用于癌症治疗的T细胞的活化方法技术

本发明专利技术涉及由如SEQ ID NO：1‑184任一所示的代表的癌症特异性肿瘤抗原新表位，一种装载有新表位的抗原呈递细胞，以及一种使用该抗原呈递细胞活化用于癌症治疗的T细胞的方法。装载有本发明专利技术提供的癌症特异性肿瘤抗原表位的抗原呈递细胞，即树突状细胞，能够快速有效地诱导癌抗原特异性T细胞，优选记忆性T细胞的分化和增殖。如此活化的记忆T细胞可以治疗癌性或肿瘤性疾病或预防癌症的复发、发展、或转移，同时避免癌细胞的防御机制。

Activation of T cells for cancer treatment

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于癌症治疗的T细胞的活化方法
本专利技术涉及癌症特异性肿瘤抗原新表位，装载有该新表位的抗原呈递细胞，以及使用该抗原呈递细胞进行癌症治疗的T细胞的活化方法。
技术介绍
在世界上，尤其在亚洲，胃癌被认为是高发性恶性肿瘤。已知有多种导致胃癌发展的病因。然而，胃癌通常可分为因爱泼斯坦巴尔病毒(EBV)感染引起的EBV相关性胃癌,和因胃肠道细胞中基因突变积累而引起的胃癌细胞抗原相关性胃癌。对于当前的胃癌治疗，一直以来最有效的是切除癌组织，而化学疗法和放射疗法也有施行。然而，似乎未及早发现的胃癌是一种难以治愈的疾病。另外，尽管几种生物试剂(抗体、小分子)已经进行了临床试验，但是具有良好临床效果的治疗试剂尚未报道。近来，多个机构已经研究，使用源自患者的自体T细胞的癌细胞特异性靶向疗法，并且多个机构已经使用嵌合抗原受体(CAR)T细胞进行了淋巴瘤的临床试验。结果，由于优良临床效果和低副作用，这种治疗作为抗癌治疗的新领域引起了广泛的关注。使用患者来源的T细胞会减少免疫应答的诱导，且消除对供体HLA类型的限制，而诱导免疫应答是细胞治疗试剂的最大副作用。因此，这种T细胞被认为是有效的且没有副作用的治疗试剂。迄今为止，CD8+T细胞、CD4+T细胞、NK细胞、树突状细胞和CART细胞被认为是在抗癌治疗领域中最广泛使用的细胞治疗试剂类型。NK细胞具有杀伤细胞的功效，由于不具有抗原特异性而具有多种副作用。树突状细胞是疫苗概念的治疗试剂，因为它们不具有直接杀死细胞的功能，并且能够将抗原特异性传递给患者体内的T细胞，从而将癌细胞特异性高效地赋予T细胞。另外，CD4+T细胞通过抗原特异性而起到帮助其他细胞的作用，而CD8+T细胞被认为具有最佳的抗原特异性和细胞杀伤作用。然而，迄今为止已经使用或开发的大多数细胞治疗试剂具有局限性，故没有临床效果。考虑到这些局限性，癌细胞本身会分泌抑制人体免疫反应的物质，或者不提供产生针对此类癌细胞的抗体所必需的抗原，从而阻止发生适当的免疫反应。同时，树突状细胞不仅充当检测来自人体外部或内部产生的抗原的监视者，而且还通过这种经识别和吸收的抗原迅速转运至次级淋巴器官，从而充当专门的抗原呈递细胞，所述抗原呈递细胞指将抗原呈递给与抗原反应的免疫细胞，包括T细胞。已经通过几种方法开发了使用树突状细胞的抗癌免疫治疗疫苗，其可以大致分为离体产生的树突状细胞疫苗和体内树突状细胞疫苗。体内树突状细胞疫苗通过将抗原直接递送至体内存在的树突状细胞的方式起作用。另外，使用离体产生的树突状细胞疫苗的方法是：从患者的PBMC中分离树突状细胞，将要呈递的抗原递送至分离的树突状细胞，树突状细胞被其活化随后注射回患者体内，如此抗原从注射的树突状细胞传递到T细胞。在后者中，离体树突状细胞培养方法和抗原递送方法很重要，当前使用的抗原呈递方法包括：使用病毒或核转染或靶向树突状细胞的抗原递送的方法转染待呈递的抗原的DNA，其中抗原与靶向树突状细胞的抗体结合。目前，树突状细胞疫苗的最大问题是体内出现严重的慢性炎症现象和瓦博格效应，并且在免疫抑制性细胞因子、免疫抑制性T细胞、树突状细胞等存在的癌症微环境下很难有效活化抗癌免疫细胞。技术问题本专利技术的一个目的是提供一种爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)阳性的癌症特异性肿瘤抗原新表位，以及用于活化含有该表位的T细胞的组合物。本专利技术的另一个目的是提供一种装载有本专利技术的新表位的抗原呈递细胞，所述抗原呈递细胞能够活化T细胞以用于癌症治疗。本专利技术的又一个目的是提供一种T细胞，所述T细胞由装载有本专利技术的新表位的抗原呈递细胞活化。本专利技术的又一个目的是提供一种用于癌症治疗的T细胞的活化方法。然而，本专利技术要解决的技术问题不限于上述问题，并且本领域技术人员将从以下描述中清楚地理解未提及的其他问题。解决问题根据本专利技术的一个实施方案，提供了一种癌症特异性肿瘤抗原表位。在本专利技术中，“癌症特异性肿瘤抗原表位”衍生自仅存在于癌细胞中而不存在于正常细胞中的蛋白质抗原。在本专利技术中，所述癌症特异性肿瘤抗原表位包括至少一种被T细胞受体识别的表位；并且该表位可以优选地包括存在于爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)阳性癌细胞的表位，包括EBV病毒表位或癌细胞表位，且可以更优选地为爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)阳性癌细胞抗原，即爱泼斯坦巴尔病毒潜伏膜蛋白2(LMP2a)、或爱泼斯坦巴尔核抗原1(EBNA-1)、或其新表位。在本专利技术中，“爱泼斯坦巴尔病毒潜伏膜蛋白2(LMP2a)”是在所有II型和III型疾病/恶性肿瘤中表达的几种EBV基因之一。对应于跨膜蛋白，LMP2a充当B细胞受体信号转导的负调节剂，并通过螯合酪氨酸激酶促进细胞存活。HLA-A2限制性肽是表位特异性的细胞毒性T淋巴细胞，可在60％至75％的个体中离体检测到，并且是潜伏疾病中免疫显性最强的LMP表位。CLGGLLTMV肽一直被认为是NPC和HL治疗的潜在靶标，因为该表位在NPC和HL患者的活检组织中保守，且其与其他EBV潜伏表位一样免疫功能弱。在本专利技术中，“爱泼斯坦-巴尔核抗原1(EBNA-1)”对应于与爱泼斯坦-巴尔病毒相关的多功能二聚体病毒蛋白。这对应于一种EBV蛋白，所述EBV蛋白仅见于所有与EBV相关的恶性肿瘤中。这在维持细胞感染EBV时的变化状态中起着重要作用。另一方面，EBNA-1对应于甘氨酸-丙氨酸重复序列，所述甘氨酸-丙氨酸重复序列将蛋白质分为氨基和羧基末端结构域。该序列起到稳定蛋白质、防止蛋白酶体降解、减弱抗原加工和MHCI类限制性抗原呈递的作用。因此，EBNA-1抑制了针对病毒感染细胞的CD8限制性细胞毒性T细胞反应。EBNA-1在所有潜伏期程序中由Qp启动子表达，并且对应于在潜伏期程序I中唯一表达的病毒蛋白。在本专利技术中，“新表位”是指在诸如正常、非癌细胞或种系细胞之类的参照物中不存在而在癌细胞中存在的表位。在本专利技术中，所述新表位可以与HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E、HLA-F、HLA-G、β2-微球蛋白、HLA-DPA1、HLA-F、DPB1、HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DRA1、HLA-DRB1、HLA-DRB3、HLA-DRB4、HLA-DRB5、HLA-DM、HLA-DOA和HLA-DOB位点中的至少一种表现出结合亲和力，因此自人血中提取的T细胞，优选是记忆T细胞可具有功效。其中，所述新表位可以包括与韩国人表达最高的至少一种HLA类型具有高结合亲和力的表位，例如HLA-A*2402、HLA-A*A0201、HLA-A*3303、HLA-A*1101、HLA-A*0206、HLA-A*3101、HLA-B*5101、HLA-B*4403、HLA-B*5401、HLA-B*5801、和HLA-B*3501。优选地，在本专利技术中，所述新表位与HLA-A*2402具有高结合亲和力，并且可包括LMP2a抗原的新表位，所述LMP2a抗原是由SEQIDNOs：1至151中任一所示的肽；或对HLA-A*3101具有高结合亲和力，并且可以包括EBNA-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种癌症特异性肿瘤抗原新表位，如SEQ ID NO：1-184中任一所示。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170810 KR 10-2017-01018001.一种癌症特异性肿瘤抗原新表位，如SEQIDNO：1-184中任一所示。


2.如权利要求1所述的癌症特异性肿瘤抗原新表位，其中所述癌症特异性肿瘤抗原新表位表现出与HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-E、HLA-F、HLA-G、β2-微球蛋白、HLA-DPA1、HLA-DPB1、HLA-DQA1、HLA-DQB1、HLA-DRA1、HLA-DRB1、HLA-DRB3、HLA-DRB4、HLA-DRB5、HLA-DM、HLA-DOA、和HLA-DOB位点中的至少一种结合的亲和力。


3.如权利要求1所述的癌症特异性肿瘤抗原新表位，其中所述癌症特异性肿瘤抗原新表位表现出与HLA-A*2402、HLA-A*A0201、HLA-A*3303、HLA-A*1101、HLA-A*0206、HLA-A*3101、HLA-B*5101、HLA-B*4403、HLA-B*5401、HLA-B*5801、和HLA-B*3501中的至少一种的结合的亲和力。


4.如权利要求1所述的癌症特异性肿瘤抗原新表位，其中所述癌症是爱泼斯坦-巴尔病毒(EBV)阳性癌症。


5.如权利要求4所述的癌症特异性肿瘤抗原新表位，其中所述癌症是EBV阳性胃癌、EBV阳性宫颈癌、EBV阳性伯基特淋巴瘤、EBV阳性T细胞淋巴瘤、EBV阳性乳腺癌、EBV阳性平滑肌肉瘤、EBV阳性平滑肌瘤、EBV阳性霍奇金淋巴瘤、EBV阳性鼻咽癌、或EBV阳性移植后淋巴组织增生性疾病(PTLD)。


6.一种核酸分子，其编码根据权利要求1至5中任一项所述的癌症特异性肿瘤抗原新表位。


7.一种表达载体，其中插入了权利要求6所述的核酸分子。


8.一种宿主细胞，其中转染有权利要求7所述的表达载体。


9.一种用于活化T细胞的组合物，其包含：如SEQIDNO：1-184任一所示的癌症特异性肿瘤抗原新表位。


10.如权利要求9所述的组合物，其中所述T细胞用于预防或治疗癌症。


11.如权利要求9所述的组合物，其中，所述T细胞包括选自细胞毒性T细胞、辅助性T细胞、天然杀伤性T细胞、γδT细胞、调节性T细胞、和记忆性T细胞中的一种或多种。


12.一种抗原呈递细胞，其中装载有如SEQIDNO：1-184任一所示的癌症特异性肿瘤抗原新表位。


13.如权利要求12所述的抗原呈递细胞，其中所述抗原呈递细胞包括树突状细胞、B细胞、和巨噬细胞中的一种或多种。


14.如权利要求13所述的抗原呈递细胞，其中所述抗原呈递细胞促进T细胞的增殖或分化。


15.一种融合蛋白，其包含：如SEQIDNO：1-184任一所示的癌症特异性肿瘤抗原新表位；和树突状细胞特异性抗体或其片段。


16.如权利要求15所述的融合蛋白，其中树突状细胞特异性抗体是特异性针对树突状细胞上的DCIR、MHCI类、MHCII类、CD1、CD2、CD3、CD4、CD8、CD11b、CD14、CD15、CD16、CD19、CD20、CD29、CD31、CD40、CD43、CD44、CD45、CD54、CD56、CD57、CD58、CD83、CD86、CMRF-44、CMRF-56、DCIR、DC-ASPGR、C...

【专利技术属性】
技术研发人员：金廷镐，金范锡，
申请(专利权)人：古德T细胞有限公司，
类型：发明
国别省市：韩国;KR