本发明专利技术首次提供了一种特定的人JAK1突变基因，该突变基因是由于野生型JAK1基因发生c.[106282‑106290delcgccgcgac]缺失突变而形成的，其第106232‑106331位点的序列即突变处前后50bp的序列如SEQ ID NO：1所示。JAK1基因发生c.[106282‑106290delcgccgcgac]突变的男性结直肠癌患者其肝转移风险高，其可以做为结直肠癌肝转移的有效可靠分子标志物；本发明专利技术还提供了基于PCR扩增和Sanger测序的JAK1突变基因检测分析方法，这些可以简便有效应用到男性结直肠癌患者肝转移的解析中，有助于男性结直肠癌患者肝转移的早发现和早干预，也可以为结直肠癌肝转移的机理解析提供线索。
A deletion mutation gene of Jak1 and its application
【技术实现步骤摘要】
一种JAK1缺失突变基因及其应用
本专利技术涉及医学分子生物学领域，具体涉及一种第106282-106290位点发生c.[106282-106290delcgccgcgac]缺失突变的JAK1突变基因及其应用。
技术介绍
结直肠癌是中国人高发的癌种之一，其恶性程度高且易发生转移，具有很高的致死率。据WHO最新发布的《2018年全球癌症年报》显示，结直肠癌的发病率和死亡率均高居中国人常见癌症的第4位。临床上对于结直肠癌多采用以手术为主、放化疗为辅的综合治疗，但效果并不理想，其致死原因主要是根治术后的转移和复发。肝脏是结直肠癌血行转移的主要靶器官，结直肠癌肝转移是结直肠癌患者最主要的死亡原因：15%-25%的结直肠癌患者在确诊时即合并肝转移，另有15%-25%的患者会在结直肠癌根治术后发生肝转移，其中绝大多数（80%-90%）的肝转移灶无法获得根治性切除；而未经治疗的结直肠癌肝转移患者中位生存期只有6.9个月，肝转移灶无法切除患者的5年存活率小于5%。结直肠癌肝转移是结直肠癌治疗的重点和难点，关键在于如何及早发现肝转移，才能实现及早预防和治疗。研究发现，淋巴结转移情况、术前癌胚抗原水平和患者发病年龄这3个因素对结直肠癌患者是否发生肝转移影响最明显，具有提示肝转移风险的价值。然而这几项危险因素要么敏感性不足，要么特异性不够，要么时效性比较差，并不能从实质上有效而准确地预测结直肠癌患者的肝转移风险。癌症本质上是一种基因病，其发生发展都是由特定基因群变异所驱动的，具有特定的基因指征。因此必须从基因水平上进行探究才能揭示结直肠癌肝转移的机制，从中找出相应的分子标志物，从而预测或及早发现结直肠癌患者的肝转移，这对于及时采取必要的临床干预措施以切实提高结直肠癌患者的生存率具有重要的意义和价值，例如早发现就可以增大患者行肝转移灶根治性切除的机会。本专利技术研究时首先收集福建省内特定的结直肠癌家庭，对相关家庭成员进行全外显子组测序，通过分析比对首次发现了在男性结直肠癌肝转移患者中存在着JAK1基因的两种特定突变即c.[106282-106290delcgccgcgac]缺失突变和c.[238094-238095insTTAT]插入突变，进一步通过突变片段的PCR扩增和Sanger测序在男性结直肠癌患者人群中进行了验证。JAK1基因编码的JAK1(Januskinase1)激酶是蛋白酪氨酸激酶家族JAKs中的重要成员，而JAKs是许多细胞因子、生长因子及干扰素的重要信号传感器，涉及到多条从膜到核的重要信号通路（如JAK/STAT通路等）,广泛参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等过程，其特定突变将会导致细胞失控。本专利技术提供的JAK1突变基因尚未见报道，并且其对于男性结直肠癌患者肝转移的临床意义和价值尚未被揭示。
技术实现思路
本专利技术首次提供了特定的人JAK1突变基因，其可以做为结直肠癌肝转移的分子标志物，同时提供了基于PCR扩增和Sanger测序的JAK1突变基因检测分析方法，这些可以应用到男性结直肠癌患者肝转移的解析中,也可以为结直肠癌肝转移的机理解析提供线索。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案如下：本专利技术的目的（1）在于提供一种人JAK1突变基因，参照NCBI登录号为NG_023402.2的野生型JAK1基因序列，JAK1突变基因是由于野生型JAK1基因发生c.[106282-106290delcgccgcgac]突变而形成的，即野生型JAK1基因第106282-106290位点的cgccgcgac这9核苷酸短片段发生了缺失。JAK1突变基因突变处前后50bp的序列（含突变共100bp）即JAK1突变基因第106232-106331位点的序列如SEQIDNO：1所示，其余序列详见NCBI登录号为NG_023402.2的野生型JAK1基因参考序列，具体来说：JAK1突变基因前106281位点序列同野生型JAK1基因（NCBI登录号为NG_023402.2）相同位点序列一样；而JAK1突变基因从第106281+N（N为1-135234范围内包含1和135234的整数）位点起，其序列同野生型JAK1基因的第106290+N位点序列一样。JAK1基因发生c.[106282-106290delcgccgcgac]突变的男性结直肠癌患者肝转移风险高，因此该突变基因可以做为男性结直肠癌患者肝转移的分子标志物，被应用于构建男性结直肠癌患者肝转移分析的检测试剂盒和检测方法。本专利技术的目的（2）在于提供一种人JAK1突变基因，参照NCBI登录号为NG_023402.2的野生型JAK1基因序列，JAK1突变基因是由野生型JAK1基因发生c.[238094-238095insTTAT]突变而形成的，即野生型JAK1基因第238094-238095位点之间插入了TTAT这4核苷酸短片段。JAK1突变基因突变处前后50bp的序列即JAK1突变基因第238045-238148位点（含突变共104bp）的序列如SEQIDNO：2所示，其余序列详见NCBI登录号为NG_023402.2的野生型JAK1基因参考序列，具体来说：JAK1突变基因前238094位点序列同野生型JAK1基因（NCBI登录号为NG_023402.2）相同位点序列一样，JAK1突变基因第238095-238098位点序列为插入突变序列TTAT；而JAK1突变基因从第238098+N（N为1-3430范围内包含1和3430的整数）位点起，其序列同野生型JAK1基因的第238094+N位点序列一样。JAK1基因发生c.[238094-238095insTTAT]突变的男性结直肠癌患者肝转移风险高，因此该突变基因可以做为男性结直肠癌患者肝转移的分子标志物，被应用于构建男性结直肠癌患者肝转移分析的检测试剂盒和检测方法。本专利技术的目的（3）在于提供男性结直肠癌患者中特定JAK1突变基因的检测分析方法，该方法包括如下主要步骤：（1）提取男性结直肠癌患者样本DNA获取男性结直肠癌患者的癌灶组织或血液样本，癌灶组织可以是手术或活检穿刺获取的样本，血液样本可以是便于获取的外周静脉血，选用相应的试剂盒提取癌灶组织样本中的基因组DNA或血液样本中的细胞外游离DNA。（2）扩增JAK1基因突变所在片段以步骤（1）中提取的DNA为模板，对于JAK1基因的c.[106282-106290delcgccgcgac]突变片段，采用如SEQIDNO：3和SEQIDNO：4序列所示的PCR引物进行扩增，按照常规PCR扩增体系，扩增条件为：95℃预变性3min；94℃变性15s，52℃退火20s，72℃延伸30s，循环30次；72℃终延伸5min；对于JAK1基因的c.[238094-238095insTTAT]突变片段，采用如SEQIDNO：5和SEQIDNO：6序列所示的PCR引物进行扩增，按照常规PCR扩增体系，扩增条件为：95℃预变性3min；94℃变性15s，54℃退火20s，72℃延伸40s，循环30次；72℃终延伸5min；（3）JAK1突变基因本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种JAK1突变基因，其特征在于：参照NCBI登录号为NG_023402.2的野生型JAK1基因序列，JAK1突变基因是由于野生型JAK1基因发生c.[106282-106290delcgccgcgac]缺失突变而形成的；JAK1突变基因前106281位点序列同野生型JAK1基因相同位点序列一样；而JAK1突变基因从第106281+N位点起，其序列同野生型JAK1基因的第106290+N位点序列一样，N为1-135234范围内包含1和135234的整数；JAK1突变基因第106232-106331位点的序列即突变处前后50bp的序列如SEQ ID NO：1所示；JAK1基因发生c.[106282-106290delcgccgcgac]突变的男性结直肠癌患者其肝转移风险高。/n
【技术特征摘要】
1.一种JAK1突变基因，其特征在于：参照NCBI登录号为NG_023402.2的野生型JAK1基因序列，JAK1突变基因是由于野生型JAK1基因发生c.[106282-106290delcgccgcgac]缺失突变而形成的；JAK1突变基因前106281位点序列同野生型JAK1基因相同位点序列一样；而JAK1突变基因从第106281+N位点起，其序列同野生型JAK1基因的第106290+N位点序列一样，N为1-135234范围内包含1和135234的整数；JAK1突变基因第106232-106331位点的序列即突变处前后50bp的序列如SEQIDNO：1所示；JAK1基因发生c.[106282-106290delcgccgcgac]突变的男性结直肠癌患者其肝转移风险高。
2.如权利要求1所述的JAK1突变基因在构建男性结直肠癌患者肝转移分析的检测试剂盒和检测方法中的应用。
3.如权利要求1所述的JAK1突变基因的检测分析方法，用于男性结直肠癌患者中JAK1突变基因的检测，其特征在于：JAK1突变基因的检测方法包括如下...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄种山，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：福建晨欣科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35
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