一种获取脂肪干细胞分泌蛋白的方法技术

本发明专利技术属于生物医药领域，涉及一种获取细胞分泌蛋白的方法，具体涉及一种获取脂肪干细胞分泌蛋白的方法。本法从脂肪组织中分离得到脂肪干细胞，对脂肪干细胞进行原代和传代培养，然后再对脂肪干细胞进行饥饿培养，从而获得了大量的脂肪干细胞分泌蛋白。获得的分泌蛋白具有较高的生物活性，可以应用于对细胞损伤修复的微环境建立，化妆品，抗衰老，疾病治疗等诸多领域，具有广阔的应用前景。

A method of obtaining secretory protein from adipose stem cells

【技术实现步骤摘要】
一种获取脂肪干细胞分泌蛋白的方法
本专利技术属于生物医药领域，涉及一种获取细胞分泌蛋白的方法，具体涉及一种获取脂肪干细胞分泌蛋白的方法。
技术介绍
脂肪干细胞(adipose-derivedstemcells，ADSCs)能分泌相当数量的细胞因子，包括肝细胞生长因子(HGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PGF)、转化生长因子-β(TGF-β)、成纤维细胞生长因子(FGF-2)等，这些细胞因子有利于建立更好的损伤修复微环境。其中，脂肪干细胞是指从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。脂肪干细胞具有取材方便，而且其分化能力与其他骨髓来源的干细胞相当。脂肪干细胞在再生医学领域发挥着重要作用，可以用于组织器官再造、皮肤再生、脂肪再生等。但是在普通培养的情况下，脂肪干细胞只能产生一定数量的分泌蛋白，需要采集大量脂肪组织用以收集脂肪干细胞，从而获得足够量的分泌蛋白。脂肪组织的采集过程较为复杂，从而影响了脂肪干细胞的分泌蛋白的广泛应用，亟需开发一种能够刺激脂肪干细胞大量表达和分泌具有生物活性的分泌蛋白的方法。专利本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种获取脂肪干细胞分泌蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：/nS1：获取脂肪干细胞；从脂肪组织中获取基质血管成分，并从基质血管成分中分离得到原代脂肪干细胞，对原代脂肪干细胞进行一次继代培养，获得脂肪干细胞；/nS2：脂肪干细胞预培养：将S1中获得的脂肪干细胞接种在无酚红完全培养基中，对脂肪干细胞进行预培养，获得活化脂肪干细胞；/nS3：脂肪干细胞饥饿培养：移除活化脂肪干细胞的无酚红完全培养基，并用生理盐水洗涤活化脂肪干细胞，然后使用复方电解质注射液对活化脂肪干细胞进行饥饿培养；饥饿培养结束后收集上清液Ⅰ。/n

【技术特征摘要】
1.一种获取脂肪干细胞分泌蛋白的方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1：获取脂肪干细胞；从脂肪组织中获取基质血管成分，并从基质血管成分中分离得到原代脂肪干细胞，对原代脂肪干细胞进行一次继代培养，获得脂肪干细胞；
S2：脂肪干细胞预培养：将S1中获得的脂肪干细胞接种在无酚红完全培养基中，对脂肪干细胞进行预培养，获得活化脂肪干细胞；
S3：脂肪干细胞饥饿培养：移除活化脂肪干细胞的无酚红完全培养基，并用生理盐水洗涤活化脂肪干细胞，然后使用复方电解质注射液对活化脂肪干细胞进行饥饿培养；饥饿培养结束后收集上清液Ⅰ。


2.根据权利要求1所述的一种获取脂肪干细胞分泌蛋白的方法，其特征在于，在S1中，从脂肪组织中获取基质血管成分的方法如下：将脂肪组织清洗和剪碎，然后在脂肪组织中加入酶溶液，对脂肪组织进行酶解消化处理；酶解消化处理后用脂肪干细胞培养基终止酶解消化，脂肪干细胞培养基的体积为酶溶液的体积的5-10倍；再使用100μm细胞滤网过滤，获得基质血管成分。


3.根据权利要求2所述的一种获取脂肪干细胞分泌蛋白的方法，其特征在于，在S1中，所述酶溶液为Ⅰ型胶原酶溶液或者胰蛋白酶溶液；在Ⅰ型胶原酶溶液中，Ⅰ型胶原酶的浓度为2-3mg/ml；所述胰蛋白酶溶液中，胰蛋白酶的浓度为2-3mg/ml；酶解消化处理的温度为35-40℃，时长为40-80min。


4.根据权利要求3所述的一种获取脂肪干细胞分泌蛋白的方法，其特征在于，在S1中，从基质血管成分中分离得到原代脂肪干细胞的方法为：将基质血管成分接种于含有双抗的脂肪干细胞培养基中，对基质血管成分进行培养；培养完成后，除去未贴壁的细胞，获得贴壁的原代脂肪干细胞...

【专利技术属性】
技术研发人员：边曙光，张凤宁，汪国云，曾智芃，明凯，
申请(专利权)人：贵州泛特尔细胞生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州;52