一种脂肪酶突变体及其在制备(S)-2-氯苯甘氨酸甲酯中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种脂肪酶突变体及其在制备(S)‑2‑氯苯甘氨酸甲酯中的应用，该脂肪酶突变体由SEQ ID No.2所示氨基酸序列第157位的谷氨酰胺突变为苯丙氨酸，第189位的异亮氨酸突变为赖氨酸，且第154位的缬氨酸突变为天冬氨酸而获得。本发明专利技术通过分子对接和定点饱和突变，筛选获得了可明显缩短不对称水解反应时间且对R型2‑氯苯甘氨酸甲酯方拆分效率高、选择性高的脂肪酶突变体，该突变体在反应12h后(S)‑2‑氯苯甘氨酸甲酯的得率达到了72.81％，ee值为95.24％，相对于野生型来说，实现了活性的提高和选择性的反转，同时缩短了反应时间。

A lipase mutant and its application in the preparation of (s) - 2-chlorophenylglycine methyl ester

【技术实现步骤摘要】
一种脂肪酶突变体及其在制备(S)-2-氯苯甘氨酸甲酯中的应用
本专利技术涉及酶基因改造
，具体涉及一种脂肪酶突变体及其在拆分(R,S)-2-氯苯甘氨酸甲酯制备单一对映体(S)-2-氯苯甘氨酸甲酯中的应用。
技术介绍
南极假丝酵母(Candidaantarctica)是在南极洲分离得到的一种酵母菌，该菌株可以合成出CALA和CALB两种不同的脂肪酶。早在1994年之前，人们就成功的分离出了这两种脂肪酶，并对其氨基酸序列和三维结构进行了研究，发现南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)总共具有317个氨基酸，分子量为33kDa。到目前为止，CALB被研究人员大量的在米曲霉、毕赤酵母、酿酒酵母和大肠杆菌中进行克隆表达，成为了商业上应用较为广泛的一种酶。但是，野生型的CALB仍然具有一定的缺陷，如热稳定性较差和产量较低等，对CALB进行修饰和改造使其具有更加良好的性质是较为热门的一个研究。2-氯苯甘氨酸甲酯(2-Chlorophenylglycinemethylester)是一种具有生物活性的非天然的氨基酸酯，由2-苯甘氨酸与甲醇本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种脂肪酶突变体，其特征在于，所述脂肪酶突变体由SEQ ID No.2所示氨基酸序列第157位的谷氨酰胺突变为苯丙氨酸，第189位的异亮氨酸突变为赖氨酸，且第154位的缬氨酸突变为天冬氨酸而获得。/n

【技术特征摘要】
1.一种脂肪酶突变体，其特征在于，所述脂肪酶突变体由SEQIDNo.2所示氨基酸序列第157位的谷氨酰胺突变为苯丙氨酸，第189位的异亮氨酸突变为赖氨酸，且第154位的缬氨酸突变为天冬氨酸而获得。


2.一种如权利要求1所述的脂肪酶突变体的编码基因。


3.一种包含权利要求2所述编码基因的重组载体。


4.一种包含权利要求2所述编码基因的基因工程菌。


5.如权利要求1所述的脂肪酶突变体在拆分(R,S)-2-氯苯甘氨酸甲酯制备单一对映体(S)-2-氯苯甘氨酸甲酯中的应用。


6.如权利要求4所述的基因工程菌在拆分(R,S)-2-氯苯甘氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：王亚军，班善赟，程峰，翁春跃，郑裕国，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：浙江;33