一种人头发皮质醇的提取和检测方法技术

本发明专利技术提供了一种人头发皮质醇的提取和检测方法，所述方法包括：头发的收集：从人的后脑勺，靠近头皮的位置收集40根长3cm的头发；头发的洗涤：对头发进行洗涤，并在室温下干燥；头发的研磨：将头发研磨为头发粉末；头发的称重：将研磨得到的头发粉末用精度为0.1mg的天平称重，并记录；皮质醇的抽提：对头发粉末进行皮质醇的抽提，得到皮质醇抽提液；干燥与重新溶解：对皮质醇抽提液进行干燥，并对干燥后的皮质醇进行重新溶解；皮质醇的测定：对皮质醇待测物进行测定，得到测定结果。本申请明确定量化了人类头发皮质醇头发样本的收集流程，对皮质醇抽提的得率显著提高；优化了头发洗涤后干燥的工序，干燥简单、迅速。

Extraction and detection of cortisol from human hair

【技术实现步骤摘要】
一种人头发皮质醇的提取和检测方法
本专利技术涉及分析检测领域，具体涉及人体头发激素检测。
技术介绍
皮质醇，也称为氢化可的松，又称为氢皮质素或化合物F，是从肾上腺皮质中提取出的是对糖类代谢具有最强作用的肾上腺皮质激素，即属于糖皮质激素的一种。头发中的皮质醇可广泛应用于帮助分析和诊断人近期数月的健康和疾病状态，包括库欣综合征、肾上腺不足、心血管疾病、压力和精神疾病等，这是一种方便而且无创的方法。但是至目前为止，还没有一种全面的针对人类的从头发收集直至皮质醇采集和检测的全部流程方法。现有技术1：中国专利（ZL201510570829.X）提供了一种毛发皮质醇激素提取方法，所述方法包括以下步骤：步骤一：将毛发样品置于异丙醇中进行振荡洗涤后在68-72℃干燥3.5-4.5h获得洗涤后的毛发；步骤二：利用球磨仪对所述洗涤后的毛发进行研磨获得研磨后的毛发；步骤三：将研磨后的毛发与甲醇在75-85℃接触15-17h后离心获得上清液。但是，上述方法中存在如下不足：（1）所述专利技术主要针对动物的毛发，而动物的毛发通常是很多的，基本上不受量的限制；而人的头发采集必然要求精准的控制；（2）所述专利技术的侧重点在于从动物毛发中提取皮质醇，并没有包括从头发收集到皮质醇测试的全过程；（3）所述专利技术提取皮质醇的方法的得率较低，在样本量比较少（例如人的头发）的情况下给测试带来困难。因此，如何提供一种针对人发的、抽提得率高的、快速简单、测定灵敏度高的人头发皮质醇的提取和检测方法，是目前本领域技术人员亟待解决的技术问题。<br>
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种人头发皮质醇的提取和检测方法，以解决现有技术中没有针对人发的皮质醇激素提取方法，且皮质醇激素抽提得率低、方法繁琐的问题。所述技术方案具体如下：一种人头发皮质醇的提取和检测方法，所述方法具体包括：（1）头发的收集：从人的后脑勺，靠近头皮的位置收集40根长3cm的头发；（2）头发的洗涤：对头发进行洗涤，并在室温下干燥；（3）头发的研磨：将头发研磨为头发粉末；（4）头发的称重：将研磨得到的头发粉末用精度为0.1mg的天平称重，并记录；（5）皮质醇的抽提：对头发粉末进行皮质醇的抽提，得到皮质醇抽提液；（6）干燥与重新溶解：对皮质醇抽提液进行干燥，并对干燥后的皮质醇进行重新溶解；（7）皮质醇的测定：对皮质醇待测物进行测定，得到测定结果。优选的，所述步骤（2）具体为：将所述头发置于2-4ml的异丙醇中进行振荡洗涤2-3次，振荡频率为200-300转/分钟，每次3分钟；之后取出头发，在干净无污染的吸水纸上除去多余的溶剂，将其剪短后置于离心管中用吹扫仪接压缩空气，室温下吹干干燥即可。优选的，所述步骤（3）具体为：取洗涤干燥完的头发放入球磨仪，选用不锈钢或氧化锆研磨球，研磨时长为1分钟，转速7000转/分钟，即可迅速完成研磨过程，可获得5微米粒径的头发粉末。优选的，在研磨前，将头发放入冰箱进行预冻，保证研磨过程中样品处于冷却状态。优选的，所述步骤（5）具体包括如下步骤：5.1按照1-2ml/10mg的量向头发粉末中加入乙醇，在52°C条件下，利用倾斜旋转混合仪以80转/分钟的转速孵育15小时，收集上清液，并保留得到组分1；5.2按照1-2ml/10mg的量向剩余液中加入丙酮，在室温条件下，利用倾斜旋转混合仪以80转/分钟的转速孵育15分钟，收集上清液，并保留得到组分2；5.3重复步骤5.1，收集上清液，并保留得到组分3；5.4合并组分1、2和3，得到皮质醇抽提液。优选的，所述步骤（6）具体包括如下步骤：6.1将皮质醇抽提液置于玻璃试管内，用压缩氮气完全吹干；6.2向玻璃试管内加入100-300微升的0.1mol/L的PBS缓冲液，PBS缓冲液pH值7.4，在PBS缓冲液中加入0.1%重量比BSA和0.01%体积比的tritonX-100，振荡充分溶解其中的皮质醇，得到皮质醇待测物。优选的，吹干过程中保证氮气吹管之间的相互独立，以免引起样品之间的交叉污染。优选的，所述步骤（7）中利用唾液皮质醇酶联免疫法试剂盒对皮质醇待测物进行测定。本专利技术所获得的有益技术效果：（1）本申请中头发皮质醇抽提的得率显著提高。与传统的仅用甲醇一步法比，由于本专利技术创造采用了皮质醇溶解度更高的溶剂乙醇和丙酮，而且步骤从一步增加到三步，大大提高了皮质醇抽提的得率，可从40-60%提高至95%以上。（2）本申请明确定量化了人类头发皮质醇头发样本的收集流程。现有的专利技术是针对动物的，不能直接应用到人类头发的采集。其他现有技术则没有明确指出要采集多少根头发，给测定头发皮质醇技术的实用化和用户的实操带来巨大困难。（3）本申请优化了头发洗涤后干燥的工序，使干燥变得极为简单、迅速，大大节省了时间。相较于现有的专利技术要求在70°C的环境下干燥4小时；而本申请只需在室温下干燥十几分钟即可。（4）本申请在头发皮质醇抽提后重新溶解，提高了头发皮质醇测定的灵敏度。由于在重新溶解皮质醇的0.1mol/L的PBS缓冲液，pH7.4中加入了0.1%BSA，与测定缓冲液的成分接近，本专利技术创造将头发皮质醇的测定灵敏度提高了约3倍。（5）通过本申请中的方法取得的头发皮质醇待测物中头发皮质醇含量和纯度都在唾液皮质醇酶联免疫法试剂盒的测定分析范围内，以使得皮质醇含量可用唾液皮质醇酶联免疫法试剂盒进行测定，简化了皮质醇含量的测定步骤。上述说明仅是本申请技术方案的概述，为了能够更清楚了解本申请的技术手段，从而可依照说明书的内容予以实施，并且为了让本申请的上述和其他目的、特征和优点能够更明显易懂，以下以本申请的较佳实施例并配合附图详细说明如后。根据下文结合附图对本申请具体实施例的详细描述，本领域技术人员将会更加明了本申请的上述及其他目的、优点和特征。附图说明为了更清楚地说明本申请实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本申请的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。在所有附图中，类似的元件或部分一般由类似的附图标记标识。附图中，各元件或部分并不一定按照实际的比例绘制。图1为本申请为头发收集位置示意图；其中，1-后脑勺。具体实施方式为使本申请实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。在下面的描述中，提供诸如具体的配置和组件的特定细节仅仅是为了帮助全面理解本申请的实施例。因此，本领域技术人员应该清楚，可以对这里描述的实施例进行各种改变和修改而不脱离本申请的范围和精神。另外，为了清除和简洁，实施例中省略了对已知功本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种人头发皮质醇的提取和检测方法，其特征在于，所述方法包括：/n（1）头发的收集：从人的后脑勺，靠近头皮的位置收集40根长3cm的头发；/n（2）头发的洗涤：对头发进行洗涤，并在室温下干燥；/n（3）头发的研磨：将头发研磨为头发粉末；/n（4）头发的称重：将研磨得到的头发粉末用精度为0.1mg的天平称重，并记录；/n（5）皮质醇的抽提：对头发粉末进行皮质醇的抽提，得到皮质醇抽提液；/n（6）干燥与重新溶解：对皮质醇抽提液进行干燥，并对干燥后的皮质醇进行重新溶解；/n（7）皮质醇的测定：对皮质醇待测物进行测定，得到测定结果。/n

【技术特征摘要】
1.一种人头发皮质醇的提取和检测方法，其特征在于，所述方法包括：
（1）头发的收集：从人的后脑勺，靠近头皮的位置收集40根长3cm的头发；
（2）头发的洗涤：对头发进行洗涤，并在室温下干燥；
（3）头发的研磨：将头发研磨为头发粉末；
（4）头发的称重：将研磨得到的头发粉末用精度为0.1mg的天平称重，并记录；
（5）皮质醇的抽提：对头发粉末进行皮质醇的抽提，得到皮质醇抽提液；
（6）干燥与重新溶解：对皮质醇抽提液进行干燥，并对干燥后的皮质醇进行重新溶解；
（7）皮质醇的测定：对皮质醇待测物进行测定，得到测定结果。


2.根据权利要求1所述的一种人头发皮质醇的提取和检测方法，其特征在于，所述步骤（2）具体为：将所述头发置于2-4ml的异丙醇中进行振荡洗涤2-3次，振荡频率为200-300转/分钟，每次3分钟；之后取出头发，在干净无污染的吸水纸上除去多余的溶剂，将其剪短后置于离心管中用吹扫仪接压缩空气，室温下吹干干燥即可。


3.根据权利要求1所述的一种人头发皮质醇的提取和检测方法，其特征在于，所述步骤（3）具体为：取洗涤干燥完的头发放入球磨仪，选用不锈钢或氧化锆研磨球，研磨时长为1分钟，转速7000转/分钟，即可迅速完成研磨过程，可获得5微米粒径的头发粉末。


4.根据权利要求3所述的一种人头发皮质醇的提取和检测方法，其特征在于，在研磨前，将头发放入冰箱进行预冻，保证研磨过程中样品处于冷却状态...

【专利技术属性】
技术研发人员：王锋，
申请(专利权)人：苏州飞康生物医药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32