一种产红没药烯的解脂耶氏酵母及其构建方法与用途技术

本发明专利技术公开了产生红没药烯的解脂耶氏酵母基因工程菌及其用途，属于分子生物学技术领域。所述基因工程菌为解脂耶氏酵母宿主中导入α‑红没药烯合酶基因、β‑红没药烯合酶基因或γ‑红没药烯合酶基因并且过表达甲羟戊二酸单酰辅酶A还原酶基因(HMGR基因)所得。基因工程菌在YPD培养基中摇瓶发酵后，基因工程菌Po1gΔku70α‑HR产α‑红没药烯的产量为100.22mg/L，基因工程菌Po1gΔku70β‑HR产β‑红没药烯的产量为5.66mg/L，基因工程菌Po1gΔku70γ‑HR产γ‑红没药烯的产量为3.55mg/L。经优化培养基后，菌株Po1gΔku70α‑HR产量为162.24mg/L，Po1gΔku70β‑HR产量为20.811mg/L和Po1gΔku70γ‑HR产量为6.25mg/L。

A lipolysis yeasts producing red myrrhene and its construction and Application

【技术实现步骤摘要】
一种产红没药烯的解脂耶氏酵母及其构建方法与用途
本专利技术属于分子生物学
，涉及一种产生红没药烯的解脂耶氏酵母基因工程菌及其用途。
技术介绍
解脂耶氏酵母是一种具有典型代表性的非常规酵母。该酵母无致病性，最高生长温度一般在34℃以下，并且已经被认定为(generallyregardedassafe,GRAS)安全级微生物。与酿酒酵母不同，该酵母为严格好氧菌，所能达到的最大生物量值较大。解脂耶氏酵母的另外一个显著优点是它广泛存在于各类食物和各种生存环境中，这是因为该酵母可以利用的碳源类型极为广泛，包括有机酸、烷烃、烯烃、油类、醇类、酯类等各种廉价碳源。此外，解脂耶氏酵母在其代谢过程中能够产生和(或)分泌多种代谢产物，因此具有很好的工业用途价值。具体用途包括蛋白酶、脂肪酶、磷酸酶、赖氨酸、γ-癸内酯、柠檬酸、异柠檬酸、α-酮戊二酸和单细胞油脂的工业生产和生物修复等。由于解脂耶氏酵母具有以上这些生理、代谢特征和独特优势(尤其，微生物发酵工业的关键瓶颈在于生产成本，尤以碳源为主)，因此解脂耶氏酵母在生物燃料、大宗化学品、精细化学品、工业酶、药物等本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于：所述基因工程菌以解脂耶氏酵母为出发菌株，通过导入红没药烯合酶基因并且过表达甲羟戊二酸单酰辅酶A还原酶基因HMGR所得；所述红没药烯合酶基因为α-红没药烯合酶基因、β-红没药烯合酶基因或γ-红没药烯合酶基因其中的一种。/n

【技术特征摘要】
1.一种解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于：所述基因工程菌以解脂耶氏酵母为出发菌株，通过导入红没药烯合酶基因并且过表达甲羟戊二酸单酰辅酶A还原酶基因HMGR所得；所述红没药烯合酶基因为α-红没药烯合酶基因、β-红没药烯合酶基因或γ-红没药烯合酶基因其中的一种。


2.如权利要求1所述一种解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于：所述α-红没药烯合酶基因的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO：1所示；所述β-红没药烯合酶基因的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO：2所示；所述γ-红没药烯合酶基因的核苷酸序列如序列表中SEQIDNO：3所示；所述HMGR基因的表达是通过构建核苷酸序列如序列表SEQIDNO：5的HMGR表达盒实现。


3.如权利要求1所述一种解脂耶氏酵母基因工程菌，其特征在于：所述解脂耶氏酵母出发菌株为解脂耶氏酵母(Yarrowialipolytica)Po1gΔku70。


4.一种重组载体，其特征在于：所述重组载体包含α-红没药烯合酶基因、β-红没药烯合酶基因或γ-红没药烯合酶基因其中的一种以及HMGR基因。


5.权利要求1-3任一所述解脂耶氏酵母基因工程菌的构建方法，包括以下步骤：
(1)将HMGR基因和红没药烯合酶基因插入质粒中，得到重组质粒；
(2)将所述重组质粒线性化后导入所述出发菌株中，重组后得到所述基因工程菌。


6.如权利要求5所述解脂耶氏酵母基因工程菌的构建方法，包括如下步骤：
1)将α-红没药烯合酶基因、β-红没药烯合酶基因和γ-红没药烯合酶基因基因分别插入到质粒pYLEX1的多克隆位点上，分别得到重组质粒pYLEX1-α、pYLEX1-β和pYLEX1-γ；
2)构建核苷酸序列如序列表...

【专利技术属性】
技术研发人员：于爱群，赵雅坤，李建，李圣龙，赵禹，朱坤，张翠英，肖冬光，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：天津;12