抗CLDN18．2抗体的药物偶联体及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种抗CLDN18．2抗体的药物偶联体(ADC)，其结构如Ab‑[(L

Drug coupling of anti cldn18.2 antibody and its preparation and Application

【技术实现步骤摘要】
抗CLDN18.2抗体的药物偶联体及其制备方法和用途
本专利技术涉及生物医药领域，尤其涉及一种抗CLDN18.2抗体的药物偶联体及其制备方法和用途。
技术介绍
癌症是人类健康的巨大威胁，也是疾病领域导致死亡的重要原因之一。癌症治疗在经历手术，化疗，靶向药物，肿瘤免疫治疗，联合治疗等各阶段的发展，近年已经取得了巨大成就。在众多的癌症患者中，肺癌、胃癌、胰腺癌、食道癌和卵巢癌等癌症患者的治疗手段仍然高度未满足。针对这些肿瘤的治疗手段，包括大分子靶向药物，比如新的单克抗体，以及这些单克隆抗体和已有的肿瘤免疫治疗手段，包括免疫检查点抑制剂PD-1、PD-L1抗体联合治疗，为临床巨大的未满足的治疗需求提供了新的可能和选择。细胞连接密蛋白(Claudin或CLDN)在人、鼠等物种都有表达，是细胞间层密封关联蛋白，在控制对细胞层间离子流、维持细胞极性和细胞间信号转递具有重要作用。该家族蛋白早在1998年已经被研究报道(FuruseM，FujitaKetal.JCellBiol.1998，141：1539-50；TsukitaSandFuruseM，2000.J.CellBiol.149，13-16)。CLND是巨大的蛋白家族，在细胞连接中发挥重要作用，和细胞迁移、病变和肿瘤浸润转移相关。CLDN家族蛋白已经发现的有29种之多，CLDN18就是其中之一。CLDN18有两个同源分子，分别称为密蛋白18.1(CLDN18.1)和密蛋白18.2(CLDN18.2)。人密蛋白18.1(hCLDN18.1)和人密蛋白18.2(hCLDN18.2)高度同源，氨基酸同源性高达92％。CLDN在不同组织中表达各有不同，hCLDN18.1在正常组织有表达，而hCLDN18.2则在肿瘤组织表达并和肿瘤形成有关，特别是与胃癌相关(SanadaY.etal.Down-regulationoftheclaudin-18gene，identifiedthroughserialanalysisofgeneexpressiondataanalysis，ingastriccancerwithanintestinalphenotype.JPathol.2006：208(5)，633-42)。CLDN18.2在正常组织表达非常有限，仅见于胃黏膜分化上皮细胞，但在胃癌包括转移胃癌组织有特别的高表达(SahinU.etal.Claudin-18splicevariant2isapan-cancertargetsuitablefortherapeuticantibodydelveopment.ClinCancerRes.2008；14(23)：7642-34)。进一步发现，CLDN18.2在不同癌症患者组织都有表达，包括大约70％的胃癌、50％的胰腺癌、30％的食道癌、25％的肺癌和卵巢癌等。因此，CLDN18.2早已经成为理想的肿瘤患者标记物和抗肿瘤药物开发靶点，特别是抗CLDN18.2抗体开发用于肿瘤治疗，满足患者，特别是胃癌病人、胰腺癌，食道癌、肺癌、卵巢癌等病人需求是非常有希望的手段之一。但因为靶点的特殊性，开发针对hCLDN18.2治疗性抗体非常困难。人CLDN18.2蛋白全长261个氨基酸，见NCBI公开序列NP_001002026.1claudin-18isoform2，其中1-23为信号肽。CLDN18.2蛋白是一个跨膜蛋白，有两个膜外区域分别为信号肽后面大约55个氨基酸的胞外区1(Extracellularloop1，ECL1)和23个氨基酸ECL2。这一结构和人CLDN18.1非常相似，而且人CLDN18.2和人CLDN18.1的ECL2区域则完全相同。因而针对人CLDN18.2蛋白靶点抗体的开发，需要寻找针对人CLDN18.2蛋白的ECL1区域的抗体，或者寻找针对人CLDN18.2膜蛋白空间结构的抗体。这使得这方面的工作变得更加困难。此外，针对人CLDN18.2膜蛋白的抗体发挥其功效至少包括诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长，通过和病人免疫细胞的效应作用，包括抗体依赖细胞毒性(ADCC)，和补体依赖细胞毒性(CDC)效应细胞介导的杀伤肿瘤细胞作用。而要寻找这样功能的抗体会更加困难。目前针对人CLDN18.2抗体研究只有IMAB362抗体(参见WO2014/146672)在临床试验阶段。IMAB362是针对人CLDN18.2的抗体，是鼠源嵌合抗体，存在免疫原性风险。且其在细胞学实验中被证明无法内吞，因此治疗效果极为有限，这在本专利技术的肿瘤模型药效评价中也得到了验证。抗体药物偶联体(antibodydrugconjugates，ADC)由抗体(靶向)、接头和小分子药物三部分组成。抗体或者抗体片段通过稳定的化学接头化合物与具有生物活性的细胞毒素相连，充分利用了抗体对肿瘤细胞特异或高表达抗原结合的特异性和细胞毒素的高效性，避免对正常细胞的毒副作用。这意味着，与以往传统的化疗药物相比，抗体药物偶联物能精准地结合肿瘤细胞并降低将对正常细胞的影响。然而，针对CLDN18.2靶点目前还没有在临床上开发出ADC药物。因此，本领域缺乏有效的针对人CLDN18.2蛋白的抗体的药物偶联体，特别是人源化抗人CLDN18.2抗体的药物偶联体，从而减少治疗中潜在的免疫原性，并且也需要活性更好，包括结合活性、效应细胞活性、肿瘤杀伤活性和药效等方面性能更好的抗体的药物偶联体，以满足本领域病人治疗及治疗相关需求。
技术实现思路
为克服本领域缺乏针对人CLDN18.2蛋白的抗体的药物偶联体的缺陷，本专利技术提供一种抗CLDN18.2抗体的药物偶联体及其制备方法和用途。本专利技术提供一种和人CLDN18.2蛋白(hCLDN18.2蛋白)特异性结合的CLDN18.2抗体的药物偶联体，其中所述抗体的药物偶联体的结构如下式I所示：Ab-[(L2)n-L1–D]y式I其中，D为具有细胞毒性的小分子药物，L1和L2分别连接所述药物和所述抗体；n为0或1；y表示偶联于Ab的D的平均数，且0<y≤10，优选2≤y≤7；更优选3≤y≤6；最优选4.4或4.8；所述Ab为一种能够和人细胞连接密蛋白18.2特异性结合的抗体，其包含轻链可变区(VL)和/或重链可变区(VH)，在所述轻链可变区和/或重链可变区中，所述抗CLDN18.2抗体相应地包含至少1个选自以下的互补决定区(CDR)序列或其突变序列：对于轻链可变区(VL)：如SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:22、SEQIDNO:23或SEQIDNO:71或SEQIDNO:74所示的VLCDR1氨基酸序列；SEQIDNO:13或SEQIDNO:24所示的VLCDR2氨基酸序列；SEQIDNO:14或SEQIDNO:25所示的VLCDR3氨基酸序列；对于重链可变区(VH)：SEQIDNO:15、SEQIDNO:18、SEQIDNO:20或SEQIDNO:26所示的VHCDR1氨基酸序列；SEQIDNO:16、SEQIDNO:19、SEQIDNO:21或SEQIDNO本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗CLDN18.2抗体的药物偶联体(ADC)，其结构如下式I所示：/nAb-[(L

【技术特征摘要】
1.一种抗CLDN18.2抗体的药物偶联体(ADC)，其结构如下式I所示：
Ab-[(L2)n-L1–D]y式I
其中，D为具有细胞毒性的小分子药物，L1和L2分别连接所述药物和所述抗体；n为0或1；y表示偶联于Ab的D的平均数，且0<y≤10，优选2≤y≤7；更优选3≤y≤6；最优选4.4或4.8；
所述Ab为一种能够和人CLDN18.2特异性结合的抗体，其包含轻链可变区(VL)和/或重链可变区(VH)，在所述轻链可变区和/或重链可变区中，所述抗CLDN18.2抗体相应地包含至少1个选自以下的互补决定区(CDR)序列或其突变序列：
如SEQIDNO:11、SEQIDNO:12、SEQIDNO:71或SEQIDNO:74所示的VLCDR1氨基酸序列；
如SEQIDNO:13所示的VLCDR2氨基酸序列；
如SEQIDNO:14所示的VLCDR3氨基酸序列；
如SEQIDNO:15所示的VHCDR1氨基酸序列；
如SEQIDNO:16所示的VHCDR2氨基酸序列；
如SEQIDNO:17所示的VHCDR3氨基酸序列，所述突变保持或改善了所述抗体与CLDN18.2的结合。


2.如权利要求1所述的抗CLDN18.2抗体的药物偶联体，其特征在于，所述小分子药物为选自毒素、化疗剂、抗生素、放射性同位素和核溶酶的细胞毒剂；优选地，所述小分子药物选自以下组：单甲基澳瑞他汀(monomethylauristatin)、美登素(maytansine)类生物碱、喜树碱类生物碱、加利车霉素、多柔比星(阿霉素)、多卡霉素(duocarmycin)，或其组合；更优选地，所述单甲基澳瑞他汀为单甲基澳瑞他汀E(MMAE)或单甲基澳瑞他汀F(MMAF)，所述美登素类为N2'-脱乙酰基-N2'-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素(DM1)，N2'-脱乙酰基-N2'-(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(DM3)和N2'-脱乙酰基-N2'-(4-巯基-4-甲基-1-氧代戊基)-美登素(DM4)。


3.如权利要求1或2所述的抗CLDN18.2抗体的药物偶联体，其特征在于，所述L1选自可切割接头、不可切割接头、亲水接头、预先带电荷的接头和基于二羧酸的接头；优选地，所述接头选自N-琥珀酰亚胺基4-(2-吡啶基二硫代)戊酸酯(SPP)、N-琥珀酰亚胺基(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸酯(SIAB)、N-琥珀酰亚胺基4-(马来酰亚胺甲基)环己烷羧酸酯(SMCC)、6-马来酰亚氨基己酰基(MC)、马来酰亚氨基丙酰基(MP)、缬氨酸-瓜氨酸(VC)、丙氨酸-苯丙氨酸(ala-phe)、对氨基苄氧羰基(PAB)和MC-VC-PAB。


4.如权利要求1-3任一项所述的抗CLDN18.2抗体的药物偶联体，其特征在于，所述L2为以下式II所示的化合物：



其中，X1选自氢原子、卤素、羟基、氰基、烷基、烷氧基和环烷基；
X2选自烷基、环烷基和杂环基；
m为0-5；S为硫原子；
优选地，当X1为氢原子、X2为烷基、m为1时，式II所示的化合物为硫代乙酸S-(3-羰基丙基)酯。


5.如权利要求1-4任一项所述的抗CLDN18.2抗体的药物偶联体，其特征在于，所述小分子药物为DM1，所述接头L1为SMCC，n为0，由此形成如下式III所示的抗体的药物偶联体：



或，所述小分子药物为MMAF，所述接头L1为MC-VC-PAB，L2为硫代乙酸S-(3-羰基丙基)酯，n为1，由此形成如下式IV所示的抗体的药物偶联体：





6.如权利要求1-5任一项所述的抗CLDN18.2抗体的药物偶联体，其特征在于，所述抗CLDN18.2抗体包含轻链可变区(VL)和/或重链可变区(VH)；
所述VL包含以下氨基酸序列或其突变序列：
如SEQIDNO:11所示的VLCDR1、SEQIDNO:13所示的VLCDR2和SEQIDNO:14所示的VLCDR3；
如SEQIDNO:12所示的VLCDR1、SEQIDNO:13所示的VLCDR2和SEQIDNO:14所示的VLCDR3；
如SEQIDNO:71所示的VLCDR1、SEQIDNO:13所示的VLCDR2和SEQIDNO:14所示的VLCDR3；或
如SEQIDNO:74所示的VLCDR1、SEQIDNO:13所示的VLCDR2和SEQIDNO:14所示的VLCDR3；
所述VH包含以下氨基酸序列或其突变序列：
如SEQIDNO:15所示的VHCDR1、SEQIDNO:16所示的VHCDR2和SEQIDNO:17所示的VHCDR3。


7.如权利要求6所述的抗CLDN18.2抗体的药物偶联体，其特征在于，所述抗CLDN18.2抗体包含VL和VH：
所述VL包含SEQIDNO:11所示的VLCDR1、SEQIDNO:13所示的VLCDR2和SEQIDNO:14所示的VLCDR3的氨基酸序列或其突变序列；所述VH包含SEQIDNO:15所示的VHCDR1、SEQIDNO:16所示的VHCDR2和SEQIDNO:17所示的VHCDR3的氨基酸序列或其突变序列；
所述VL包含SEQIDNO:12所示的VLCDR1、SEQIDNO:13所示的VLCDR2和SEQIDNO:14所示的VLCDR3的氨基酸序列或其突变序列；所述VH包含SEQIDNO:15所示的VHCDR1、SEQIDNO:16所示的VHCDR2和SEQIDNO:17所示的VHCDR3的氨基酸序列或其突变序列；
所述VL包含SEQIDNO:71所示的VLCDR1、SEQIDNO:13所示的VLCDR2和SEQIDNO:14所示的VLCDR3的氨基酸序列或其突变序列；所述VH包含SEQIDNO:15所示的VHCDR1、SEQIDNO:16所示的VHCDR2和SEQIDNO:17所示的VHCDR3的氨基酸序列或其突变序列；
所述VL包含SEQIDNO:74所示的VLCDR1、SEQIDNO:13所示的VLCDR2和SEQIDNO:14所示的VLCDR3的氨基酸序列或其突变序列；所述VH包含SEQIDNO:15所示的VHCDR1、SEQIDNO:16所示的VHCDR2和SEQIDNO:17所示的VHCDR3的氨基酸序列或其突变序列；
所述VL包含SEQIDNO:11所示的VLCDR1、SEQIDNO:13所示的VLCDR2和SEQIDNO:14所示的VLCDR3的氨基酸序列或其突变序列；所述VH包含SEQIDNO:18所示的VHCDR1、SEQIDNO:16所示的VHCDR2和SEQIDNO:17所示的VHCDR3的氨基酸序列或其突变序列；
所述VL包含SEQIDNO:12所示的VLCDR1、SEQIDNO:13所示的VLCDR2和SEQIDNO:14所示的VLCDR3的氨基酸序列或其突变序列；所述VH包含SEQIDNO:18所示的VHCDR1、SEQIDNO:16所示的VHCDR2和SEQIDNO:17所示的VHCDR3的氨基酸序列或其突变序列；
所述VL包含SEQIDNO:71所示的VLCDR1、SEQIDNO:13所示的VLCDR2和SEQIDNO:14所示的VLCDR3的氨基酸序列或其突变序列；所述VH包含SEQIDNO:18所示的VHCDR1、SEQIDNO:16所示的VHCDR2和SEQIDNO:17所示的VHCDR3的氨基酸序列或其突变序列；或
所述VL包含SEQIDNO:74所示的VLCDR1、SEQIDNO:13所示的VLCDR2和SEQIDNO:14所示的VLCDR3的氨基酸序列或其突变序列；所述VH包含SEQIDNO:18所示的VHCDR1、SEQIDNO:16所示的VHCDR2和SEQIDNO:17所示的VHCDR3的氨基酸序列或其突变序列。


8.如权利要求1-7任一项所述的抗CLDN18.2抗体的药物偶联体，其特征在于，所述抗CLDN18.2抗体为鼠源抗体；
优选地，所述鼠源抗体的轻链可变区氨基酸序列为如SEQIDNO:7所示的氨基酸序列或其突变序列；和/或，所述鼠源抗体的重链可变区氨基酸序列为如SEQIDNO:8所示的氨基酸序列或其突变序列。


9.如权利要求8所述的抗CLDN18.2抗体的药物偶...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘佳建，
申请(专利权)人：上海健信生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31