柯萨奇病毒A6型实心病毒的单克隆抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种能与柯萨奇病毒A6型实心病毒反应的单克隆抗体，并公开了含有该单抗的试剂盒及其应用。本发明专利技术采用纯化的CA6病毒液免疫小鼠制备单克隆抗体。本发明专利技术还公开了所述单克隆抗体在检测CA6病毒或诊断手足口病中的应用。所述单克隆抗体对于快速检测试剂盒的制备和疫苗的开发研究，具有广泛的应用。

Monoclonal antibodies against coxsackievirus type A6 solid virus and their application

【技术实现步骤摘要】
柯萨奇病毒A6型实心病毒的单克隆抗体及其应用
本专利技术涉及免疫学
，特别是涉及柯萨奇病毒A6型实心病毒的单克隆抗体及其应用。
技术介绍
手足口病是由多种肠道病毒感染引起的急性传染病，夏季流行，学龄前儿童高发，成人可为间接传染源。手足口病临床主要表现为口腔、手、足部位皮疹，可并发脑膜炎、脑炎、肺水肿、循环衰竭等导致死亡的重症。目前肠道病毒71型(enterovirus71，EV71)和柯萨奇病毒A16(coxsackievirus，CA16)是中国大陆地区引起手足口病最常见的病原体。但随着检测技术及病毒分型手段的进步，近年来发现肠道病毒中的柯萨奇病毒A6(coxsackievirus，CA6)和柯萨奇病毒A10(coxsackievirus，CA10)的流行率呈现逐年增高的趋势，并成为部分地区的主要流行血清型。针对近几年病毒血清型的流行趋势，国内外众多研究机构及企业均在着力开发能够有效预防由CA6或CA10引起的手足口疾病发生的疫苗或药物。临床治疗方面为能提供最快速的方案，通常需要一种快速的检测方法，ELISA快速检测试剂盒是最常用的方法，能够在最短的时间内检测出患者所感染的病毒血清型。筛选一株型别特异性的单克隆抗体是建立检测试剂盒的前提。此外，在疫苗的研究过程中，疫苗中抗原含量是指导工艺研究和评价体外有效性的关键指标。建立抗原评价方法最关键的技术也在于筛选到合适的单克隆抗体，继而可利用该单克隆抗体建立一套有效的ELISA评价系统。柯萨奇病毒A6(coxsackievirus，CA6)和柯萨奇病毒A10(coxsackievirus，CA10)均为肠道病毒，肠道病毒在体外培养时容易形成两种不同的结构状态，一种为包含核酸的完整实心病毒颗粒，一种为不含核酸的空心病毒颗粒，通常这两种状态的病毒颗粒是共同存在的。经文献资料记载及多次的实验研究表明，实心病毒颗粒和空心病毒颗粒均有免疫原性，但实心病毒颗粒明显强于空心病毒颗粒。病毒原液中若含有一定比例的空心病毒颗粒，可有效提高原液总蛋白含量，对病毒原液及成品疫苗的稳定性具有重要的意义。因此，在疫苗的工艺研究和制剂研究中，能够确定产品中实心病毒颗粒和空心病毒颗粒的比例对产品的质量评价具有重要意义。分别建立能够检测实心病毒颗粒的抗原评价系统及检测空心病毒颗粒的抗原评价系统将对病毒原液的监测及成品疫苗的质量控制具有重要意义。
技术实现思路
为解决上述技术问题，本专利技术提供如下技术方案：第一方面，本专利技术提供了一种针对CA6病毒的单克隆抗体，所述单克隆抗体具有SEQIDNO:5所示的重链互补决定区CDR1、SEQIDNO:6所示的重链互补决定区CDR2、SEQIDNO:7所示的重链互补决定区CDR3，以及SEQIDNO:13所示的轻链互补决定区CDR1、SEQIDNO:14所示的轻链互补决定区CDR2、SEQIDNO:15所示的轻链互补决定区CDR3；优选地，所述单克隆抗体具有SEQIDNO:8所示的氨基酸序列的重链；和/或，优选地，所述单克隆抗体具有SEQIDNO:16所示的氨基酸序列的轻链；优选地，所述CA6病毒为CA6型实心病毒。第二方面，本专利技术提供了一种编码所述针对CA6病毒的单克隆抗体的多核苷酸序列，所述多核苷酸序列具有SEQIDNO:1所示的重链互补决定区CDR1、SEQIDNO:2所示的重链互补决定区CDR2、SEQIDNO:3所示的重链互补决定区CDR3，以及SEQIDNO:9所示的轻链互补决定区CDR1、SEQIDNO:10所示的轻链互补决定区CDR2、SEQIDNO:11所示的轻链互补决定区CDR3；优选地，所述多核苷酸序列具有SEQIDNO:4所示的核苷酸序列的重链；和/或，优选地，所述多核苷酸序列具有SEQIDNO:12所示的核苷酸序列的轻链；优选地，所述CA6病毒为CA6型实心病毒。第三方面，本专利技术提供了一种用于检测CA6病毒的试剂盒，所述试剂盒包括所述的单克隆抗体或所述的多核苷酸序列编码的单克隆抗体；优选地，所述试剂盒还包括多抗；更优选地，所述多抗为CA6兔多抗；优选地，所述CA6病毒为CA6型实心病毒。第四方面，本专利技术提供了一种用于诊断手足口病的试剂盒，所述试剂盒包括所述的单克隆抗体或所述的多核苷酸序列编码的单克隆抗体；优选地，所述试剂盒还包括多抗；更优选地，所述多抗为CA6兔多抗；优选地，所述CA6病毒为CA6型实心病毒。第五方面，本专利技术提供了一种所述的针对CA6病毒的单克隆抗体或所述的多核苷酸序列编码的单克隆抗体在制备用于检测CA6病毒或诊断手足口病的试剂盒中的应用；优选地，所述CA6病毒为CA6型实心病毒。第六方面，本专利技术提供了一种所述的针对CA6病毒的单克隆抗体或所述的多核苷酸序列编码的单克隆抗体在对含CA6病毒的疫苗的生产进行质量控制中的应用；优选地，所述CA6病毒为CA6型实心病毒。第七方面，本专利技术提供了一种对含CA6病毒的疫苗的生产进行质量控制的方法，所述方法包括用所述的针对CA6病毒的单克隆抗体或所述的多核苷酸序列编码的单克隆抗体检测CA6病毒的步骤；优选地，所述CA6病毒为CA6型实心病毒。第八方面，本专利技术提供了一种用于治疗或预防由CA6病毒感染引起的疾病的药物，所述药物含有所述的针对CA6病毒的单克隆抗体或所述的多核苷酸序列编码的单克隆抗体；优选地，所述CA6病毒为CA6型实心病毒。第九方面，本专利技术提供了一种所述的针对CA6病毒的单克隆抗体或所述的多核苷酸序列编码的单克隆抗体用于检测手足口疫苗制备过程中或疫苗成品中CA6病毒的含量的应用。优选地，所述应用为用于检测手足口疫苗制备过程中或疫苗成品中CA6实心病毒的含量。目前还未见有文献报道一种能够主要检测CA6实心病毒颗粒的抗原评价系统。在现有的工艺研究中，确定病毒液中空心和实心病毒的比例主要是依靠电镜观察的方式，电镜观察的方法对样品的浓度和缓冲体系的成分要求比较高，试验耗时长，对实验室的仪器设备要求也比较高，具有一定的局限性。若采用细胞病变法检测病毒滴度来评价样品中实心病毒颗粒的含量，耗时需要5-7天，实验操作繁琐。本专利技术通过采用纯化的CA6病毒液免疫小鼠制备单克隆抗体，免疫兔制备多克隆抗体，从众多的单克隆细胞株中筛选出与CA6型实心病毒颗粒反应能力强的细胞株，利用该细胞株制备大量腹水。之后对单克隆抗体与多克隆抗体分别进行纯化。对纯化后的单克隆抗体进行HRP酶标记，与制备的多克隆抗体建立了一套与实心病毒颗粒反应能力强于空心病毒颗粒的抗原检测系统，即主要用于检测CA6实心病毒颗粒的抗原评价系统。制备与CA6型实心病毒颗粒具有型别特异性结合能力的多抗和单抗，建立能够特异性检测CA6病毒的抗原评价系统，并且该评价系统对CA6型实心病毒颗粒的结合能力显著强于与CA6型空心病毒颗粒的结合能力。在疫苗的研究过程当中，CA6抗原含量的检测是指导工艺研究和评价体外有效性的关键指标。此外，在疫苗的工艺研究过程中，若能够客观真实的评价每一步工本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.针对CA6病毒的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体具有SEQ ID NO:5所示的重链互补决定区CDR1、SEQ ID NO:6所示的重链互补决定区CDR2、SEQ ID NO:7所示的重链互补决定区CDR3，以及SEQ ID NO:13所示的轻链互补决定区CDR1、SEQ ID NO:14所示的轻链互补决定区CDR2、SEQ ID NO:15所示的轻链互补决定区CDR3；优选地，所述单克隆抗体具有SEQ ID NO:8所示的氨基酸序列的重链；和/或，优选地，所述单克隆抗体具有SEQ ID NO:16所示的氨基酸序列的轻链；/n优选地，所述CA6病毒为CA6型实心病毒。/n

【技术特征摘要】
1.针对CA6病毒的单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体具有SEQIDNO:5所示的重链互补决定区CDR1、SEQIDNO:6所示的重链互补决定区CDR2、SEQIDNO:7所示的重链互补决定区CDR3，以及SEQIDNO:13所示的轻链互补决定区CDR1、SEQIDNO:14所示的轻链互补决定区CDR2、SEQIDNO:15所示的轻链互补决定区CDR3；优选地，所述单克隆抗体具有SEQIDNO:8所示的氨基酸序列的重链；和/或，优选地，所述单克隆抗体具有SEQIDNO:16所示的氨基酸序列的轻链；
优选地，所述CA6病毒为CA6型实心病毒。


2.编码权利要求1所述的针对CA6病毒的单克隆抗体的多核苷酸序列，其特征在于，所述多核苷酸序列具有SEQIDNO:1所示的重链互补决定区CDR1、SEQIDNO:2所示的重链互补决定区CDR2、SEQIDNO:3所示的重链互补决定区CDR3，以及SEQIDNO:9所示的轻链互补决定区CDR1、SEQIDNO:10所示的轻链互补决定区CDR2、SEQIDNO:11所示的轻链互补决定区CDR3；优选地，所述多核苷酸序列具有SEQIDNO:4所示的核苷酸序列的重链；和/或，优选地，所述多核苷酸序列具有SEQIDNO:12所示的核苷酸序列的轻链；
优选地，所述CA6病毒为CA6型实心病毒。


3.用于检测CA6病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的单克隆抗体或权利要求2所述的多核苷酸序列编码的单克隆抗体；优选地，所述试剂盒还包括多抗；更优选地，所述多抗为CA6兔多抗；
优选地，所述CA6病毒为CA6型实心病毒。


4.用于诊断手足...

【专利技术属性】
技术研发人员：武瑞霞，戈小琴，夏君瑶，蔡芳，李雅静，高强，尹卫东，
申请(专利权)人：北京科兴生物制品有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11