广泛中和的抗流感单克隆抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及广泛中和的抗流感单克隆抗体或其抗原结合片段。本发明专利技术进一步涉及分离的抗体或其抗原结合片段的治疗用途。

Widely neutralized anti influenza monoclonal antibody and its application

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】广泛中和的抗流感单克隆抗体及其用途相关申请的交叉引用本申请要求2017年5月15日提交的美国临时申请62/506,256的优先权，该申请的公开内容通过引用并入本文。政府关注本申请是在国立卫生研究院授予的AI116285号政府支持下做出的。政府对本申请享有一定权利。专利
本专利技术涉及广泛中和的抗流感单克隆抗体(mAbs)或其抗原结合片段。本专利技术进一步涉及所述抗体或其抗原结合片段的治疗用途。专利技术背景流行性感冒(通常被称为“流感”)是一种由流感病毒引起的传染病。有四种类型的流感病毒：甲型、乙型、丙型和丁型。人甲型和乙型流感病毒引起疾病的季节性流行。预防流感的第一步也是最重要的一部是每年接受流感疫苗接种。尽管获得许可的流感疫苗已有70多年，但流感感染仍是主要的公共卫生问题。在美国，每年流感导致～15,000例死亡和～300,000例住院治疗，全球每年有～300至500万严重病例和200,000至500,000例死亡(GirardMPetal.,2005.Vaccine23:5708-5724；NogalesAetal.,2016.IntJMolSci18；DushoffJetal.,2006.AmJEpidemiol163:181-187；DoshiP.2008.AmJPublicHealth98:939-945；和ThompsonWWetal.,2009.AmJPublicHealth99Suppl2:S225-230)。此外，由于医院成本或者上课日或工作日缺勤导致的美国的经济负担平均每年超过800亿美元(MolinariNAetal.,2007.Vaccine25:5086-5096；GaspariniRetal.,2012.HumVaccinImmunother8:21-28；和KeechMetal.,2008.Pharmacoeconomics26:911-924)。一项关键弱点是需要每年选择季节性流感疫苗组成以充分匹配在即将到来的季节期间预计最为突出的病毒株。如果季节性疫苗与循环病毒株不匹配，则疫苗可能无效。由于流感具有抗原漂移和转变的倾向，以及其引起主要病毒株特异性抗体的倾向，人类仍然容易受到可能会导致有限免疫力或无免疫力的大范围流行新病毒株潮的影响，就像1918年的情况那样——当时“西班牙流感”杀死了～3000-5000万人(TaubenbergerJKetal.,2006.EmergInfectDis12:15-22)。甲型流感病毒(IAV)有18个HA亚型，它们进一步分为两个系统发育组：1组(H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H12、H13、H16、H17和H18亚型)和2组(H3、H4、H7、H10、H14和H15亚型)。季节性疫苗接种包括甲型流感病毒H1、H3和乙型流感病毒。近年来的流行[包括最近一次的2009年新型H1N1流行(SmithGJetal.,2009.Nature459:1122-1125andKilbourneED.2006.EmergInfectDis12:9-14)，其在不足1年内在世界范围内感染了超过600,000人，在超过200个国家中引起近16,000例死亡(CentersforDiseaseC,Prevention.2009.Update：infectionswithaswine-origininfluenzaA(H1N1)virus--UnitedStatesandothercountries,April28,2009.MMWRMorbMortalWklyRep58:431-433)]。需要新的疫苗策略和治疗剂以赋予针对多种流感病毒株的广泛保护。
技术实现思路
本专利技术通过提供流感广泛中和的抗流感单克隆抗体或其抗原结合片段解决了此需要。在一个方面，本专利技术提供了特异性结合至甲型流感病毒(IAV)H1亚型的血凝素(HA)的分离的抗体或其抗原结合片段，其包含：(i)重链可变区，所述重链可变区包含HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别包含SEQIDNOs:3-5的氨基酸序列；和(ii)轻链可变区，所述轻链可变区包含LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包含SEQIDNOs:6-8的氨基酸序列。在上述分离的抗体或抗原结合片段中，重链可变区可包含SEQIDNO:1的氨基酸序列。轻链可变区可包含SEQIDNO:2的氨基酸序列。本专利技术还提供了特异性结合至IAVH1亚型的HA的分离的抗体或其抗原结合片段。当结合至HA时，抗体结合至如下构象表位：所述构象表位依赖于(或包含)与pH1N1(SEQIDNO:13)的HA的E129和K180相对应的E和K氨基酸残基。进一步提供的是如下的分离的抗体或其抗原结合片段：其在与上述抗体或抗原结合片段的交叉阻断实验中竞争与IAVH1亚型的HA的结合。上面所述的抗体或抗原结合片段可包含Fc恒定区变异。分离的抗体或抗原结合片段可为嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。抗体或片段可缀合至治疗剂、聚合物、可检测标签或酶。聚合物的实例包括聚乙二醇(PEG)。治疗剂的实例包含细胞毒性剂。在第二方面，本专利技术提供了分离的核酸，其编码上述抗体或抗原结合片段中任一个的CDRs、重链或轻链可变区或者抗原结合部分中的一个或多个。核酸可用于表达具有上面所述的HCDRs或LCDRs中的一组或两组、抗体或抗原结合片段的链或者抗体或片段的多肽。为此，可将核酸可操作地连接至合适的调控序列以产生表达载体。因此，在本专利技术的范围内还有包含载体的培养宿主细胞以及产生多肽、抗体或其抗原结合部分的方法。所述方法包括：获取包含载体的培养宿主细胞，所述载体编码上面所述的抗体或其抗原结合部分的CDRs、多肽或者重链可变区或轻链可变区中的一个或多个的核酸序列；在允许表达由该载体编码的多肽并组装抗体或其片段的体积下在培养基中培养细胞，并从培养的细胞或细胞培养基中纯化抗体或片段。上面所述的抗体或片段可用于中和IAV的方法或治疗、预防或控制IAV感染的方法中。所述方法包括对需要其的受试者施用治疗有效量的抗体或片段。因此，本专利技术还提供了药物组合物，其包含(i)抗体或其抗原结合片段；和(ii)药学上可接受的载体。在以下描述中阐述本专利技术的一个或多个实施方式的细节。本专利技术的其他特征、目标和优点将从该描述和权利要求书中显而易见。附图简述图1A、1B和1C是一组显示KPF1人单克隆抗体(hmAb)的分离和分子表征的图表。(图1A)免疫后7天，采用设门方法(gatingstrategy)分离外周血浆母细胞(CD19+IgD-CD38+CD27++)。(图1B)KPF1VH和Vk(SEQIDNOs:1和9)与假定的谱系氨基酸序列(SEQIDNOs:10和11)的比对。(图1C)编码来自用于形成KPF1的扩增B细胞谱系的抗体的恒定区(SEQIDNO:22)和IgA1恒定区(SEQIDNO:23)的核酸的比对。.图2A、2B和2C是显示KPF1hmAb对H本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合至甲型流感病毒(IAV)H1亚型的血凝素(HA)，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：/n(i)包含HCDR1、HCDR2和HCDR3的重链可变区，所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别包含SEQID NOs:3-5的氨基酸序列，和/n(ii)包含LCDR1、LCDR2和LCDR3的轻链可变区，所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包含SEQID NOs:6-8的氨基酸序列。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170515 US 62/506,2561.分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合至甲型流感病毒(IAV)H1亚型的血凝素(HA)，所述分离的抗体或其抗原结合片段包含：
(i)包含HCDR1、HCDR2和HCDR3的重链可变区，所述HCDR1、HCDR2和HCDR3分别包含SEQIDNOs:3-5的氨基酸序列，和
(ii)包含LCDR1、LCDR2和LCDR3的轻链可变区，所述LCDR1、LCDR2和LCDR3分别包含SEQIDNOs:6-8的氨基酸序列。


2.权利要求1所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQIDNO:1的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含SEQIDNO:2的氨基酸序列。


3.分离的抗体或其抗原结合片段，其特异性结合至甲型流感病毒(IAV)H1亚型的血凝素(HA)，其中当结合至HA时，所述抗体结合至如下构象表位：所述表位依赖于与pH1N1(SEQIDNO:13)的HA的E129和K180相对应的氨基酸残基。


4.分离的抗体或其抗原结合片段，其在交叉阻断试验中与权利要求1-3中任一项的抗体或其抗原结合片段竞争结合IAVH1亚型的HA。


5.权利要求1-4中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其进一步包含Fc恒定区变体。


6.权利要求1-5中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体是嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。


7.权利要求1-6中任一项所述的分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或片段缀合至治疗剂、聚...

【专利技术属性】
技术研发人员：JJ科比，M皮彭布林克，M基弗，L马丁内斯索布里多，A诺加莱斯，
申请(专利权)人：罗切斯特大学，
类型：发明
国别省市：美国;US