【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其是涉及一种细胞因子冻干保护剂及其应用、细胞因子冻干品的制备方法。
技术介绍
1、细胞因子(cytokine，ck)是由免疫细胞和非免疫细胞合成分泌的一类有多种生物活性的小分子多肽或糖蛋白，分子量绝大多数在6～60kd之间，多数细胞因子结构为单体，但也存在二聚体和三聚体等，如il-5、il-10、il-12、m-csf、tgf-β及pdgf等二聚体；三聚体，如tnf等。
2、已有相关研究表明不同储存形态(水溶液，冻结溶液，冻干固体)的细胞因子蛋白生理活性存在一定差异，特别是il-10、il-1β等冻干固体复溶后水溶液存在稳定性不佳，冻结溶液复融后均一性不佳等问题，临床上使用有失控风险且成本较高。
3、有鉴于此，提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种细胞因子冻干保护剂，以缓解现有技术中细胞因子冻干复溶后质量下降等问题。本专利技术的另一目的在于提供上述细胞因子冻干保护剂的应用和细胞因子冻干品的制备方法。
2、为解决上述技术问题，本专利技术特采用如下技术方案：
3、第一方面，提供了一种细胞因子冻干保护剂，该细胞因子冻干保护剂包含牛血清白蛋白、脯氨酸、聚乙烯吡咯烷酮、海藻糖、甘油和蔗糖，余量为缓冲液。
4、以质量百分比计，各组分浓度如下：
5、牛血清白蛋白0.5～1.5wt％，例如可以为但不限于为0.5、0.8、1、1.2或1.5wt％。牛血清白蛋白对冻干品形成符合要求的
6、脯氨酸0.3～1wt％，例如可以为但不限于为0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1wt％。脯氨酸对冻干品形成符合要求的外观，以及对维持热稳定和长期储存稳定性具有重要作用。
7、聚乙烯吡咯烷酮(pvp)0.03～0.08wt％，例如可以为但不限于为0.03、0.04、0.05、0.06、0.07或0.08wt％。聚乙烯吡咯烷酮对冻干品形成符合要求的外观，以及对维持热稳定和长期储存稳定性具有重要作用。
8、海藻糖1～1.5wt％，例如可以为但不限于为1、1.1、1.2、1.3、1.4或1.5wt％。海藻糖能提高冻干品复溶后稳定性。
9、甘油0.2～1wt％，例如可以为但不限于为0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9或1wt％。甘油对一些细胞因子冻干品反复冻融效果具有明显保护作用。
10、蔗糖0.5～1.5wt％，例如可以为但不限于为0.5、0.8、1、1.2或1.5wt％。
11、可选的实施方式中，缓冲液包括磷酸盐缓冲液(pb缓冲液)，优选为50～150mm磷酸盐缓冲液，例如可以为但不限于为50、100或150mm磷酸盐缓冲液。
12、可选的实施方式中，所述细胞因子冻干保护剂还含有防腐剂，防腐剂优选包括proclin300，浓度优选为0.01～0.1wt％，例如可以为但不限于为0.01、0.05或0.1wt％。
13、可选的实施方式中，所述细胞因子冻干保护剂包含0.5～1.5wt％牛血清白蛋白、0.3～1wt％脯氨酸、0.03～0.08wt％聚乙烯吡咯烷酮、1～1.5wt％海藻糖、0.2～1wt％甘油、0.5～1.5wt％蔗糖和0.01～0.1wt％proclin300，余量为50～150mm磷酸盐缓冲液。
14、可选的实施方式中，所述细胞因子冻干保护剂包含1wt％牛血清白蛋白、0.5wt％脯氨酸、0.05wt％聚乙烯吡咯烷酮、1wt％海藻糖、0.5wt％甘油、1wt％蔗糖和0.05wt％proclin300，余量为50mm磷酸盐缓冲液。
15、第二方面，还提供了第一方面的细胞因子冻干保护剂在制备细胞因子冻干品中的应用。
16、可选的实施方式中，所述应用包括制备包括如下至少一种细胞因子的冻干品：il-1β、il-2、il-4、il-5、il-6、il-8、il-8、il-10、il-12p70、il-17a、ifn-α、ifn-γ和tnf-α中的至少一种，其中细胞因子优选包括il-1β和il-10中的至少一种。
17、可选的实施方式中，制备的细胞因子冻干品作为细胞因子检测试剂盒组分，包括但不限于制备细胞因子检测的校准品、质控品和参考品中的至少一种，其中检测包括定性和/或定量检测。
18、第三方面，还提供了一种细胞因子冻干品的制备方法，所述制备方法包括将待冻干的细胞因子与所述细胞因子冻干保护剂混合，然后进行冻干。冻干步骤依次包括：冷冻控制、一次干燥、二次干燥、一次解析干燥和二次解析干燥，各步骤参数如表1所示：
19、表1
20、
21、冷冻控制的参数中，温度例如可以为但不限于为-48、-45、-40、-35或-30℃，设定时间温度例如可以为但不限于为60、90或120min，保持时间例如可以为但不限于为60、90、120、150或180min。
22、一次干燥的参数中，温度例如可以为但不限于为-30、-25、-20或-15℃，设定时间温度例如可以为但不限于为90、100、110或120min，保持时间例如可以为但不限于为180、210、240或270min，控制真空例如可以为但不限于为0.8、0.9或1.0mbar。
23、二次干燥的参数中，温度例如可以为但不限于为-15、-14、-13、-12、-11或-10℃，设定时间温度例如可以为但不限于为60、90、100、110或120min，保持时间例如可以为但不限于为180、210、240或270min，控制真空例如可以为但不限于为0.8、0.9或1.0mbar。
24、一次解析干燥的参数中，温度例如可以为但不限于为10、15或20℃，设定时间温度例如可以为但不限于为60、90、100、110或120min，保持时间例如可以为但不限于为15、20、25、30、35、40或45min，控制真空例如可以为但不限于为0.8、0.9或1.0mbar。
25、二次解析干燥的参数中，温度例如可以为但不限于为20、25或30℃，设定时间温度例如可以为但不限于为60、90、100、110或120min，保持时间例如可以为但不限于为15、20、25、30、35、40或45min，控制真空例如可以为但不限于为0.8、0.9或1.0mbar。
26、可选的实施方式中，冻干体系中，待冻干的细胞因子和所述细胞因子冻干保护剂的用量比为1～1×105pg/ml，例如可以为但不限于1、50、100、500、1×103、5×103、1×104、5×104或1×105pg/ml。
27、第四方面，还提了一种细胞因子冻干品，所述细胞因子冻干品包括第一方面的细胞因子冻干保护剂和细胞因子。
28、可选的实施方式中，所述细胞因子和所述细胞因子冻干保护剂的用量比为1～1×105pg/m本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种细胞因子冻干保护剂，其特征在于，包含0.5～1.5wt％牛血清白蛋白、0.3～1wt％脯氨酸、0.03～0.08wt％聚乙烯吡咯烷酮、1～1.5wt％海藻糖、0.2～1wt％甘油和0.5～1.5wt％蔗糖，余量为缓冲液。
2.根据权利要求1所述的细胞因子冻干保护剂，其特征在于，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液，优选为50～150mM磷酸盐缓冲液。
3.根据权利要求1所述的细胞因子冻干保护剂，其特征在于，还含有防腐剂；
4.根据权利要求1～3任一项所述的细胞因子冻干保护剂，其特征在于，包含0.5～1.5wt％牛血清白蛋白、0.3～1wt％脯氨酸、0.03～0.08wt％聚乙烯吡咯烷酮、1～1.5wt％海藻糖、0.2～1wt％甘油、0.5～1.5wt％蔗糖和0.01～0.1wt％Proclin300，余量为50～150mM磷酸盐缓冲液。
5.权利要求1～4任一项所述的细胞因子冻干保护剂在制备细胞因子冻干品中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述细胞因子包括IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6
7.一种细胞因子冻干品的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括将待冻干的细胞因子与权利要求1～4任一项所述细胞因子冻干保护剂混合，然后进行冻干；所述冻干步骤依次包括：冷冻控制、一次干燥、二次干燥、一次解析干燥和二次解析干燥；
8.细胞因子冻干品，其特征在于，包括如权利要求1～4任一项所述的细胞因子冻干保护剂和细胞因子；
9.根据权利要求7所述细胞因子冻干品，其特征在于，所述细胞因子包括IL-1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12p70、IL-17A、IFN-α、IFN-γ和TNF-α中的至少一种；
10.权利要求8或9所述细胞因子冻干品的应用，其特征在于，所述细胞因子冻干品用于制备细胞因子检测的校准品、质控品和参考品中的至少一种；所述检测包括定性和/或定量检测。
...【技术特征摘要】
1.一种细胞因子冻干保护剂，其特征在于，包含0.5～1.5wt％牛血清白蛋白、0.3～1wt％脯氨酸、0.03～0.08wt％聚乙烯吡咯烷酮、1～1.5wt％海藻糖、0.2～1wt％甘油和0.5～1.5wt％蔗糖，余量为缓冲液。
2.根据权利要求1所述的细胞因子冻干保护剂，其特征在于，所述缓冲液包括磷酸盐缓冲液，优选为50～150mm磷酸盐缓冲液。
3.根据权利要求1所述的细胞因子冻干保护剂，其特征在于，还含有防腐剂；
4.根据权利要求1～3任一项所述的细胞因子冻干保护剂，其特征在于，包含0.5～1.5wt％牛血清白蛋白、0.3～1wt％脯氨酸、0.03～0.08wt％聚乙烯吡咯烷酮、1～1.5wt％海藻糖、0.2～1wt％甘油、0.5～1.5wt％蔗糖和0.01～0.1wt％proclin300，余量为50～150mm磷酸盐缓冲液。
5.权利要求1～4任一项所述的细胞因子冻干保护剂在制备细胞因子冻干品中的应用。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所...
【专利技术属性】
技术研发人员：胡卫国，钱鹏，王瑞楠，曾敏霞，
申请(专利权)人：珠海丽珠试剂股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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