靶向治疗血液病恶性肿瘤的研究方法技术

本发明专利技术涉及靶向CD19的嵌合抗原受体逆转录病毒的生产流程及其用途。具体而言，本发明专利技术提供一种融合蛋白，所述融合蛋白选自：(1)含有依次连接的人的CD8抗原的前导肽、抗CD19单链抗体、人CD8α铰链区、人CD28跨膜区、人CD28胞内区和人CD3ζ胞内区的融合蛋白；和(2)在(1)限定的氨基酸序列中经过取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且保留活化T细胞活性的由(1)衍生的融合蛋白。本发明专利技术还提供包装逆转录病毒的过程，以及产毒细胞株的生产过程和筛选单克隆细胞株的过程。本发明专利技术成功制备了表达CD19‑CD28z CAR的种子细胞库，为批量生产靶向CD19逆转录病毒奠定了基础。

Targeted therapy for hematological malignancies

【技术实现步骤摘要】
靶向治疗血液病恶性肿瘤的研究方法
本专利技术属于嵌合抗原受体领域，具体涉及靶向CD19的嵌合抗原受体逆转录病毒生产及其用途
技术介绍
嵌合抗原受体(ChimericAntigenReceptor-Tcell，CAR-T)T细胞是指经基因修饰后，能以MHC非限制性方式识别特定目的抗原，并且持续活化扩增的T细胞。2012年国际细胞治疗协会年会中指出生物免疫细胞治疗已经成为手术、放疗、化疗外的第四种治疗肿瘤的手段，并将成为未来肿瘤治疗必选手段。CAR-T细胞回输治疗是当前肿瘤治疗中最明确有效的免疫治疗形式。大量研究表明，CAR-T细胞可以有效的识别肿瘤抗原，引起特异性的抗肿瘤免疫应答，显著改善患者的生存状况。嵌合抗原受体(CAR)是CAR-T的核心部件，赋予T细胞HLA非依赖的方式识别肿瘤抗原的能力，这使得经过CAR改造的T细胞相较于天然T细胞表面受体TCR能够识别更广泛的目标。CAR的基础设计中包括一个肿瘤相关抗原(tumor-associatedantigen，TAA)结合区(通常来源于单克隆抗体抗原结合区域的scFV段)，一个胞外铰链区本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种核酸构建物，所述核酸构建物含有权利要求4所述的多核苷酸序列；/n优选地，所述核酸构建物为载体；/n更优选地，所述核酸构建物为RV逆转录病毒骨架载体，含有复制起始位点，3’LTR，5’LTR，以及权利要求4所述的多核苷酸序列。/n

【技术特征摘要】
1.一种核酸构建物，所述核酸构建物含有权利要求4所述的多核苷酸序列；
优选地，所述核酸构建物为载体；
更优选地，所述核酸构建物为RV逆转录病毒骨架载体，含有复制起始位点，3’LTR，5’LTR，以及权利要求4所述的多核苷酸序列。


2.一种逆转录病毒包装，所述逆转录病毒含有权利要求1所述的RV骨架载体，以及gag-pol载体和VSVG载体，通过磷酸钙转染法进行逆转录病毒包装。


3.一种细胞株PG13，所述感染权利要求2所包装好的逆转录病毒，形成PG13-CD19-CD28z产毒细胞株。CD19-CD28z该核苷酸序列选自：
在所述抗CD19单链抗体的编码序列前的所述信号肽的编码序列如SEQIDNO:1第1-63位核苷酸序列所示；和/或
所述抗CD19单链抗体的轻链可变区的编码序列如SEQIDNO:1第64-384位核苷酸序列所示；和/或
所述抗CD19单链抗体的重链可变区的编码序列如SEQIDNO:1第430-789位核苷酸序列所示；和/或
所述人CD8α铰链区的编码序列如SEQIDNO:1第790-930位核苷酸序列所示；和/或<...

【专利技术属性】
技术研发人员：王海鹰，
申请(专利权)人：上海恒润达生生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31