一种双葡基海藻糖的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种双葡基海藻糖的制备方法，涉及非还原性糖的生产方法领域，解决提高生产双葡基海藻糖效率的问题，其技术方案要点是：包括将底物与双葡基海藻糖生产成套试剂进行反应得到双葡基海藻糖；所述双葡基海藻糖生产成套试剂包括麦芽四糖水解酶和麦芽寡糖基海藻糖合成酶；所述底物为淀粉或淀粉水解物。

A method of preparation of diglucose trehalose

【技术实现步骤摘要】
一种双葡基海藻糖的制备方法
本专利技术涉及非还原性糖的生产方法领域,更具体地说，它涉及一种双葡基海藻糖的制备方法。
技术介绍
双葡基海藻糖是由一个麦芽糖和一个海藻糖通过α-1,4糖苷键结合的非还原性糖，是一种具有多种生物学功能的优质的非还原性糖。双葡基海藻糖很强的亲水性，具有保湿功能。除了保湿、抑制皮肤粗糙外，双葡基海藻糖还具有许多生物学功能，比如对细胞干燥的保护作用，细胞干燥就会受到损伤，双葡基海藻糖起到很有效的保护作用，因此对于干燥、老化的皮肤有很好的修复作用。此外，它还有抗炎症的作用：炎症是诱发皮肤问题的主要原因，微生物、紫外线照射、病毒感染等原因都会穿过角化细胞，使得炎症因子之一的TNF-a因子增多，从而出现皮肤问题。双葡基海藻糖可以抑制TNF-a的产生，从而实现抗炎的作用。但目前缺乏绿色高效的双葡基海藻糖制备技术。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种双葡基海藻糖的制备方法，达到提高生产双葡基海藻糖效率目的。本专利技术的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种双葡基海藻糖的制备方法，包括将底物与双葡基海藻糖生产成套试剂进行反应得到双葡基海藻糖；所述双葡基海藻糖生产成套试剂包括麦芽四糖水解酶和麦芽寡糖基海藻糖合成酶；所述底物为淀粉或淀粉水解物。通过采用上述技术方案：加入麦芽四糖水解酶和麦芽寡糖基海藻糖合成酶，极大提高了双葡基海藻糖的生产强度，显著降低了生产双葡基海藻糖的时间，提高生产双葡基海藻糖效率，减少了双葡基海藻糖的生产成本和能耗。本专利技术进一步设置为，所述麦芽四糖水解酶为如下M1）或M2）的蛋白质：M1）氨基酸序列是SEQIDNo.1的蛋白质；M2）在SEQIDNo.1所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有所述麦芽四糖水解酶功能的由M1）衍生的蛋白质；所述麦芽寡糖基海藻糖合成酶为下述S1）或S2）的蛋白质：S1）氨基酸序列为SEQIDNo.3的蛋白质；S2）在SEQIDNo.3所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有所述麦芽寡糖基海藻糖合成酶功能的由S1）衍生的蛋白质。本专利技术进一步设置为，所述双葡基海藻糖生产成套试剂还包括切支酶。本专利技术进一步设置为，双葡基海藻糖的制备方法还包括：将麦芽四糖水解酶基因导入受体细胞中进行表达得到所述麦芽四糖水解酶；所述受体细胞为微生物细胞、非人动物细胞或植物细胞。本专利技术进一步设置为，双葡基海藻糖的制备方法还包括：将麦芽寡糖海藻糖合成酶基因导入受体细胞中进行表达得到所述麦芽寡糖海藻糖合成酶；所述受体细胞为微生物细胞、非人动物细胞或植物细胞。本专利技术进一步设置为，所述麦芽四糖水解酶基因为下述M11）-M13）中的任一种DNA分子：M11）编码序列是SEQIDNo.2所示的cDNA分子或基因组DNA；M12）在严格条件下与M11）限定的DNA分子杂交且编码所述麦芽四糖水解酶的cDNA分子或基因组DNA；M13）与M11）或M12）限定的DNA分子具有75％以上的同一性且编码所述麦芽四糖水解酶的cDNA分子或基因组DNA；所述麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因为下述S11）-S13）中的任一种DNA分子：S11）编码序列是SEQIDNo.4所示的cDNA分子或基因组DNA；S12）在严格条件下与S11）限定的DNA分子杂交且编码所述麦芽寡糖基海藻糖合成酶的cDNA分子或基因组DNA；S13）与S11）或S12）限定的DNA分子具有75％以上的同一性且编码所述麦芽寡糖基海藻糖合成酶的cDNA分子或基因组DNA。本专利技术的另一个目的是提供一种根据上述双葡基海藻糖的制备方法中制备的双葡基海藻糖生产成套试剂。本专利技术的另一个目的是提供一种用于生产双葡基海藻糖的生物材料，C1）用于生产双葡基海藻糖的成套DNA分子，包括权利要求4-6中任一所述麦芽四糖水解酶基因和所述麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因，各基因各自独立包装；C2）用于生产双葡基海藻糖的重组载体或成套重组载体，所述重组载体或所述成套重组载体能产生权利要求1或2或3所述双葡基海藻糖生产成套试剂；C3）用于生产双葡基海藻糖的重组细胞或成套重组细胞，所述重组细胞或所述成套重组细胞能产生权利要求1或2或3所述双葡基海藻糖生产成套试剂。本专利技术的另一个目的是提供一种根据上述的用于生产双葡基海藻糖的生物材料制得的产品，C2）所述重组载体或所述成套重组载体为利用C1）所成套DNA分子产生权利要求1或2或3所述双葡基海藻糖生产成套试剂的载体；C3）所述重组细胞或所述成套重组细胞为利用C1）所成套DNA分子产生权利要求1或2或3所述双葡基海藻糖生产成套试剂的细胞。本专利技术的另一个目的是提供一种双葡基海藻糖生产成套试剂在制备双葡基海藻糖中的应用；用于生产双葡基海藻糖的生物材料在制备双葡基海藻糖中的应用；所述的产品在制备双葡基海藻糖中的应用。综上所述，本专利技术具有以下有益效果：加入麦芽四糖水解酶和麦芽寡糖基海藻糖合成酶，极大提高了双葡基海藻糖的生产强度，显著降低了生产双葡基海藻糖的时间，提高生产双葡基海藻糖效率，减少了双葡基海藻糖的生产成本和能耗。附图说明图1为酶法转化生产双葡基海藻糖的HPLC检测；图2为糖化酶处理后海藻糖和葡萄糖的HPLC检测。具体实施方式以下结合附图对本专利技术作进一步详细说明。本专利技术中所使用的试剂和耗材都为市购获得的常规产品。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。实施例1：一种双葡基海藻糖的制备方法，包括将底物与双葡基海藻糖生产成套试剂进行反应得到双葡基海藻糖；所述双葡基海藻糖生产成套试剂包括麦芽四糖水解酶和麦芽寡糖基海藻糖合成酶；所述底物为淀粉或淀粉水解物。利用酶活较高的麦芽四糖水解酶（MTAase）和麦芽寡糖基海藻糖合成酶（MTSase），以淀粉水解物为底物制备双葡基海藻糖的整套工艺采用一锅法，双酶共同处理，降低了生产双葡基海藻糖的时间，因此提高生产双葡基海藻糖效率，减少了双葡基海藻糖的生产成本和能耗。M1：麦芽四糖水解酶为氨基酸序列是SEQIDNo.1的蛋白质；S1：麦芽寡糖基海藻糖合成酶，氨基酸序列为SEQIDNo.3的蛋白质。此外也可以是一种经过基因优化的MTSase基因，构建而得到表达载体pBAD-MTSase,含有该表达载体的重组表达菌株表达量很高，使生产酶的成本显著降低，也进一步降低了制备双葡基海藻糖的成本。麦芽四糖水解酶也可以为在SEQIDNo.1所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有所述麦芽四糖水解酶功能的由M1）衍生的蛋白质。麦芽寡糖基海藻糖合成酶也可以为在SEQIDNo.3所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有所述麦芽寡糖基海藻糖合成酶功能本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种双葡基海藻糖的制备方法，其特征在于，包括将底物与双葡基海藻糖生产成套试剂进行反应得到双葡基海藻糖；所述双葡基海藻糖生产成套试剂包括麦芽四糖水解酶和麦芽寡糖基海藻糖合成酶；所述底物为淀粉或淀粉水解物。/n

【技术特征摘要】
1.一种双葡基海藻糖的制备方法，其特征在于，包括将底物与双葡基海藻糖生产成套试剂进行反应得到双葡基海藻糖；所述双葡基海藻糖生产成套试剂包括麦芽四糖水解酶和麦芽寡糖基海藻糖合成酶；所述底物为淀粉或淀粉水解物。


2.根据权利要求1所述的一种双葡基海藻糖的制备方法，其特征在于，所述麦芽四糖水解酶为如下M1）或M2）的蛋白质：
M1）氨基酸序列是SEQIDNo.1的蛋白质；
M2）在SEQIDNo.1所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有所述麦芽四糖水解酶功能的由M1）衍生的蛋白质；
所述麦芽寡糖基海藻糖合成酶为下述S1）或S2）的蛋白质：
S1）氨基酸序列为SEQIDNo.3的蛋白质；
S2）在SEQIDNo.3所示的氨基酸序列中经过取代和/或缺失和/或添加一个或几个氨基酸残基得到的具有所述麦芽寡糖基海藻糖合成酶功能的由S1）衍生的蛋白质。


3.根据权利要求1或2所述的一种双葡基海藻糖的制备方法，其特征在于，所述双葡基海藻糖生产成套试剂还包括切支酶。


4.根据权利要求1或2所述的一种双葡基海藻糖的制备方法，其特征在于，双葡基海藻糖的制备方法还包括：将麦芽四糖水解酶基因导入受体细胞中进行表达得到所述麦芽四糖水解酶；所述受体细胞为微生物细胞、非人动物细胞或植物细胞。


5.根据权利要求1或2所述的一种双葡基海藻糖的制备方法，其特征在于，双葡基海藻糖的制备方法还包括：将麦芽寡糖海藻糖合成酶基因导入受体细胞中进行表达得到所述麦芽寡糖海藻糖合成酶；所述受体细胞为微生物细胞、非人动物细胞或植物细胞。


6.根据权利要求1或2所述的一种双葡基海藻糖的制备方法，其特征在于，所述麦芽四糖水解酶基因为下述M11）-M13）中的任一种DNA分子：
M11）编码序列是SEQIDNo.2所示的cDNA分子或基因组DNA；
M12）在严格条件下与M11）限定的DNA分子杂交且编码所述麦芽四糖水解酶的cDNA分子或基因组...

【专利技术属性】
技术研发人员：史鲁秋，汪昌国，苏桂珍，薛虹宇，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：南京盛德生物科技研究院有限公司，南京华狮新材料有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32