盐酸他克林在制备治疗胆管癌的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了盐酸他克林在制备治疗胆管癌的药物中的应用。在本发明专利技术中，通过外显子测序，确定了CCA患者中CLK3的关键Q607体细胞突变，该CLK3突变体作为癌基因在促进CCA中从头嘌呤合成的重要作用。同时，筛选出盐酸他克林作为抑制CLK3异常CCA的潜在药物，为包含CLK3失调的CCA提供了新的治疗策略。

Application of tacrolin hydrochloride in the preparation of drugs for the treatment of cholangiocarcinoma

【技术实现步骤摘要】
盐酸他克林在制备治疗胆管癌的药物中的应用
本专利技术涉及医药
，更具体地，本专利技术涉及盐酸他克林在制备治疗胆管癌的药物中应用。
技术介绍
胆管细胞源性胆管癌，简称胆管癌(英文名称缩写：CCA)，是原发性肝恶性肿瘤，根据解剖位置分为肝外和肝内(Maroni等，2013)。全球范围内，CCA的发病率正在增加，其预后仍然令人沮丧。到目前为止，尚无可唯一识别的CCA标记物，其治疗选择很少。尽管已显示出诸如ERBB2，FOXM1和Yap之类的几种危险因素可促进CCA的发生(Sugihara等，2019)，但在大多数CCA患者中通常并未发现它们。最近，遗传学研究增强了对正常胆管细胞获得人CCA恶性转化特性的分子机制的理解(Marks和Yee，2016)。因此，朝这个方向的更多努力可能构成开发新的诊断方法和更有效的CCA治疗方法的基础。CDC样激酶3(英文名称缩写：CLK3)是一种核双特异性激酶，在含有丝氨酸/苏氨酸和酪氨酸的底物上起作用(Nayler等，1997)。CLK3通过磷酸化富含丝氨酸/精氨酸(SR)的蛋白(例如SRSF1和SRSF3)来调节RNA剪接(Cesana等人，2018)。CLK3失调已被证明是在不同类型的人类肿瘤中的高渗透因子，但其在肿瘤中的功能尚不清楚(Bowler等人，2018)。分析Oncomine数据库发现，CLK3的基因组DNA在食道癌(ESCA)和胃癌(GC)中也经常被扩增。但是，KEGG功能途径分析未表明其参与嘌呤合成。CLK3可能代表一种独特的激酶，对于CCA细胞从头嘌呤合成至关重要。该证实强烈支持CLK3作为CCA中治疗靶标的潜力，这将为治疗这种破坏性疾病提供新的方法。本专利技术还证实，盐酸他克林盐酸盐是FDA批准的用于治疗阿尔茨海默氏病的药物，可以重新用于CCA治疗。了解遗传驱动基因突变的功能后可极大地促进靶向癌症治疗的发展。利用FDA批准的美国药物收藏，盐酸他克林被确认为有效下调CCA中CLK3水平的一种候选药物。盐酸他克林是一种胆碱酯酶抑制剂，已被FDA批准用于治疗阿尔茨海默氏病(delosRíos和Marco-Contelles，2019年)。有报道盐酸他克林或其衍生物显示出强大的抗癌能力(Qin等人，2018)。在临床中已证明盐酸他克林具有良好的安全性和高效力。因此，该药可能成为治疗人CCA的候选药物，它也可以作为与CLK3相关的研究的有用工具。
技术实现思路
在本专利技术中，证明了CLK3在胆管癌(CCA)中显着上调，并在CLK3激酶结构域中鉴定了代表功能获得性突变的复发性Q607R体细胞替代。通过比较CCA细胞的代谢谱进一步证实了CCA患者中较高的CLK3表达主要与核苷酸代谢重编程有关。CLK3在Y708处直接磷酸化USP13，促进其与c-Myc的结合，从而阻止Fbx1414介导的c-Myc泛素化并激活嘌呤代谢基因的转录。CCA相关的CLK3-Q607R突变体可诱导USP13-Y708磷酸化并增强c-Myc的活性；反之，c-Myc转录上调CLK3。以上发现表明，CLK3在CCA嘌呤代谢中起关键作用，具备潜在的治疗用途，针对CDC样激酶3的含量水平与胆管癌的相关性，确定了盐酸他克林是抑制CLK3异常CCA的潜在药物。本专利技术的目的是在于提供盐酸他克林在制备治疗胆管癌的药物中的应用。本专利技术的另一目的在于提供一种治疗胆管癌的药物组合物。本专利技术的技术方案如下：盐酸他克林在制备治疗胆管癌的药物中的应用。本专利技术的另一技术方案如下：一种治疗胆管癌的药物组合物，该药物组合物的有效成分包括盐酸他克林。进一步，该药物组合物的有效成分为盐酸他克林。本专利技术的有益效果是：在本专利技术中，通过外显子测序，确定了CCA患者中CLK3的关键Q607体细胞突变，该CLK3突变体作为癌基因在促进CCA中从头嘌呤合成的重要作用。同时，筛选出盐酸他克林作为抑制CLK3异常CCA的潜在药物，为包含CLK3失调的CCA提供了新的治疗策略。附图说明图1为实施例1中CCA与其他消化系统癌症的CLK3表达量及CCA不同阶段的CLK3表达量、存活率和IHC分析图。其中，A为消化系统肿瘤中CLK3mRNA平均表达量的TCGA分析图；B为CLK3表达量与CCA患者生存期关系图；C为GSE26566数据中正常人群与CCA患者群的CLK3表达量对比图；D为100个CCA患者的CLK3表达量及mRNA表达量的QPCR队列分析图；E为100个CCA患者的CLK3表达量与肿瘤大小、转移情况、疾病阶段的柱形关系图；F为正常人与不同阶段CCA患者的CLK3表达量的IHC分析图；G为100个CCA患者的CLK3表达量的Kaplan-Meier分析图。图2为实施例2的小鼠实验中沉默CLK3与CCA细胞的侵略性各种关系图。其中，A为Dox诱导的CLK3敲低后HuCCT1细胞的增殖图；B为Dox诱导的CLK3敲低后HuCCT1细胞的增殖曲线图；C为Dox诱导的CLK3敲低后HuCCT1细胞的BrdU掺入测定图；D为Dox诱导的CLK3敲低后HuCCT1细胞的锚定非依赖性生长比较图；E为Dox诱导的CLK3敲低后HuCCT1细胞的伤口愈合实验分析图；F为Dox诱导的CLK3敲低后HuCCT1细胞的穿孔实验分析图；G为Dox诱导的CLK3缺乏后HuCCT1细胞对小鼠异种移植物的影响分析图；H为HuCCT1细胞中CLK3的Dox诱导性敲低与CCA小鼠腹部转移性结节的数量关系图。图3中从各方面证明实施例3中通过重新编程嘌呤代谢来上调CLK3而促进CCA的发展。其中，A为CCA患者中具有CLK3高丰度的前500个上调基因的热图；B为CCA患者中CLK3高表达的前20个生物学过程的P值分析对比图；C为HuCCT1细胞中Dox诱导的CLK3敲低的代谢谱图；D为HuCCT1细胞中Dox诱导的CLK3敲低的主要代谢途径的示意图；E为HuCCT1细胞中DoCC诱导的CLK3敲低对15N嘌呤中间体的抑制作用分析图；F为HuCCT1细胞中DoCC诱导的CLK3敲低对14C-甘氨酸的抑制作用分析图；G为CLK3沉默对决定HuCCT1细胞中嘌呤代谢的基因的影响分析图；H为CLK3表达量与HuCCT1细胞的增殖的关系示意图；I为ATIC抑制剂与HCCC9810细胞的增殖的关系示意图。图4为实施例4中c-Myc的稳定性和核易位对嘌呤从头合成和CCA进程的影响示意图。其中：A为HuCCT1细胞中引入c-Myc对shCLK3介导的嘌呤代谢产物的影响分析图(1)；B为HuCCT1细胞中引入c-Myc对shCLK3介导的嘌呤代谢产物的影响分析图(2)；C为CLK3表达量对HuCCT1细胞(左)或HCCC9810细胞(右)中c-MycmRNA丰度的影响分析图；D为使用环己酰亚胺处理的HuCCT1的细胞的c-Myc半衰期分析图；E为使用环己酰亚胺处理的HCCC9810的细胞的c-Myc半衰期分析图；F为MG132对HuCCT1细胞中c-Myc降解的影响分析图；Gi为CLK3表达量对HuCC本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.盐酸他克林在制备治疗胆管癌的药物中的应用。/n

【技术特征摘要】
1.盐酸他克林在制备治疗胆管癌的药物中的应用。


2.一种治疗胆管癌的药物组合物，其特征在于，该药物组合物的有...

【专利技术属性】
技术研发人员：洪雪辉，
申请(专利权)人：厦门大学，
类型：发明
国别省市：福建;35