【技术实现步骤摘要】
高温好氧条件下产甘油的耐热酵母工程菌的构建及其应用
本专利技术属于微生物代谢工程以及微生物发酵工程领域，具体涉及高温好氧条件下产甘油的耐热酵母工程菌的构建及其应用。本专利技术耐热酵母工程菌株能够在较高温度下(42℃)利用三种单糖(葡萄糖、果糖和木糖)发酵生产甘油。
技术介绍
甘油(学名丙三醇)是一种重要的轻化工原料，用途极广。在涂料工业中用于生产醇酸树脂和酚醛树脂；在医药工业中用作溶剂和润滑剂；在食品工业中用作甜味剂、保湿剂和甘油单脂；在烟草工业中用作溶剂和保湿剂；在国防工业中用作炸药硝化甘油的原料、飞机汽车燃料的抗冻剂；在日用化工中用于牙膏、香精的生产。还广泛应用于造纸、皮革、玻璃和纺织工业中。它还是聚醚的成分，用于制造聚氨基甲酸酯泡沫塑料。在聚合物生产中用作某些单体聚合时的介质和添加剂。目前，已有大约十多个行业的1700多种产品使用甘油作为原料。从甘油的消费结构看，欧美、日本等发达国家主要用于合成醇酸树脂、医药和饮料等方面；国内精制甘油主要用于涂料和牙膏等方面，复合甘油主要用于油漆和造纸。目前，按甘油的来源其生产...
【技术保护点】
1.一种高温好氧条件下产甘油的耐热酵母工程菌，其特征在于：/n所述耐热酵母工程菌为耐热酵母工程菌株YZB115，其分类命名为：马克斯克鲁维酵母Kluyveromyces marxianus，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2019年12月16日，保藏编号：CGMCC NO.19134。/n
【技术特征摘要】
1.一种高温好氧条件下产甘油的耐热酵母工程菌，其特征在于：
所述耐热酵母工程菌为耐热酵母工程菌株YZB115，其分类命名为：马克斯克鲁维酵母Kluyveromycesmarxianus，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏日期：2019年12月16日，保藏编号：CGMCCNO.19134。
2.一种权利要求1所述的耐热酵母工程菌的构建方法，其特征在于：
首先以耐热酵母NBRC1777为基础，敲除其URA3基因，得到可以用URA3作为营养缺陷筛选标签的重组菌株，命名为YZB040；然后将YZB040菌株的KU70基因敲除，构建具有高效同源重组能力的工程菌株，得到的菌株命名为YZB100；随后将YZB100中的URA3基因再次敲除，得到的菌株命名为YZB101；最后将YZB101菌株的磷酸丙糖异构酶TPI1基因敲除，得到磷酸丙糖异构酶功能缺失的耐热酵母工程菌株，命名为YZB115。
3.根据权利要求2所述的构建方法，其特征在于包括如下步骤：
步骤1：将融合PCR得到的KmURA3敲除片段导入NBRC1777野生菌株中，利用同源重组，敲除NBRC1777内的URA3基因，获得的菌株命名为YZB040；
步骤2：以质粒pZB061为模板，用引物KU70-F和KU70-RPCR扩增KU70-ScURA3基因片段，将KU70-ScURA3基因片段导入YZB040中，利用同源重组原理敲除KU70基因，同时使菌株恢复URA3基因的功能，得到的菌株命名为YZB100；
步骤3：以质粒pMD18T-ΔScURA3为模板，PCR扩增ScURA3敲除片段，将ScURA3敲除片导入YZB100中，再次敲除菌株YZB100内的URA3基因作为筛选标签，获得的菌株命名为YZB101；
步骤4：以质粒pZB059为模板，用引物TPI1-F和TPI1-RPCR扩增TPI1-ScURA3基因片段，将TPI1-ScURA3基因片段导入YZB101中，使菌株YZB101内的TPI1被敲除，同时使菌株恢复URA3基因的功能，得到...
【专利技术属性】
技术研发人员：张标，任丽丽，李峰，徐大勇，王一晴，
申请(专利权)人：淮北师范大学，
类型：发明
国别省市：安徽;34
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