导等重要细胞生命活动中起重要作用。猪GADD45a基因mRNA有1527bp，有4个外显子，编码序列全长为498bp，编码165个氨基酸，编码约18kD的蛋白。但目前关于猪GADD45a的研究报道甚少。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足，本专利技术的目的是提供猪GADD45a基因的新用途及高表达细胞系的构建和应用。一种高表达猪GADD45a基因的细胞系的构建方法，包括以下步骤：1）、根据猪GADD45a基因全长序列和LentiORFTM-pLEX-MCS载本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高表达猪GADD45a基因的细胞系的构建方法，其特征是：包括以下步骤：/n1）、根据猪GADD45a基因全长序列和LentiORF

【技术特征摘要】
1.一种高表达猪GADD45a基因的细胞系的构建方法，其特征是：包括以下步骤：
1）、根据猪GADD45a基因全长序列和LentiORFTM-pLEX-MCS载体，简称pLEX-MCS，设计并合成含有酶切位点的GADD45a全长的扩增引物；
2）从小猪脂肪组织中扩增得到GADD45a基因全长序列，回收并酶切，与酶切后的pLEX-MCS连接，构建pLEX-MCS-GADD45a慢病毒质粒，单克隆测序鉴定并验证后，采用脂质体转染法将pLEX-MCS-GADD45a慢病毒质粒和pSPAX.2及pMD2.G共转染到293T细胞中，获得重组慢病毒；
3）采用步骤2）获得的重组慢病毒转染猪IPEC-J2细胞，获得高表达猪GADD45a基因的IPEC-J2细胞系。


2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征是：所述步骤2）中构建pLEX-MCS-GADD45a慢病毒质粒的验证：
取8×105个/孔的密度接种于6孔细胞培养板中，然后用脂质体转染pLEX-MCS-GADD45a质粒，48...

【专利技术属性】
技术研发人员：单体中，有文静，汪以真，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33