本发明专利技术涉及TGF‑β受体II同种型、融合肽、治疗方法和体外方法。TGFβ受体II的同种型包含约80个氨基酸的序列并且缺乏跨膜结构域。所述同种型包含SEQ ID No.12所示的氨基酸序列。所述同种型可以具有SEQ ID No.2所示的序列或具有与SEQ ID No.2所示序列至少85％的序列同一性的序列。本发明专利技术提供了融合肽，其包含与配体融合的TGFβII受体的同种型，其中，包含所述融合肽的载体用于治疗癌症和/或肝纤维化。本发明专利技术提供了结合TGFβII受体的可溶性同种型的抗体。该抗体结合SEQ ID No.12所示的氨基酸序列，并用于体外方法。
TGF - \u03b2 receptor II homology, fusion peptide, therapeutic method and in vitro method
【技术实现步骤摘要】
TGF-β受体II同种型、融合肽、治疗方法和体外方法
本专利技术涉及编码多核苷酸、载体、细胞、转化肽和融合肽的TGF-β受体II的同种型、方法和用途。更具体而言，涉及到TGF-β受体II的同种型，其包含约80个氨基酸的序列并且缺乏跨膜结构域。所述同种型包含SEQIDNo.12的氨基酸序列。所述同种型可以具有SEQIDNo.2所示的氨基酸序列或具有与SEQIDNo.2所示的序列至少85％序列同一性的序列。
技术介绍
转化生长因子-β(TGF-β)在骨基质中含量很高，并且在体外和体内显示出调节成骨细胞和破骨细胞的活性。人脂肪来源的间充质基质细胞(ASC)是成骨细胞、成脂细胞和成软骨细胞的前体。因此，最初的研究集中在ASC分泌的对骨重塑具有深远影响的细胞因子(如Tgf-β1)、骨保护素(OPG)和肝细胞生长因子(HGF)。患有骨关节炎的人的软骨下骨中TGF-β1的浓度很高。高浓度的TGF-β1诱导了巢蛋白阳性间充质干细胞(MSC)簇的形成，导致了骨髓类骨质胰岛的形成，并伴随着高水平的血管生成(ZhenG等，NatMed.19：704-12，2013)。已发现成骨细胞中活性TGF-β1的转基因表达会诱发骨关节炎，而通过TβRII显性阴性受体抑制软骨下骨中TGF-β的活性减轻了关节软骨的变性，从而导致骨关节炎进展更缓。另据报道，在成骨细胞中表达了显性阴性II型TGF-β受体(TβRII-DN)的小鼠显示出在成骨细胞中降低的TGF-β响应性和增加的骨体积，这表明内源性TGF-β直接作用于成骨细胞以调节骨重塑、结构和生物力学特性(FilvaroffE等，Development，126：4267-4279，1999)。此外，TGF-β还部分地通过诱导骨保护素(OPG)来调节破骨细胞的生成和破骨细胞的存活，OPG是一种已知抑制破骨细胞形成和功能的蛋白质(ThirunavukkarasuK等，J.Biol.Chem.276:36241-36250，2001)。在骨骼组织中过表达显性阴性II型TGF-β受体(dnTgfbr2)的转基因小鼠表现出进行性骨骼变性(BuckwalterJA等，ClinOrthopRelatRes423：7-16，2004)。软骨组织浅表区的关节软骨细胞肥大，并伴有X型胶原表达增加。在非常类似于人骨关节炎(OA)(OA样)的6个月大的小鼠中已经观察到蛋白聚糖的损失和软骨组织的进行性退化(SerraR等，JCellBiol139：541-552，1997)。TGF-β信号传导不仅在软骨破坏过程中调节软骨细胞稳态中起着关键作用，而且在骨赘形成(OA的另一特征)过程中软骨下骨细胞行为的操纵中也起着至关重要的作用(vanderKraanPM等，OsteoarthrCartilage15：237-244，2007)。通过使用特异性TGF-β抑制剂的阻断研究，进一步探索了TGF-β信号通路在骨赘形成中的作用。几组研究表明，通过可溶性TGF-βII型受体细胞外结构域或Smad7的关节内过表达来消除内源性TGF-β活性，可以抑制实验性鼠类OA模型中的骨赘形成(ScharstuhlA等，JImmunol169：507-514，2002)。这些观察清楚地表明，至少在鼠类OA模型中，TGF-β在诱导骨赘中起主要作用。在体内，TGF-β1还诱导血管生成(MadriJA等，JCellBiol.106：1375-1384，1988；RobertsAB，ProcNatlAcadSciUSA.83：4167-4171，1986；YangEY等，JCellBiol.111：731-741，1990)。在OA中，高TGF-β1水平还伴随着高水平的血管生成。肝细胞生长因子(HGF)是多种细胞(主要是上皮细胞)的有效促分裂原、形态发生原和运动原。HGF/HGF-受体系统在骨关节炎软骨中表达的增加，提示其在人关节软骨的稳态和发病机理中起调节作用(PfanderD等，OsteoarthritisCartilage.7：548-59，1999)。先前的研究表明TGF-β可以通过刺激HGF表达来促进血管生成和肿瘤侵袭(ChuSH等，JNeurooncol.，85：33-38，2007；LewisMP等，BrJCancer90：822-832，2004))。相反地，TGF-β也显示出抑制HGF转录的作用，可能是通过结合位于HGF转录起始位点上游约400bp的TGF-β抑制元件而实现的(LiuY等，JBiolChem.，269：4152-4160，1994；Plaschke-SchlütterA等，JBiolChem.，270：830-836，1995)，消除这种作用会导致癌症的发展(ChengN等，CancerRes.67：4869-4877，2007)。诸如环丙沙星(CPFX)等喹诺酮类(QN)抗生素，由于其广谱的抗菌活性和高生物利用度而被广泛用于临床实践。由于它们对未成熟动物的关节软骨有毒性作用，因此未获准用于儿童和青少年(CuzzolinL等，ExpertOpinDrugSaf1：319-24，2002)。当在生长阶段给予时，全身施用的喹诺酮引起关节病和肌腱病(SendzikJ等，IntJAntimicrobAgents33：194-200，2009.)。据报道，环丙沙星减少了股骨髁的关节软骨的厚度，其在幼年大鼠中以浓度和时间依赖的方式抑制了培养的软骨细胞的增殖和可溶性蛋白聚糖的分泌(Li，P等，Arch.Pharmacol.Sin.25：1262-1266，2004)。软骨细胞簇形成是所有机械和化学OA模型的特征(MoriizumiT等，VirchowsArchBCellPatholInclMolPathol.，51：461-474，1986；vanderKraanPM等，AmJPathol.，135:1001-1014，1989)。患有喹诺酮关节病的动物在含有坏死软骨细胞的关节软骨中间区域显示空腔。14天后，缺陷区域的许多腔都含有软骨细胞簇。当治疗14天并且经过14天的恢复期，簇状区域内的单个软骨细胞周围已沉积了领域基质，这表明在未成熟的关节中的簇细胞有一定程度的自发修复(SharpnackDD等，LabAnimSci.，44：436-442，1994)。已经显示，在前十字韧带横断(ACLT)骨关节炎小鼠模型中，响应于机械负荷的改变，软骨下骨中的TGF-β1被激活(ZhenG等，NatMed.19：704-12，2013)。另外，发现CPFX通过HT-29细胞上调TGF-β1的产生，并且当TGF-β1被阻断时，其抗增殖作用被消除(BourikasLA等，BrJPharmacol.157：362-70，2009)。脂肪干细胞(hASC)表达细胞因子，诸如IL-6、GM-CSF和Flt3-配体((TholpadySS等，ClinPlastSurg33：55-62，2006；KatzAJ等，StemCells.23：412-23，2005；A等，StemCells25：818-827，2007)。这些细胞因子被TGF-β1负调本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种治疗肝纤维化或癌症疾病的方法，其包括向需要其的哺乳动物施用含有SEQ IDNo.7所示多核苷酸序列的载体的步骤。/n
【技术特征摘要】
20181029 US 16/173,4261.一种治疗肝纤维化或癌症疾病的方法，其包括向需要其的哺乳动物施用含有SEQIDNo.7所示多核苷酸序列的载体的步骤。
2.如权利要求1所述的方法，当所述疾病是肝纤维化时，所述施用是肝内施用。
3.如权利要求1所述的方法，当所述疾病是癌症时，所述施用是瘤内施用。
4.如权利要求1所述的方法，其中，所述载体是慢病毒。
5.一种确立类风湿性关节炎疾病活性的方法，其中，所述方法包括以下中的至少一项：确定表达同种型TβRII-SE的嗜中性粒细胞的百分比或确定嗜中性粒细胞中同种型TβRII-SE的细胞内浓度。
6.如权利要求5所述的方法，其中，表达同种型TβRII-SE的嗜中性粒细胞的百分比与类风湿性关节炎疾病活性水平成反比。
7.如权利要求5所述的方法，其中，细胞内TβRII-...
【专利技术属性】
技术研发人员：A·洛莫，A·B·拉科拉，M·A·普雷塞格尔，M·S·贝尔托利奥，R·A·德维，P·D·瓦兹奎斯，A·N·基萨里，T·M·罗德里格斯，B·J·维拉索·扎莫拉，
申请(专利权)人：国家科学技术委员会，关节基金会，
类型：发明
国别省市：阿根廷;AR
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