一种利用红细胞制备的靶向性的囊泡药物制造技术

本发明专利技术公开了一种利用红细胞制备的靶向性的囊泡药物，所述囊泡药物，以成熟红细胞的细胞空壳包裹有：不含有遗传物质的待包裹的细胞的内容物、或药物的一种或多种。本发明专利技术利用红细胞进行细胞制备的靶向性的囊泡药物，包裹去除了核酸所需细胞的生物活性物质，进行递送，从而避免了细胞囊泡中含有的遗传物质，可能出现的导致使用者产生基因重组、基因突变等风险，具有更加安全的特点。同时所述囊泡药物能够进行靶向递送，以提高治疗效果；可以对细胞囊泡进行靶向修饰，可以使药物准确到底病症部位，提高治疗效果、降低药物副作用。因此该方法可以大规模生产可用于安全性更高、治疗效果更好的细胞囊泡靶向载体及药物。

A kind of targeted vesicle drug prepared by red blood cells

【技术实现步骤摘要】
一种利用红细胞制备的靶向性的囊泡药物
本专利技术涉及生物
，更具体地，涉及一种利用红细胞制备的靶向性的囊泡药物。
技术介绍
细胞囊泡，是由细胞分泌出的小囊泡，大小不等，直径分布范围50～1000nm，细胞囊泡分为多种类型，由不同的机制产生，包括外泌体、微囊泡等。其中，外泌体是一类直径分布在50～200nm的小囊泡，绝大多数的细胞都会分泌出这类囊泡。在以往的认知中，细胞囊泡一直以来被认为是细胞将代谢废物排出细胞的途径，并不具备重要的生理功能。然而随着科学的不断进步，细胞囊泡的运输机制被逐渐阐明，认为其是一类非常重要的在细胞间传递信号的囊泡，其中携带丰富的miRNA、mRNA、DNA、蛋白质、脂类等成分，细胞囊泡可以将这些成分从一个细胞传递到另一个细胞，并被受体细胞有效的利用。虽然至今还有很多未知的机理，但细胞囊泡,尤其是外泌体的运输调控已经被证明具有非常重要的生理功能。外泌体可以在不同细胞之间传递化学物质的功能也已逐步阐明。正是因为外泌体能够在不同细胞间传递化学物质的功能，以及其纳米级别的体积，非常有利于细胞的吸收，因此掀起了以外泌体作为药物或药物载体的研究热潮。(1)外泌体本身可作为药物，如来自干细胞的外泌体具有促进损伤组织修复再生的功能，来自免疫细胞的外泌体具有调节免疫应答的功能。因此外泌体在一定程度上可代替细胞治疗的功能，而且相比细胞治疗具有更好的安全性：外泌体治疗不会存在细胞治疗中潜在的成瘤风险；在一定情况下可以使用异体来源的外泌体，不必完全需要自体细胞供给，有利于外泌体产品的商品化生产；外泌体比细胞更加便于保存和运输。(2)外泌体可以作为药物载体，进行多种药物的运输。与纳米药物载体、脂类药物载体相比，外泌体具有非常明显的优势。1.外泌体免疫原性小，不会引起强烈的免疫反应；2.与常规纳米药物载体相比，外泌体极易被细胞吸收，具有很高的药物传递效率；3.外泌体被细胞吸收后可以逃避溶酶体途径，能够有效释放药物，而常规纳米药物载体进入细胞后，通常会进入溶酶体途径，被溶酶体降解，导致药物无法发挥治疗效果。因为上述优点，外泌体具备了成为优良药物载体的潜力。然而，外泌体作为药物或药物载体载体，仍有一些问题急待克服，最主要的问题就是外泌体的产量很低。在通常情况下，5×109个细胞产生的外泌体仅够一个体重为70kg的患者一次的用量。如需要获得商品化的外泌体，将需要进行大量的细胞培养，消耗大量的时间，从而产生高昂的生产成本，其次有些细胞并不能够在体外进行大量扩增，势必限制其外泌体的大量获取。为了解决外泌体产率的问题，W.Jo、J.Park等提出了一个将细胞通过一系列的小孔后会产生大小均匀的细胞囊泡的方法，该方法获得的细胞囊泡数量相比外泌体的产量提高了近100倍，同时该方法获得的细胞囊泡同样容易进入其他细胞，具有药物传递功能。因此，该方法是进行细胞囊泡规模化生产的优良方法。但是，用该方法获得的细胞囊泡，虽然产量得到提高，但是细胞通过挤压后，细胞的内含物都会被包裹在细胞囊泡中，特别是DNA等遗传物质也会被大量的包裹进细胞囊泡之中。当囊泡被其他受体细胞吸收后，其中大量存在的DNA就会有引起使用者基因组发生重组或突变的风险。因此，去除细胞囊泡载体中的DNA，则能够满足产量和安全两方面的需求，获得高产量同时无DNA更加安全的囊泡载体或囊泡药物。为了实现该目标，红细胞因其不含基因组DNA的特点，就成为了我们的一个重要工具。红细胞也是一类经过了长期持续研究的药物载体，其优势主要有1.成熟的红细胞无细胞核，结构简单，生物相容性良好，能自然降解不产生毒性物质；2.红细胞是人体血液中含量最多的一种细胞，易于获取；3.渗透压的改变可以使多肽、蛋白质、酶、核酸及多种化合物进入细胞，便于药物装载；4.具有天然的靶向性，红细胞在血液循环中停留时间较长，并能迅速聚集到肝、脾等器官，具有治疗网状内皮系统疾病的潜能；5.红细胞膜表面蛋白能使红细胞有效逃逸免疫系统的清除作用；6.可实现药物的缓慢释放，药物的治疗浓度可维持3～4周时间；7.血型相同的红细胞即可供异体患者使用，避免自体细胞治疗的繁琐步骤。但是红细胞作为药物载体，体积略大，向病灶内渗透能力较差；易富集于肝、脾，对其他位置的病灶不能有效给药，都严重的制约了其作为药用载体的应用。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种利用红细胞制备的靶向性的囊泡药物，该囊泡药物可避免由于遗传物质的存在导致的基因组重组、突变等风险，以提供一种更加安全的细胞囊泡作为药物载体，并通过特有的十字架性核酸分子对细胞囊泡进行靶向修饰，从而获得具备优良靶向功能的囊泡药物。本专利技术的第一个目的是提供一种利用红细胞制备的囊泡药物。本专利技术的第二个目的是提供一种利用红细胞制备的靶向性的囊泡药物的制备方法。为了实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案予以实现的：本专利技术通过获得成熟的无核红细胞，通过细胞处理，将细胞内含物释放出来，得到红细胞空壳，同时将所需细胞经过细胞破碎后去除DNA组分，用红细胞将其包裹，通过一系列操作获得微小的红细胞囊泡，再通过靶向修饰获得无DNA的靶向性的囊泡药物。也可将红细胞囊泡视为靶向药物载体，同时向其中加入多种类型药物或单独加入药物，作为靶向药物载体，药物包括化学药物、蛋白药物、核酸药物、天然药物等。本专利技术获得的无DNA细胞靶向囊泡，具有更安全、产量高、治疗效果好、具有靶向性等特点。因此，本专利技术要求保护一种利用红细胞制备的囊泡药物，所述囊泡药物，粒径大小为50～300nm，其以成熟红细胞的细胞空壳包裹以下成分中的一种：(1)不含有遗传物质的待包裹的细胞的内容物；或(2)不含有遗传物质的待包裹的细胞的内容物和药物的混合物；或(3)药物。优选地，所述遗传物质为DNA或RNA中的一种或两种。优选地，所述囊泡表面修饰有十字架结构的核酸物质，所示十字架结构的核酸物质一端连接有脂溶性分子插入细胞囊泡，另一端连接有针对靶点的靶向分子。优选地，所述待包裹的细胞包括但不限于干细胞，或免疫细胞等类型细胞。更优选地，所述干细胞包括但不限于以下的一种或几种：胚胎干细胞、心肌干细胞、肝干细胞、神经干细胞、诱导性多能干细胞、间充质干细胞等更优选地，所说免疫细胞包括但不限于以下的一种或几种：NK细胞、CIK细胞、DC细胞、T细胞等。优选地，所述药物包括但不限于：蛋白质、多肽、核酸、细胞因子、抗体、化合物等；或者为已经装载有药物的纳米颗粒，如脂质体等纳米颗粒。优选地，所述红细胞的细胞空壳包裹的成分为蛋白。优选地，所述红细胞的细胞空壳包裹的成分为不含有DNA的NK细胞的内容物。优选地，所述红细胞的细胞空壳包裹的成分为阿霉素，且所述十字架结构的核酸物质由DNA序列1和DNA序列1组成：DNA序列1的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示，其3’端连接有胆固醇，DNA序列2的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示，其3’端连接有CEA(carcin本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种利用红细胞制备的囊泡药物，其特征在于，所述囊泡药物，粒径大小为50～300nm，其以成熟红细胞的细胞空壳包裹以下成分中的一种：/n(1)不含有遗传物质的待包裹的细胞的内容物；/n或(2)不含有遗传物质的待包裹的细胞的内容物和药物的混合物；/n或(3)药物。/n

【技术特征摘要】
1.一种利用红细胞制备的囊泡药物，其特征在于，所述囊泡药物，粒径大小为50～300nm，其以成熟红细胞的细胞空壳包裹以下成分中的一种：
(1)不含有遗传物质的待包裹的细胞的内容物；
或(2)不含有遗传物质的待包裹的细胞的内容物和药物的混合物；
或(3)药物。


2.根据权利要求1所述的囊泡药物，其特征在于，所述囊泡表面修饰有十字架结构的核酸物质，所示十字架结构的核酸物质一端连接有脂溶性分子插入细胞囊泡，另一端连接有针对靶点的靶向分子。


3.根据权利要求1所述的囊泡药物，其特征在于，所述红细胞的细胞空壳包裹的成分为蛋白。


4.根据权利要求1所述的囊泡药物，其特征在于，所述红细胞的细胞空壳包裹的成分为不含有DNA的NK细胞的内容物。


5.根据权利要求2所述的囊泡药物，其特征在于，所述红细胞的细胞空壳包裹的成分为阿霉素，且所述十字架结构的核酸物质由DNA序列1和DNA序列1组成：
DNA序列1的核苷酸序列如SEQIDNO：1所示，其3’端连接有胆固醇，
DNA序列2的核苷酸序列如SEQIDNO：2所示，其3’端连接有CEA核酸适配体。


6.根据权利要求5所示的囊泡药物，其特征在于，CEA核酸适配体的核苷酸序列如SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈瑞，章成，陈杰，
申请(专利权)人：深圳百纳心致生命科学有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44