一种慢病毒表达载体的设计及应用制造技术

本发明专利技术属于分子生物学及细胞生物学领域，具体涉及一种慢病毒表达载体的设计及应用。本发明专利技术设计载体，采用CMV enhancer和CMV promoter作为插入基因的转录起始元件；采用EF1a‑core promoter作为筛选标记嘌呤霉素和绿色荧光蛋白GFP的转录起始元件，嘌呤霉素抗性基因和GFP序列之间通过T2A连接串联表达；采用慢病毒载体作为该载体骨架，将上述两个元件插入骨架载体，合理设计优化而成。采用本发明专利技术设计的慢病毒载体，可以高效表达插入基因，表达效率优于目前同类型特征的载体。

Design and application of a lentivirus expression vector

【技术实现步骤摘要】
一种慢病毒表达载体的设计及应用
本专利技术属于分子生物学及细胞生物学领域，具体涉及一种慢病毒表达载体的设计及应用。
技术介绍
慢病毒载体(Lentiviralvector)是在HIV-1病毒基础上改造而成的病毒载体系统，它能高效的将目的基因导入动物和人的原代细胞或细胞系。慢病毒载体介导的基因表达持续且稳定，原因是插入基因整合到宿主细胞基因组中，并随细胞基因组的分裂而分裂。另外，慢病毒有广泛的宿主，可感染分裂和不分裂的细胞，几乎可以感染所有类型的细胞，特别适合质粒载体转染效率低的细胞。目前，有多种形式的慢病毒表达载体，都是以慢病毒载体骨架，加载不同的基因操控元件设计而成。进行基因过表达时，可通过不同的实验目的选择不同元件组成的慢病毒表达载体。美国SystemBiosciences公司开发的具有双启动子的pCDH系列慢病毒载体，载体大小不超过9000bp，允许插入较大片段的基因，具有抗生素抗性基因和荧光蛋白双重筛选基因，可通过抗生素筛选获得稳转细胞株和通过荧光蛋白检测转染效率，这些独特优势特性使其成为主流的慢病毒表达载体之一。然而，专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种慢病毒表达载体，其特征在于：慢病毒表达载体的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。/n

【技术特征摘要】
1.一种慢病毒表达载体，其特征在于：慢病毒表达载体的核苷酸序列为SEQIDNO.1。


2.一种慢病毒表达载体的应用，其特征在于：基于其核苷酸序列，可应用于下述五个方面：可插入目的基因、可包装为慢病毒感染目的细胞、可高水平表达插入目的基因、可通过嘌呤霉素筛选获得稳转细胞株、可通过GFP检测转染效率。


3.一种慢病毒表达载体的应用方法，其特征在于：
(1)插入目的基因：通过PCR技术获得插入目的基因的片段，采用酶切连接的方法将目的基因片段插入慢病毒表达载体的多克隆位点；
(2)包装为慢病毒感染目的细胞：
慢病毒表达载体在293T细胞中转录生成病毒基因组RNA，包装载体在293T细胞中转录翻译生成病毒蛋白，然后病毒基因组RNA与病毒蛋白在细胞中组装成慢病毒，慢病毒从293T细胞中释放到培养基中，...

【专利技术属性】
技术研发人员：武兴康，鲁玉凡，韩晨晨，秦雪梅，
申请(专利权)人：山西大学，
类型：发明
国别省市：山西;14