重组载体及其在制备比卡菌素中的应用制造技术

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，尤其涉及重组载体及其在制备比卡菌素中的应用。本发明专利技术通过研究表明，通过引入Bik1，Bik2，Bik3基因和PPTase、NpgA中至少一个的组合，能够实现复杂聚酮路径‑Bikaverin pathway在酿酒酵母中的首次合成，这是比卡菌素在外源物种中的首次合成。

Recombinant vector and its application in the preparation of bicarbutin

【技术实现步骤摘要】
重组载体及其在制备比卡菌素中的应用
本专利技术涉及基因工程
，尤其涉及重组载体及其在制备比卡菌素中的应用。
技术介绍
真菌聚酮是一大类结构和功能多样的天然产物，具有多样的临床相关的医学生物活性，包括抗生素、抗真菌、免疫抑制和抗癌活性。由于该类化合物种类巨多，生物活性明显，已经成为了筛选新药物开发新疗法的优秀候选分子。因此，此类产物的生物合成及大规模发酵，具有重要意义。真菌聚酮的生物合成是由一个多功能聚酮合酶从乙酰辅酶A开始通过聚合多个丙二酰辅酶A(或其他碳单元)形成初始骨架，然后经过相应的修饰蛋白催化形成最终产物。这是一个高度调控，多重迭代的过程，涉及了聚酮碳链的起始，延伸，环化和解离多等个环节。因此真菌聚酮的合成和大规模发酵也成为了一个难点。比卡菌素(Bikaverin)是一种红色的四环聚酮化合物，具有抗细菌，抗真菌，抗原虫，抗肿瘤的效果，在农业，林业和临床医学上都有巨大的应用潜力。作为次级代谢产物，比卡菌素在自然界中主要由镰刀菌属(Fusarium)生产，受环境中的pH值，氮源等因素调节，同时又与硫元素，磷酸盐等因素相关。...

【技术保护点】
1.Bik1，Bik2，Bik3、Bik6、PPTase、NpgA基因中至少一种在构建产比卡菌素的酵母菌株中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.Bik1，Bik2，Bik3、Bik6、PPTase、NpgA基因中至少一种在构建产比卡菌素的酵母菌株中的应用。


2.基因表达模块，其包含Bik1，Bik2，Bik3、Bik6、PPTase、NpgA基因中至少一种。


3.根据权利要求2所述的基因表达模块，其特征在于，包含如下I)～II)中至少一种：
I)、Bik1，Bik2，Bik3、Bik6、PPTase、NpgA基因中至少一种，每个基因的5’端连接启动子，3’端连接终止子；
II)、Bik1，Bik2，Bik3、Bik6、PPTase、NpgA基因中至少两种的融合片段，每个融合片段的5’端连接启动子，3’端连接终止子。


4.根据权利要求3所述的表达模块，其特征在于，包含Bikl，Bik2，Bik3、Bik6、PPTase、NpgA基因中至少5种。


5.根据权利要求3所述的表达模块，其特征在于，包含Bik1，Bik2，Bik3、Bik6、PPTase、NpgA基因中任意2个组成的融合片段，以及其余4个基因中至少一种。


6.根据权利要求2～5任一项所述的表达模块，其特征在于，所述启动子、终止子来自酿酒酵母。


7.根据权利要求6所述的表达模块，其特征在于，
包括PTEF1-Bik2、PTPI1-Bik3、PGAL1-Bik1、PPGK1-Bik6、PENO2-PPTase、PTEF2-NpgA；
或包括PTEF1-Bik2、PTPI1-Bik3、PGAL1-Bik1、PENO2-PPTase、PTEF2-NpgA；
或包括PTEF1-Bik2、PTPI1-Bik3、PGAL1-Bik1、PPGK1-Bik6、PTEF2-NpgA；
或包括PTEF1-Bik2、PTPI1-Bik3、PGAL1-Bik1、PP6K1-Bik6、PENO2-PPTase；
或包括PGAL1-Bik2、PTPI1-Bik3、PGAL1-Bik1、PPGK1-Bik6、PENO2-PPTase、PTEF2-NpgA；
或包括PTEF1-Bik2、PGAL1-Bik3、PGAL1-Bik1、PPGK1-Bik6、PENO2-PPTase、PTEF2-NpgA；
或包括PGAL1-Bik2、PGAL1-Bik3、PGAL1-Bik1、PPGK1-Bik6、PENO2-PPTase、PTEF2-NpgA；
或包括PGAL1-Bik2-Bik3、PGAL1-Bik1、PPGK1-Bik6、PENO2-PPTase、PTEF2-NpgA。


8.根据权利要求7所述的表达模块，其特征在于，
包括顺序连接的：PTEF1-BIK2-TCYC1、PTPI1-BIK3-TACS2、PGAL1-BIK1-TACS1、PPGK1-BIK6-TZEO1、PENO2-PPT-TADH2、PTEF2-NPGA-THXT7；
包括顺序连接的：PTEF1-BIK2-TCYC1、PTPI1-BIK3-TACS2、PGAL1-BIK1-TACS1、PENO2-PPT-TADH2、PTEF2-NPGA-THXT7；
包括顺序连接的：PTEF1-BIK2-TCYC1、PTPI1-BIK3-TACS2、PRPS2-BIK1-TACS1、PPGK1-BIK6-TZEO1、PENO2-PPT-TADH2；
包括顺序连接的：PTEF1-BIK2-TCYC1、PTPI1-BIK3-TACS2、PRPS2-BIK1-TACS1、PPGK1-BIK6-TZEO1、PENO2-NPGA-TADH2；
包括顺序连接的：PGAL1-BIK2-BIK3-TCYC1、PGAL1-BIK1-TACS1、PPGK1-BIK6-TZEO1、PENO2-PPT-TADH2、PTEF2-NPGA-T...

【专利技术属性】
技术研发人员：元英进，赵猛，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津;12