本发明专利技术首次提供了一种特定的人JAK2突变基因，该突变基因是由于野生型JAK2基因发生c.[84709‑84714delctgcag]缺失突变而形成的，其第84659‑84758位点的序列即突变处前后50bp的序列如SEQ ID NO：2所示。JAK2基因发生c.[84709‑84714delctgcag]突变的结直肠癌患者其肺转移风险高，其可以做为结直肠癌肺转移的有效可靠分子标志物；本发明专利技术还提供了基于PCR扩增和Sanger测序的JAK2突变基因检测分析方法，这些可以简便有效应用到结直肠癌患者肺转移的解析中，有助于结直肠癌患者肺转移的早发现和早干预，也可以为结直肠癌肺转移的机理解析提供线索。
A JAK2 deletion mutation gene and its detection method
【技术实现步骤摘要】
一种JAK2缺失突变基因及其检测方法
本专利技术涉及医学分子生物学领域，具体涉及一种第84709-84714位点发生c.[84709-84714delctgcag]缺失突变的JAK2突变基因及其应用。
技术介绍
结直肠癌是中国人高发的癌种之一，其恶性程度高且易发生转移，具有很高的致死率。据WHO最新发布的《2018年全球癌症年报》显示，结直肠癌的发病率和死亡率均高居中国人常见癌症的第4位。临床上对于结直肠癌多采用以手术为主、放化疗为辅的综合治疗，但效果并不理想，其致死原因主要是根治术后的转移和复发。目前在结直肠癌患者的转移灶中，肺脏是十分常见的血行转移靶器官，其已经成为仅次于肝脏的第二常见的转移部位。据北京大学肿瘤医院1996年至2017年的回顾性资料显示，肺转移病例占所有转移性结直肠癌的32.9%，而初发肺转移的患者达24.5%。在初发肺转移患者中，单纯性肺转移占37.7%-44.5%，其中仅有21.1%-32.5%的患者可以接受肺转移灶的根治性切除手术治疗。结直肠癌肺转移的及早发现十分关键，基于此才能实现及早预防和治疗，主要是可以增大患者行肺转移灶根治性切除的机会以及针对性开展预防性治疗。由于结直肠癌肺转移的分子机制尚未得到解析，因此目前临床上尚无准确可靠的结直肠癌肺转移的预测或评估指标，一些临床特征以及血清学指标其灵敏性和特异性都不足，无法从实质上及早有效地解析结直肠癌患者的肺转移风险。癌症本质上是一种基因病，其发生发展都是由特定基因群变异所驱动的，具有特定的基因指征。因此必须从基因水平上进行探究才能揭示结直肠癌肺转移的机制，从中找出相应的分子标志物，从而预测或及早发现结直肠癌患者的肺转移，这对于及时采取必要的临床干预或治疗措施以切实提高结直肠癌患者的生存率具有重要的意义和价值。本专利技术研究时首先收集福建省内特定的结直肠癌家庭，对相关家庭成员进行全外显子组测序，通过分析比对首次发现了在结直肠癌肺转移患者中存在着JAK2基因的两种特定缺失突变即c.[41905-41909deltctga]突变和c.[84709-84714delctgcag]突变，进一步通过突变片段的PCR扩增和Sanger测序在结直肠癌患者人群中进行了验证。JAK2基因编码的JAK2(Januskinase2)激酶是蛋白酪氨酸激酶家族JAKs中的重要成员，而JAKs是许多细胞因子、生长因子及干扰素的重要信号传感器，涉及到多条从膜到核的重要信号通路（如JAK/STAT通路等）,广泛参与细胞的增殖、分化、凋亡以及免疫调节等过程，其特定突变将会导致细胞失控。本专利技术提供的JAK2缺失突变基因尚未见报道，并且其对于结直肠癌患者肺转移的临床意义和价值尚未被揭示。
技术实现思路
本专利技术首次提供了特定的人JAK2缺失突变基因，其可以做为结直肠癌肺转移的分子标志物，同时提供了基于PCR扩增和Sanger测序的JAK2缺失突变基因检测分析方法，这些可以应用到结直肠癌患者肺转移的解析中，也可以为结直肠癌肺转移的机理解析提供线索。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案如下：本专利技术的目的（1）在于提供一种人JAK2突变基因，参照NCBI登录号为NG_009904.1的野生型JAK2基因序列，JAK2突变基因是由于野生型JAK2基因发生c.[41905-41909deltctga]缺失突变而形成的，即野生型JAK2基因第41905-41909位点的tctga这5核苷酸短片段发生了缺失。JAK2突变基因突变处前后50bp的序列（含突变共100bp）即JAK2突变基因第41855-41954位点的序列如SEQIDNO：1所示，其余序列详见NCBI登录号为NG_009904.1的野生型JAK2基因参考序列，具体来说：JAK2突变基因前41904位点序列同野生型JAK2基因（NCBI登录号为NG_009904.1）相同位点序列一样；而JAK2突变基因从第41904+N（N为1-108035范围内包含1和108035的整数）位点起，其序列同野生型JAK2基因的第41909+N位点序列一样。JAK2基因发生c.[41905-41909deltctga]突变的结直肠癌患者肺转移风险高，因此该突变基因可以做为结直肠癌患者肺转移的分子标志物，被应用于构建结直肠癌患者肺转移分析的检测试剂盒和检测方法。本专利技术的目的（2）在于提供一种人JAK2突变基因，参照NCBI登录号为NG_009904.1的野生型JAK2基因序列，JAK2突变基因是由野生型JAK2基因发生c.[84709-84714delctgcag]突变而形成的，即野生型JAK2基因第84709-84714位点之间缺失了CTGCAG这6核苷酸短片段。JAK2突变基因突变处前后50bp的序列即JAK2突变基因第84659-84758位点（含突变共100bp）的序列如SEQIDNO：2所示，其余序列详见NCBI登录号为NG_009904.1的野生型JAK2基因参考序列，具体来说：JAK2突变基因前84708位点序列同野生型JAK2基因（NCBI登录号为NG_009904.1）相同位点序列一样；而JAK2突变基因从第84708+N（N为1-65231范围内包含1和65231的整数）位点起，其序列同野生型JAK2基因的第84714+N位点序列一样。JAK2基因发生c.[84709-84714delctgcag]突变的结直肠癌患者肺转移风险高，因此该突变基因可以做为结直肠癌患者肺转移的分子标志物，被应用于构建结直肠癌患者肺转移分析的检测试剂盒和检测方法。本专利技术的目的（3）在于提供结直肠癌患者中特定JAK2突变基因的检测分析方法，该方法包括如下主要步骤：（1）提取结直肠癌患者样本DNA获取结直肠癌患者的癌灶组织或血液样本，癌灶组织可以是手术或活检穿刺获取的样本，血液样本可以是便于获取的外周静脉血，选用相应的试剂盒提取癌灶组织样本中的基因组DNA或血液样本中的细胞外游离DNA。（2）扩增JAK2基因突变所在片段以步骤（1）中提取的DNA为模板，对于JAK2基因的c.[41905-41909deltctga]突变片段，采用如SEQIDNO：3和SEQIDNO：4序列所示的PCR引物进行扩增，按照常规PCR扩增体系，扩增条件为：95℃预变性3min；94℃变性15s，50℃退火20s，72℃延伸40s，循环30次；72℃终延伸5min；对于JAK2基因的c.[84709-84714delctgcag]突变片段，采用如SEQIDNO：5和SEQIDNO：6序列所示的PCR引物进行扩增，按照常规PCR扩增体系，扩增条件为：95℃预变性3min；94℃变性15s，52℃退火15s，72℃延伸35s，循环30次；72℃终延伸5min；（3）JAK2突变基因扩增片段测序分析将步骤（2）中扩增的JAK2基因突变片段送基因公司进行Sanger测序，参照NCBI登录号为NG_009904.1野生型JAK2基因参考序列分析样本JAK2基因的特定突变信息，以此应用于结直肠癌患者肺转移的分析中本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种JAK2突变基因，其特征在于：参照NCBI登录号为NG_009904.1的野生型JAK2基因序列，JAK2突变基因是由于野生型JAK2基因发生c.[84709-84714delctgcag]缺失突变而形成的；JAK2突变基因前84708位点序列同野生型JAK2基因相同位点序列一样；而JAK2突变基因从第84708+N位点起，其序列同野生型JAK2基因的第84714+N位点序列一样，N为1-65231范围内包含1和65231的整数；JAK2突变基因第84659-84758位点的序列即突变处前后50bp的序列如SEQ ID NO：2所示；JAK2基因发生c.[84709-84714delctgcag]突变的结直肠癌患者肺转移风险高。/n
【技术特征摘要】
1.一种JAK2突变基因，其特征在于：参照NCBI登录号为NG_009904.1的野生型JAK2基因序列，JAK2突变基因是由于野生型JAK2基因发生c.[84709-84714delctgcag]缺失突变而形成的；JAK2突变基因前84708位点序列同野生型JAK2基因相同位点序列一样；而JAK2突变基因从第84708+N位点起，其序列同野生型JAK2基因的第84714+N位点序列一样，N为1-65231范围内包含1和65231的整数；JAK2突变基因第84659-84758位点的序列即突变处前后50bp的序列如SEQIDNO：2所示；JAK2基因发生c.[84709-84714delctgcag]突变的结直肠癌患者肺转移风险高。
2.如权利要求1所述的JAK2突变基因的检测分析方法，用于结直肠癌患者中JAK2突变基因的检测，其特征在于：JAK2突变基因的检测方法包括如下主要步骤：
（1）提取结直肠癌患者样本DNA
获取结直肠癌患者的癌灶组织或血液样本，癌灶组织可以是手术或活检穿刺获取的样本...
【专利技术属性】
技术研发人员：黄种山，其他发明人请求不公开姓名，
申请(专利权)人：福建晨欣科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建;35
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