pH敏感性脂质体及其制造方法技术

pH敏感性脂质体的制造方法包含：在加温条件下将二元醇、三元以上的多元醇和脂质体膜构成成分混合，制备在二元醇和多元醇的混合物中溶解脂质体膜构成成分而成的混合物溶液的工序；将该混合物溶液和预先加温的水性介质混合，并将它们均质化的工序；将均质化的水性介质进行骤冷，生成脂质体的工序；回收生成的脂质体的工序。利用本发明专利技术的方法，可使目前为止不稳定且难以制备的pH敏感性脂质体稳定化，并通过简便的方法制备pH敏感性脂质体。

PH sensitive liposome and its manufacturing method

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】pH敏感性脂质体及其制造方法本申请主张基于2017年9月4日在日本国提出申请的日本特愿2017-169356号和日本特愿2017-169359号的优先权，该申请记载的全部内容通过参照而直接援引于本说明书。另外，本申请中引用的全部专利、专利申请和文献中记载的全部内容通过参照而直接援引于本说明书。
本专利技术涉及pH敏感性脂质体及其制造方法，更详细而言，涉及在二元醇和三元以上的多元醇的混合物中添加脂质体的膜构成成分并溶解而得到的pH敏感性脂质体及其制造方法。
技术介绍
脂质体作为用于将生物学活性分子传递至细胞质内的载体受到关注。使用脂质体的药剂传递中的主要课题在于，由于通常的脂质体中膜融合性低，因此，在向细胞质内转移后，内含于脂质双分子膜的药剂的释放慢。为了解决该问题，开发一种pH敏感性脂质体，其在生理的条件下稳定，并且转移至细胞质内后，在酸性条件下变得不稳定。例如，报告了使用磷脂酰乙醇胺型磷脂的脂质体的磷脂酰乙醇胺型磷脂与pH响应而使集合结构转移，在酸性环境(pH5以下)释放内含物(例如参照非专利文献1)。另一方面，报告了使含有阳离子性亲水亲油性分子和阴离子性亲水亲油性分子和两性亲水亲油性分子的至少1种作为构成脂质的脂质体分散于水性介质中时，在酸性pH环境下，该脂质体具有正的Zeta电位，且在碱性pH环境下，该脂质体具有负的Zeta电位，该Zeta电位伴随该分散液的pH的增加，从正向负变化时，释放保持的目的物质(例如参照专利文献1)。作为脂质体的制法，有超声波法、挤出法(ExtrusionMethod)、French压力法(FrenchPress)、均质化法、乙醇注入法等各种方法，但在典型的脂质体的工业制造方法中，包括一边搅拌溶解于水混合性有机溶剂的磷脂等脂质成分一边注入添加于水溶液的方法。该方法可使用甲醇、乙醇、异丙醇、丁醇等醇类作为水混合性有机溶剂，但为了维持脂质的溶解状态，需要一边将脂质溶液加温，一边添加混合于水溶液；需要精密控制温度、添加速度或搅拌速度(参照专利文献2)。另外，报告了以特定的重量比含有卵磷脂、胆固醇和甘油三酯的脂质体，即使不进行均质高压处理等工序，也可以仅通过在常见的混合中需要的搅拌而形成(参照专利文献3)。现有技术文献专利文献专利文献1：日本专利第5588619号公报专利文献2：日本特表2006-517594号公报专利文献3：日本特开2017-66059号公报非专利文献1：DuzgunesN,StraubingerRM,BaldwinPA,FriendDS,PapahadjopoulosD.Proton-inducedfusionofoleicacid-phosphatidylethanolamineliposomes.Biochemistry.198524(13)：3091-3098.
技术实现思路
专利技术所要解决的问题但是，这样的pH敏感性脂质体通常不稳定，因此存在难以将水性介质中的Zeta电位成为零的pH值设定为所期望的范围，即难以在从酸性到碱性的广泛的范围内任意地设定脂质体的膜融合性；不能对应对pH敏感性脂质体具有的潜在用途的期待的问题。另外，由于pH敏感性脂质体与通常的脂质体相比不稳定，因此，其工业制造困难，谋求简便且稳定化的pH敏感性脂质体的制造方法。本专利技术是为了解决上述的课题而完成的专利技术，其目的在于，提供一种pH敏感性脂质体，其通过调整构成脂质体的特定的构成成分的含有比率，可在特定的范围内的任意的pH条件下使脂质体的Zeta电位从正向负转变。另外，其目的在于使目前为止不稳定且难以制备的pH敏感性脂质体稳定化，可通过简便的方法制备pH敏感性脂质体。用于解决问题的技术方案本专利技术的1个实施方式涉及的pH敏感性脂质体的特征在于，含有磷脂、类固醇类、阴离子性物质和两性离子性物质作为脂质体膜构成成分，相对于脂质体膜构成成分整体，含有阴离子性物质2.5～15质量％以及两性离子性物质5～20质量％。而且，分散于以下各pH条件的水性介质中时，脂质体的Zeta电位在pH5以下为正，在pH8以上为负，而且，在pH5～8之间伴随pH值的增加从正向负转变。本专利技术的其它实施方式涉及的pH敏感性脂质体的制造方法的特征在于，包含：在加温条件下将二元醇、三元以上的多元醇和脂质体膜构成成分混合，制备在所述二元醇和多元醇的混合物中溶解所述脂质体膜构成成分而成的混合物溶液的工序；将该混合物溶液和预先加温的水性介质混合，并将它们均质化的工序；将均质化的水性介质进行骤冷，生成脂质体的工序；回收生成的脂质体的工序。脂质体膜构成成分至少含有两性离子性物质，使脂质体分散于以下各pH条件下的水性介质中时，其Zeta电位在pH5以下为正，在pH8以上为负，而且，在pH5～8之间伴随pH值的增加从正向负转变。专利技术效果根据本专利技术，可提供一种pH敏感性脂质体，其通过调整构成脂质体的特定的构成成分的含有比率，可在广泛的范围的任意的pH条件下使脂质体的Zeta电位从正向负转变。另外，通过将二元醇、三元以上的多元醇和脂质体膜构成成分混合并溶解，与水性介质搅拌以及混合的简单操作，可制造稳定的pH敏感性脂质体。附图说明图1是本专利技术的一实施方式涉及的pH敏感性脂质体的制造方法的流程图。图2是本专利技术的其它实施方式涉及的pH敏感性脂质体的制造方法的流程图。图3是将实施例1～6中制造的脂质体分散于水性介质而测定的Zeta电位的pH曲线图。图4是将比较例1和2中制造的脂质体分散于水性介质而测定的Zeta电位的pH曲线图。具体实施方式以下，一边参照附图，一边按照以下顺序对本专利技术的优选的实施方式进行说明。1.pH敏感性脂质体的成分及组成2.pH敏感性脂质体的制造方法3.pH敏感性和其显现机制4.形状、用途或使用方法[pH敏感性脂质体的成分及组成](二元醇)在本实施方式中，作为溶解脂质体膜构成成分的二元醇，优选为1,2-烷二醇或1,3-烷二醇。作为1,2-烷二醇或1,3-烷二醇，可举出1,2-丙二醇、1,2-丁二醇、1,2-戊二醇、1,2-辛二醇、1,2-己二醇、1,2-癸二醇、1,3-丁二醇、1,3-丙二醇、丙二醇等。1,2-烷二醇或1,3-烷二醇可使用一种或并用两种以上。1,2-烷二醇或1,3-烷二醇优选为1,2-丙二醇和1,3-丁二醇。1,2-链烷二醇或1,3-链烷二醇的使用量只要能够溶解脂质体膜构成成分就没有特别限定，通过相对于脂质体膜构成成分的总质量使用10～50倍左右，优选为15～30倍左右，可使生成的pH敏感性脂质体稳定化。(多元醇)与二元醇一同溶解脂质体膜构成成分的多元醇为3元以上的多元醇，例如可举出海藻糖、蔗糖、山梨糖、松三糖、甘油、果糖、甘露糖、麦芽糖、乳糖、阿拉伯糖、木糖、核糖、鼠李糖、半乳糖、葡萄糖、甘露醇、木糖醇、赤藓醇、苏糖醇、山梨糖醇、棉子糖等。优选为山梨糖醇和甘油。它本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种pH敏感性脂质体，其特征在于，含有磷脂、类固醇类、阴离子性物质和两性离子性物质作为脂质体膜构成成分，/n所述脂质体相对于所述脂质体膜构成成分整体，含有所述阴离子性物质2.5～15质量％以及所述两性离子性物质5～20质量％，/n当使所述脂质体分散于以下各pH条件的水性介质中时，所述脂质体的Zeta电位在pH5以下为正，在pH8以上为负，而且在pH5～8之间伴随pH值的增加从正向负转变。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170904 JP 2017-169356;20170904 JP 2017-1693591.一种pH敏感性脂质体，其特征在于，含有磷脂、类固醇类、阴离子性物质和两性离子性物质作为脂质体膜构成成分，
所述脂质体相对于所述脂质体膜构成成分整体，含有所述阴离子性物质2.5～15质量％以及所述两性离子性物质5～20质量％，
当使所述脂质体分散于以下各pH条件的水性介质中时，所述脂质体的Zeta电位在pH5以下为正，在pH8以上为负，而且在pH5～8之间伴随pH值的增加从正向负转变。


2.根据权利要求1所述的pH敏感性脂质体，其中，
所述阴离子性物质和所述两性离子性物质的含有比率为1：1～1：3。


3.根据权利要求1或2所述的pH敏感性脂质体，其中，
所述阴离子性物质为常温下为固体的饱和脂肪酸。


4.根据权利要求1～3中任一项所述的pH敏感性脂质体，其中，
所述两性离子性物质为选自以下物质中的至少1种：包含月桂基甜菜碱、即月桂基二甲基氨基乙酸甜菜碱的N-烷基-N,N-二甲基氨基酸甜菜碱；包含椰油酰胺丙基甜菜碱、月桂酰胺丙基甜菜碱的脂肪酸酰胺烷基-N,N-二甲基氨基酸甜菜碱；包含椰油酰两性基乙酸钠、月桂酰两性基乙酸钠的咪唑啉型甜菜碱；包含烷基二甲基牛磺酸的烷基磺基甜菜碱；包含烷基二甲基氨基乙醇硫酸酯的硫酸型甜菜碱以及包含烷基二甲基氨基乙醇磷酸酯的磷酸型甜菜碱。


5.根据权利要求3所述的pH敏感性脂质体，其中，
所述常温下为固体的饱和脂肪酸为棕榈酸或硬脂酸。


6.pH敏感性脂质体的制造方法，其特征在于，包含：
在加温条件下将二元醇、三元以上的多元醇和脂质体膜构成成分混合，制备在所述二元醇和多元醇的混合物中溶解所述脂质体膜构成成分而得到的混合物溶液的工序；
将所述混合物溶液和预先加温的水性介质混合，并将它们均质化的工序；
将所述均质化的水性介质骤冷，生成脂质体的工序；
回收所述脂质体的工序；
所述脂质体膜构成成分至少含有两性离子性物质，
当使所述脂质体分散于以下各pH条件的水性介质中时，所述脂...

【专利技术属性】
技术研发人员：那波庆彦，
申请(专利权)人：一丸自然美建有限公司，
类型：发明
国别省市：日本;JP