一种五味子UPLC指纹图谱的构建方法技术

本发明专利技术属于药物分析及药物质量控制技术领域，具体涉及一种五味子药材UPLC指纹图谱的构建方法。本发明专利技术以五味子醇甲为参照物，所建立的UPLC指纹图谱可以检测到9个共有峰，并识别出五味子醇甲、戈米辛D、五味子醇乙、当归酰基戈米辛H、五味子甲素、五味子乙素等6个共有峰。该方法较普通HPLC法，能大幅度节约检测时间及试剂，可以作为快速评价五味子药材与相关制剂，以及鉴别五味子伪品的方法。

A method to construct UPLC fingerprint of Schisandra chinensis

【技术实现步骤摘要】
一种五味子UPLC指纹图谱的构建方法
本专利技术属于药物分析及药物质量控制
，具体涉及一种五味子UPLC指纹图谱的构建方法。
技术介绍
五味子为木兰科植物五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill.的干燥成熟果实。习称“北五味子”。始载于《神农本草经》，并列为上品，能收敛固涩，益气生津，补肾宁心。用于久嗽虚喘，梦遗滑精，遗尿尿频，久泻不止，自汗盗汗，津伤口渴，内热消渴，心悸失眠。近年来五味子价格持续走高，采用南五味子等伪品掺假现象屡禁不绝。现有2015年版《中国药典》收载的质量控制方法仅从性状、鉴别、检查和含量测定对五味子质量加以规定，不能全面的反映药材的质量，因此也难以杜绝上述掺假行为。超高效液相色谱(UPLC)技术具有分离效能高、选择性好、灵敏度高、分析速度快、应用范围广等特点，目前已经成为一种常规的分析方法，并为使用者大幅度节约检测时间及试剂成本。中药指纹图谱技术，尤其是高效液相指纹图谱技术，能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价，目前已成为控制中药材及制剂的关键技术。因此，有必要结合以上技术，开发一种快速评价五味子药材与相关制剂，以及鉴别五味子伪品的方法。
技术实现思路
本专利技术结合上述技术各自的优点，提供一种五味子UPLC指纹图谱的构建方法。本专利技术是通过以下技术方案来实现的：一种五味子药材UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)参照物溶液的制备取五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇溶液制成每1ml含五味子醇甲60μg的溶液，即得。(2)供试品溶液的制备取五味子药材粉末(过三号筛)约0.25g，精密称定，置125ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率1130W，频率37kHz)20分钟，取出，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。(3)色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.30～0.40ml；柱温为25～35℃；检测波长为251nm。五味子醇甲与邻近色谱峰的分离度应大于1.5。(4)测定法分别精密吸取参照物溶液及供试品溶液各1.5μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。(5)对照指纹图谱的建立将35批基地样品图谱生成AIA文件导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行评价，剪切5～30min图谱并生成对照图谱。(6)评价方法供试品指纹图谱应分别呈现与对照指纹图谱对应的9个共有峰。按中药色谱指纹图谱相似度评价系统，供试品指纹图谱与对照指纹图谱经相似度计算，5分钟后的色谱峰，其相似度不得低于0.90。所述步骤(3)，其特征在于，色谱条件与系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱型号为WatersHSST3(2.1×150mm，1.8μm)。所述步骤(3)，其特征在于，色谱条件与系统适用性试验，流速为每分钟0.30～0.40ml。所述步骤(3)，其特征在于，色谱条件与系统适用性试验，流速为每分钟0.35ml。所述步骤(3)，其特征在于，色谱条件与系统适用性试验，柱温为25～35℃。所述步骤(3)，其特征在于，色谱条件与系统适用性试验，柱温为30℃。所述步骤(6)，其特征在于，供试品指纹图谱应分别呈现与对照指纹图谱对应的9个共有峰中，识别出6个共有峰，分别为1号峰：五味子醇甲；2号峰：戈米辛D；4号峰：五味子醇乙；5号峰：当归酰基戈米辛H；7号峰：五味子甲素；9号峰：五味子乙素。有益效果本专利技术较普通HPLC法，能大幅度节约检测时间及试剂，可以作为快速评价五味子药材与相关制剂，以及鉴别五味子伪品的方法。附图说明图1为色谱柱考察色谱图图2为流速考察色谱图图3为柱温考察色谱图图4为专属性考察色谱图图5为35批基地样品色谱图图6为35批基地样品所生成的对照图谱图7为各批次样品色谱图具体实施方式下面通过具体实施方式来进一步说明本专利技术，以下实施例为本专利技术具体的实施方式，但本专利技术的实施方式并不受下述实施例的限制。1.设备与材料1.1.仪器超纯水仪(Milli-QSynthesisA10，USA)超声清洗仪(Elmap180H，Germany)安捷伦1290高效液相色谱系统(Agilent1290Infinity，USA)：表1仪器信息1.2.试剂乙腈(色谱纯，Merck，KGaA64271DarmstadtGermany，UN1648)甲醇(色谱纯，Merck，KGaA64271DarmstadtGermany，UN1230)甲醇(色谱纯，20181218国药集团(上海)化学试剂有限公司)1.3.供试品、对照品信息表2样品信息表3对照品信息2.供试品制备考察2.1.提取溶剂考察取本品粉末(过三号筛)约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇：水(9∶1)混合溶液、甲醇、乙醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟(140W，42kHz)，放冷，再称定重量，用相应溶剂补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。分别精密吸取上述供试品溶液各1.5μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。结果见表4-5。表4相似度-提取溶剂考察表5提取溶剂考察结果表明，不同溶剂提取对相似度无显著影响，综合考虑峰形等因素，选择甲醇为提取溶剂。2.2.提取方式考察超声：取本品粉末(过三号筛)约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟(1130W，37kHz)，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。回流：取本品粉末(过三号筛)约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。分别精密吸取上述供试品溶液各1.5μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。结果见表6-7。表6相似度-提取方式考察表7提取方式考察结果表明，提取方式对相似度无显著影响，选择较简便的超声法进行提取。2.3.提取时间考察取本品粉末(过三号筛)约0.25g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，称定重量，超声处理10、20、30分钟(1130W，37kHz)，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，即得。分别精密吸取上述供试品溶液各1本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种五味子药材UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：/n(1)参照物溶液的制备 取五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇溶液制成每1ml含五味子醇甲60μg的溶液，即得。/n(2)供试品溶液的制备 取五味子药材粉末(过三号筛)约0.25g，精密称定，置125ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率1130W，频率37kHz)20分钟，取出，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。/n(3)色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.30～0.40ml；柱温为25～35℃；检测波长为251nm。五味子醇甲与邻近色谱峰的分离度应大于1.5。/n表1/n

【技术特征摘要】
1.一种五味子药材UPLC指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)参照物溶液的制备取五味子醇甲对照品适量，精密称定，加甲醇溶液制成每1ml含五味子醇甲60μg的溶液，即得。
(2)供试品溶液的制备取五味子药材粉末(过三号筛)约0.25g，精密称定，置125ml具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25ml，称定重量，超声处理(功率1130W，频率37kHz)20分钟，取出，放冷，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
(3)色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A，以水为流动相B，按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为每分钟0.30～0.40ml；柱温为25～35℃；检测波长为251nm。五味子醇甲与邻近色谱峰的分离度应大于1.5。
表1



(4)测定法分别精密吸取参照物溶液及供试品溶液各1.5μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。
(5)对照指纹图谱的建立将35批基地样品图谱生成AIA文件导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统进行评价，剪切5～30min图谱并生成对照图谱。
(6)评价方法供试品指纹图谱...

【专利技术属性】
技术研发人员：关彦斌，
申请(专利权)人：葵花药业集团北京药物研究院有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11