一种检测2019新型冠状病毒的核酸组合物、试剂盒以及方法技术

本发明专利技术公开了一种检测2019新型冠状病毒的核酸组合物、试剂盒以及方法，涉及生物技术领域。本发明专利技术公开的核酸组合物包括：第一核酸组合和第二核酸组合的至少一种，第一核酸组合包括SEQ ID NO.4‑6，第二核酸组合包括SEQ ID NO.7‑9。采用本发明专利技术提供的核酸组合物、试剂盒或方法检测2019新型冠状病毒具有更高的灵敏度和特异性。

Novel coronavirus nucleic acid composition, reagent kit and method for detecting 2019 novel coronavirus

【技术实现步骤摘要】
一种检测2019新型冠状病毒的核酸组合物、试剂盒以及方法
本专利技术涉及生物
，具体而言，涉及一种检测2019新型冠状病毒的核酸组合物、试剂盒以及方法。
技术介绍
自2019年12月以来，在武汉确诊了多例不明原因病毒性肺炎患者，随着疫情的蔓延，我国其他地区及境外也相继发现了此类病例。此类病例由一种新发现的冠状病毒引起，被称为2019新型冠状病毒，其属于β属的冠状病毒。2020年2月11日，国际病毒分类委员会（ICTV）宣布，2019新型冠状病毒的分类名为严重急性呼吸综合证冠状病毒2（SARS-Cov-2），同日世界卫生组织（WHO）将这一病毒感染导致的疾病正式命名为COVID-19。2019新型冠状病毒肺炎主要经飞沫、接触传播，人群普遍易感。2019新型冠状病毒感染的一般症状有：发热、乏力、干咳，逐渐出现呼吸困难，部分患者起病症状轻微，甚至可无明显发热。严重症状有：急性呼吸窘迫综合征、脓毒性休克、难以纠正的代谢性酸中毒、出凝血功能障碍。除上述症状，还有可能具有如下不典型症状：如轻度纳差、乏力、恶心呕吐、腹泻、头痛等。从目前的收治的病例情况看，多数患者预后良好，少数患者病情危重，甚至与其它基础性疾病并发导致死亡。因此及时、准确检测该新型冠状病毒十分重要。从公开的报道来看，已有厂家研发出相应的检测试剂盒，但仍需提供一种检测灵敏度高、特异性好的方案。鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测2019新型冠状病毒的核酸组合物、试剂盒以及方法，以提高检测2019新型冠状病毒的灵敏度和特异性。本专利技术是这样实现的：第一方面，本专利技术提供一种检测2019新型冠状病毒的核酸组合物，其包括：第一核酸组合和第二核酸组合的至少一种；所述第一核酸组合包括：SEQIDNO.4和SEQIDNO.6所示的第一引物对，以及SEQIDNO.5所示的第一探针；所述第二核酸组合包括：SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示的第二引物对，以及SEQIDNO.9所示的第二探针。本专利技术提供的第一核酸组合和第二核酸组合根据2019年新型冠状病毒（SARS-Cov-2）保守且特异于其它已发现冠状病毒的两个基因片段（S基因片段和N基因片段）进行特异性设计而成，第一核酸组合可特异性检测2019年新型冠状病毒的S基因片段，第二核酸组合可特异性检测2019年新型冠状病毒的N基因片段；该核酸组合物与其他呼吸道病毒无交叉反应，仅能检测2019年新型冠状病毒，且能够将低至20copies/mL浓度的阳性样本检测出；采用第一核酸组合或第二核酸组合，或者是两种的组合均可以实现对2019年新型冠状病毒的高灵敏度和高特异性的检测。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，所述核酸组合物还包括第三核酸组合；所述第三核酸组合包括：SEQIDNO.10和SEQIDNO.11所示的第三引物对，以及SEQIDNO.12所示的第三探针。第三核酸组合作为内对照，使用第三核酸组合同时检测，有利于提高对检测结果判读的准确性，且第三核酸组合与第一核酸组合和第二核酸组合，相互间没有干扰，不会产生非特异性扩增，能够确保检测结果的可靠性。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，所述第一探针、所述第二探针以及所述第三探针的5’端标记有不同的荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，所述荧光报告基团选自FAM、HEX、ROX、JOE、CY3、VIC、TET、TAXASRED、NED、ALEXA、TAMRA、CY5.5和CY5中的一种。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，所述荧光淬灭基团选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、MGB和DABCYL中的任意一种。需要说明的是，本领域技术人员可以根据实际需要，选择其他类型的荧光报告基因和荧光淬灭基团，无论选择何种荧光报告基因和荧光淬灭基团，其均属于本专利技术的保护范围。第二方面，本专利技术提供一种检测2019新型冠状病毒的试剂盒，其包括如上任一项所述的核酸组合物。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，所述试剂盒还包括PCRbuffer和酶混合液，所述PCRbuffer含有PCR缓冲物质、阳离子、脱氧核糖核苷酸中的至少一种。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，PCR缓冲物质为Tris-HCl。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，Tris-HCl的浓度为50-200mM。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，阳离子包括K+和Mg2+。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，K+的浓度为100-400mM。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，Mg2+浓度为10-30mM。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，脱氧核糖核苷酸包括dATP、dCTP、dGTP以及dUTP。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，dATP、dCTP、dGTP的浓度为0.5-3mM，dUTP的浓度为1-6mM。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，所述酶混合液包括DNA聚合酶、逆转录酶和UNG酶。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，DNA聚合酶可以为Taq、Tfl、Pfu或TthDNA聚合酶中的至少一种。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，DNA聚合酶的浓度为1-10U/μL。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，逆转录酶为M-MLV逆转录酶或AMV逆转录酶。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，逆转录酶的浓度为30-100U/μL。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，UNG酶为温度敏感型的UNG酶。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，UNG酶的浓度为0.3-2U/μL。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，所述试剂包括冻干PCR反应试剂；所述冻干PCR反应试剂由上述的PCRbuffer、上述的酶混合液、所述核酸组合物和冻干保护剂混合后经冻干制得。其中，冻干的参数本领域技术人员可以根据实际情况进行常规调节，无论以何种方式值得的冻干制剂，均属于本专利技术的保护范围。可选地，在本专利技术的一些实施方案中，所述冻干保护剂选自甘露醇、葡聚糖、海藻糖、明胶和蔗糖中的至少一种。需要说明的是，本专利技术的冻干保护剂并不限于上述的甘露醇、葡聚糖、海藻糖、明胶和蔗糖，采用其他的冻干保护也属于本专利技术的保护范围。需要说明的是，Tris-HCl、K+、Mg2+、dATP、dCTP、dGTP、dUTP、DNA聚合酶、逆转录酶和UNG酶可以以混合的方式存在于试剂盒中，也可以以部分混合或各自分开的方式存在于试剂盒中，无论以何种方式存在于试剂盒中，其均属于本专利技术的保护范围。另外，Tris-HCl、K+、Mg2+、dATP、dCTP、dGTP、dUTP、DNA聚合酶、逆转录酶和UNG酶的浓度也可以根据实际需要调整，无论以何种浓度存在于试剂盒中，其均属于本专利技术的保护范围。第三方面，本专利技术提供一种检测2019新型冠状病毒的方法，其采用如上任一项所述的核酸组合物，或者采用如上任一项所述的试剂盒进本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测2019新型冠状病毒的核酸组合物，其特征在于，其包括：第一核酸组合和第二核酸组合的至少一种；/n所述第一核酸组合包括：SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.6所示的第一引物对，以及SEQ IDNO.5所示的第一探针；/n所述第二核酸组合包括：SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示的第二引物对，以及SEQ IDNO.9所示的第二探针。/n

【技术特征摘要】
1.一种检测2019新型冠状病毒的核酸组合物，其特征在于，其包括：第一核酸组合和第二核酸组合的至少一种；
所述第一核酸组合包括：SEQIDNO.4和SEQIDNO.6所示的第一引物对，以及SEQIDNO.5所示的第一探针；
所述第二核酸组合包括：SEQIDNO.7和SEQIDNO.8所示的第二引物对，以及SEQIDNO.9所示的第二探针。


2.根据权利要求1所述的核酸组合物，其特征在于，所述核酸组合物还包括第三核酸组合；
所述第三核酸组合包括：SEQIDNO.10和SEQIDNO.11所示的第三引物对，以及SEQIDNO.12所示的第三探针。


3.根据权利要求2所述的核酸组合物，其特征在于，所述第一探针、所述第二探针以及所述第三探针的5’端标记有不同的荧光报告基团，3’端标记有荧光淬灭基团。


4.根据权利要求3所述的核酸组合物，其特征在于，所述荧光报告基团选自FAM、HEX、ROX、JOE、CY3、VIC、TET、TAXASRED、NED、ALEXA、TAMRA、CY5.5和CY5中的一种，所述荧光淬灭基团选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、MGB和DABCYL中的任意一种。


5.一种检测2019新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，其包括权利要求1-4任一项所述的核酸组合物。


6.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：勾宏娜，吴燕，陈怡，欧格，邓京，
申请(专利权)人：珠海丽珠试剂股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44